卷D201304输血科技术标准操作规程

1、文件编号：CQJY/CBT/SOP A/0重庆市第九人民医院用血质量管理体系技术性操作规程（依据GB/T19001-2008idt ISO 9001：2008编制）编 制 人： 艾 万 辉 审 核 人： 徐 育 云 批 准 人： 发布日期：2013年4月30日实施日期：2013年4月30日目 录CBT-SOP-01-2013试管法鉴定ABO血型标准操作规程3CBT-SOP-02-2013试管法鉴定RhD血型标准操作规程7CBT-SOP-03-2013微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程9CBT-SOP-04-2013盐水法交叉配血试验标准操作规程13CBT-SOP-05-2

2、013凝聚胺交叉配血试验标准操作规程15CBT-SOP-06-2013微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程17CBT-SOP-07-2013新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程20CBT-SOP-08-2013红细胞不规则抗体筛选标准操作规程24CBT-SOP-09-2013孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程27CBT-SOP-10-2013输血相容性检测室内质控标准操作规程29CBT-SOP-11-2013输血科室间质评标准操作规程32CBT-SOP-12-2013输血科试剂质量管理操作规程35CBT-SOP-13-2013输血科配制自备试剂的标准操作规程40CBT-

3、SOP-14-2013重庆市第九人民医院临床输血操作规程43CBT-SOP-15-2013细胞洗涤离心机（XTL4.7型）标准操作规程46CBT-SOP-16-2013台式低速离心机（XKA-2200型）标准操作规程48CBT-SOP-17-2013SANYO的MBR-304DR型冰箱标准操作规程51CBT-SOP-18-2013XL-200卧式血液速冻箱标准操作规程53CBT-SOP-19-2013DiaMed-ID-Incubator 37 S型孵育器标准操作规程55CBT-SOP-20-2013ID-Centrifuge 12 S卡式离心机标准操作规程56CBT-SOP-21-2013X

4、J-8血液解冻机标准操作规程57CBT-SOP-22-2013Haier的HXC-358型血库专用血液储存冰箱标准操作规程58CBT-SOP-23-2013FYQ型免疫微柱孵育器标准操作规程60CBT-SOP-24-2013TD-3A血型血清学专用离心机标准操作规程62CBT-SOP-25-2013封管热合器标准操作规程64试管法鉴定ABO血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。3、方法及原理3.1方法：试管凝集法3.2原

5、理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。4、试剂4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；4.3受检者血清或血浆；4.4受检者5%红细胞盐水悬液;5、样本采集及处理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等

6、信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交输血科。6、操作步骤6.1正定型：取洁净小试管3支，分别标明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分别加抗A，抗B和抗A+B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。6.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。6.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。7、结果判断：凝集

7、为阳性（+），不凝集为阴性（-），ABO定型结果如下表ABO正反定型结果标准血清+被检者红细胞血检者血型标准红细胞+被检者血清抗A抗B抗A+BA细胞B细胞O细胞+-+A-+-+B+-O+-+AB-8、干扰：8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。 8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集现象的

8、干扰，一般仍在室温（2024）内进行试验，37可使反应减弱。8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假阴性结果。8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。9、凝强度判断:观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：9.1 4：红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。9.2 3：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。9.32：红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。9.41：肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。9.5 ±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。9.6混合凝集视场

9、（MF,mixedfield）：镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。阴性（）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。10、质量控制：单克隆抗-A（B）试剂应在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性及效价，试剂红细胞的质控执行输血科试剂质控标准操作规程，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。11、医学解释：11.1 血以成为临床上必不可少的治疗手段。输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得

10、十分重要。11.2 肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。11.3 ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。11.4 ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现以知道中国人氛围北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。11.5 其他：如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。12、最常见的误差来源：12.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。12.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（

11、如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。新生儿脐带血中喊有华顿胶（Wharton jally）或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。12.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。12.4 血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有I抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。12.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生36个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。

12、12.6老年人血型抗体水平会下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定性错误。12.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。12.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都回自发地发生凝集。12.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较罕见）。12.10 A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。12.11由于患白血病或某些

13、恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。11.12 当用血清配制红细胞悬液时，若血清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。11.13红细胞被细菌污染。12.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。12.15 用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。12.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或

14、假阴性。12.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。12.18温度过高会造成假阴性。因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为422，如达37凝集力即下降。12.19 弄错标本、试剂、标签，或出现记录错误。13、相关文件13.1全国临床检验操作规程第三版；13.2试剂盒说明书。13.3输血科输血实验室管理程序。13.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。试管法鉴定RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。3、方法及原理

15、3.1方法：试管凝集法3.2原理：Rh 血型抗体多系不完全抗体，属IgG 型。因分子短小，与红细胞上的抗原作用后，不能使红细胞靠拢凝集。木瓜酶能破坏红细胞表面上的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞之间的排斥力，红细胞得以靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。4、试剂市售IgG型抗D标准血清；受检者5%红细胞盐水悬液。5、标本采集及处理同ABO血型检查。6、操作步骤6.1取小试管1支，用蜡笔标记，加入抗D血清1滴，再加5%受检者红细胞盐水悬液1滴，混匀，立即以1000r/min离心1min。6.2将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，

16、应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。7、结果判断：受检管凝集，表示受检红细胞上有D抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有D抗原，Rh（D）阴性。8、临床意义8.1 Rh 血型与输血。Rh 阴性患者如输入Rh 阳性血液，可刺激患者产生免疫性抗体，当第二次再接受Rh 阳性血液时，即发生溶血性输血反应。Rh 阴性妇女如孕育过Rh 阳性胎儿，当输入Rh 阳性血液时亦可产生溶血性反应，严重者可导致死亡。8.2 Rh 血型与妊娠。Rh 阴性母亲孕育了Rh 阳性胎儿后，在胎盘有小的渗漏时，胎儿血液可渗入母体血循环中，母体受到胎儿红细胞的刺激可产生相应的抗体。此种免疫性抗体能通过胎盘而破坏胎儿红细胞，如

17、果第一胎所产生抗D 抗体效价较低，一般对胎儿无明显影响。如再次妊娠Rh 阳性胎儿时，抗D 效价很快升高。此抗体通过胎盘进入胎儿体内而发生新生儿溶血病。9、质量控制：单克隆抗-D试剂应在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性及效价，具体执行输血科试剂质控标准操作规程，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。10、注意事项Rh血型系统的抗体多由获得性免疫产生，血清中很少有天然抗体，故不需要做反定型。Rh血型鉴定严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。11、相关文

18、件11.1全国临床检验操作规程第三版；11.2试剂盒说明书。11.3输血科输血实验室管理程序11.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO和RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO正反血型和RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶免疫测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异

19、反应。当抗原抗体反应，则红细胞发生凝集形成红细胞免疫复合物。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。4.2.1 ABO血型基础血型抗原与抗血清反应与A1，B细胞反应抗-A抗-B抗-A,BA1BAA+0+0+/+BB0+/+0ABAB+00OH000+/+/+4.2.2 Rh血型Rh血型系统包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。5、样本采集和处理：受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血12ml于专用管（紫色头管）内，离心分

20、离出血浆。将细胞配成0.8%的悬液备用。 6、试剂：%的生理盐水；6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2长春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3长春博迅公司的TD-3A型血型血清学专用离心机；8、操作程序：8.1工作准备：将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。准备样本，标记卡。8.1.2 0.8%样本红细胞制备：将8l压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。 将50lA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50l加到血型卡的第5-6管中。将0.8%样本红细胞分

21、别加入到血型卡的第1-4管中，各50l。将血型卡放入TD-3A型血型血清学专用离心机离心5分钟后，判断结果，并作好记录。9、结果判断： 100%的红细胞沉在微管的底部+/-100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内1+80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内2+80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内3+80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内4+凝集的细胞全部处于微管的顶部d.p.双群Hemo.溶血 4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 双群10、方法确认：10.1ABO系统抗体以外其他血型抗体可通过抗体筛查来检查。用O型细胞可检查血浆、血清样本有无其他血型抗体。方法简便，快速准确检出临床意义抗

22、体。10.2结果清楚明确，凝集在上层为阳性，沉积在下层为阴性，血型配血结果清晰明了，结果易判定。10.3结果稳定、可保存、可拍照、可存入计算机。可复检。10.4操作简明，凝胶卡中已有抗血清，加入样本细胞即可定型。避免因忘记加抗血清引起的错误。10.5可检出不完全抗体。避免了ABO以外血型抗体引起的输血反应。同时本卡不存在抗人球被中和问题，避免了费时费力的洗涤过程和假阴性。10.6样本用量少，有利于新生儿及少血液量样本的检测。10.7结果重现性好，血型配血操作可实现标准化，血型配血可自动化。11、质量控制:每批血型鉴定卡和试剂红细胞使用前进行质量确认，具体执行输血科试剂质控标准操作规程，每天常规

23、血型鉴定前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。12、注意事项：12.1每日实验前，先取出标准细胞和微柱凝胶卡，放置一段时间到室温，以防冷凝集。12.2实验前将卡离心3-4分钟。必须标注血型卡。12.3血型卡封口已损坏时，管中干涸，或有气泡时，卡不可使用。12.4红细胞浓度要在 0.8%左右，不可太浓或太稀。12.5纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样充分离心。12.6反定管先加样，以便标准细胞与血清或血浆反应。先加细胞后加血浆。12.7正反定型对照，确定结果及A亚型。正定型结果若为弱阳性，应怀疑为ABO亚型，可重做完全测试，正反

24、结果不符时，请设计实验分析。12.8质控（ctl）为阳性时，请先用生理盐水洗细胞，再做血型。12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原，血型亚型。12.10某些药物，疾病可导致弱阳性及正反定型不符。12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。12.12禁用严重溶血标本，它会强烈干扰结果的判读。严禁使用非抗凝血标本配制红细胞悬液，以免出现假阳性结果。12.13被酶处理过的红细胞会产生非特异性凝集，禁用被污染的标本和材料。12.14卡配套的专用离心机，以确保结果的准确。13、医学解释：13.1输血已成为临床上必不可少的治疗手段。输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，

25、常常威胁生命甚至造成死亡。所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得十分重要。13.2肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。13.3ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。13.4 ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现以知道中国人氛围北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。13.5其他：如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。14、相关文件14.1.全国临床检验操作规程第

26、三版；14.2试剂盒说明书。14.3 输血科输血实验室管理程序。14.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。盐水法交叉配血试验标准操作规程1、目的为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理：4.1试验方法：盐水介质配血法4.2原理：天然类血型抗体与对应红细胞抗原相遇，在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者清之间有无凝集现象，判断供血、受

27、血者之间有无ABO血型不合的情况。5、样本采集及处理 血样本为血浆（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者静脉血34ml，3000转/分离心2分钟，分离出血浆，并将红细胞配成2%盐水悬液。将供血者血样以同样方法分离血清（血浆），并配制2%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。6、操作步骤：6.1 取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）；另1支标明供血清（DS）+受血者细胞（PC）。6.2 按标记主侧管放受血者血清1滴，加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。6.3观

28、察结果：先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻侧动或轻轻弹动，观察管底反应物有无凝集（必要时用显微镜观察）。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。7、结果判断：ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血、无凝集表示无输血禁忌，可以输血。异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给少量。输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新复查血型或追查其原因。8、质量控制：每天常规实验前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。9、注意事项：9.1季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。9.2 复核血型：配血时应复核受血

29、者和供血者血型，必要时要查对以前配血记录。9.3 同型之间交叉配血不合的处理：与个别同型供血者不能配合，可另选同型供血者进行配血。当受血者与多个同型献血员配血不合时，首先要想到受血者血型鉴定有无差错，应用标准的抗A 、B 、O型人的血清和标准A 、B 、O型红细胞进行复查。其次，要注意是否为非特异性凝集，并进行确定。如果血型鉴定无误，又不能证明假阳性，则应进行ABO亚型的鉴定，选择同型的人进行输血。如为免疫性抗体造成的配血不合，要用不规则抗体筛选红细胞和（或）谱细胞检查病人的血清，确定免疫抗体的性质，选择不含与此抗体相应的抗原的红细胞进行输注。当献血者标本与多个同型受血者血标本配血不合时，主侧

30、不合应考虑献血红细胞的直接抗人球蛋白试验是否为阳性，若次侧不合应考虑献血者血浆中是否含有红细胞不规则抗体。10、相关文件10.1.全国临床检验操作规程第三版；10.2试剂盒说明书。10.3 输血科输血实验室管理程序。10.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。凝聚胺交叉配血试验标准操作规程1、目的为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理4.1试验方法：凝聚胺介质配血法4.2原理：针对不规则抗

31、体的检出及鉴定多采用红细胞的凝聚反应试验，而凝聚反应试验的成效则与分布红细胞表面之电荷以及抗体的亲和性息息相关。凝聚胺法是利用低离子介质（LIM）来降低介质的离子强度，进而减少红细胞之间距，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体发生特异性结合；接着加入凝聚胺（polybrene）此种多价阳离子聚合物来中和红细胞上的阴性电荷，使细胞间发生非特异性凝聚；最后加入重悬液，使之中和由凝聚胺所引起之非特异凝聚，倘若没有凝聚发生，则判定为阴性；若有凝集，则得知存在特殊性之抗原抗体反应，则判定为阳性。5、样本采集和处理同盐水交叉配血试验。6、试剂： 贝索的试剂盒：1) 低离子溶液（LIM）2) 聚凝胺溶液（PO

32、LYBRENE）3) 悬浮液（RESUSPENDING）7、操作步骤7.1 取试管两支,分别标明主次侧管,主侧管加入受血者血清两滴,再加入25%献血者红细胞悬液1滴,次侧管反之。7.2每支试管中加入0.7mlLIM液,混匀;再各加入2滴POLYBRENE液,混匀。7.3 3400转离心10秒，弃上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。7.4轻摇试管，目测红细胞有无凝集，若无凝集则必须重作。7.5加2滴resuspeneing液，轻摇试管混合并同时观察结果。8、结果判断立即目测并镜检观察凝集状态。如果30秒内凝集散开，代表是由polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。若凝集不散开

33、，则为红细胞抗原抗体结合的特异性凝集，配血结果不相合。若反应可疑，可进一步用显微镜观察。9、质量控制：每天常规实验前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。10、注意事项10.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。10.2 若病人血清含肝素多，如洗肾患者，则应加入双倍量的Polybrene液和肝素。10.3试剂使用前，应恢复室温再做。10.4在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而导致假阳性结果出现。若有怀疑，建议在最后滴加RESUSPENDING液时将试管立即置于370C水浴中,轻轻转动试管混合,

34、并在30秒内观察结果。11、相关文件11.1.全国临床检验操作规程第三版；11.2试剂盒说明书。11.3 输血科输血实验室管理程序。11.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程1、目的为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理4.1试验方法：凝胶测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗

35、体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。5、样本采集和处理受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血34ml于专用管（紫色头管）内，分离出血浆。红细胞配成0.8%的悬液，供血者血样以同样方法分离血浆，并配制0.8%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。 6、试剂：6.1 0.9%的生理盐水；6.2戴安娜合血卡；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2DiaMed-ID Incubator 37 S 温育器；7.3DiaMed-ID Centrif

36、uge 12 S8、操作程序：8.1工作准备：生理盐水室温平衡。准备样本。标记合血卡。8.1.2 0.8%-1%样本红细胞制备：加25l样本压积红细胞悬浮液于2ml戴安娜2号稀释液中。于1号管中（主侧）加入50l献血者红细胞（0.8%）。25l受血者血浆或血清。8.1.4 2号管中（次侧）加入50l受血者红细胞（0.8%）。25l献血者血浆或血清。8.1.5 37孵育15分钟。 离心10分钟。判断结果，并作好记录。9、结果判断：1+至4+为抗人球配血不相容；（0）为配血相容，可以输注。10、医学解释：ABO交叉配血试验是检查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原和抗体成分的试验。其目的是发现AB

37、O血型的不规则抗体；发现ABO血型以外的配血不和合，防止因错误定型所致的输血事故。是安全输血的根本保证。11、质量控制：每天常规实验前先做室内质控（具体执行输血科室内质量控制的标准操作规程），结果在控后方可将常规检查的报告发出。12、注意事项：12.1含抗体的新鲜血清，如补体尚有活性，遇相应红细胞抗原，可发生溶血现象，其意义与凝集相同。12.2可以用含EDTA的血浆代替血清使用。 12.3每日实验前，先取出2号稀释液及标准细胞，放置一段时间到室温，以防冷凝集。12.4实验前将卡离心3-4分钟。必须标记合血卡。12.5合血卡封口已损坏时，管中干涸，或有气泡时，卡不可使用。12.6必须用2号稀释液

38、保证反应结果可靠，细胞浓度要在 0.8%左右，不可太浓或太稀。12.7纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样离心。12.8液体应加在反应卡反应室中。12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原抗体反应，弱凝集。12.10某些药物、疾病可导致血液不配合。12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。13、最常见的误差来源：13.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。13.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。新生儿脐带血中含有华顿胶（Wharton jally）或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。1

39、3.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。13.4血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有I抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。13.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生36个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。13.6老年人血型抗体水平回下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定性

40、错误。13.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。13.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都回自发地发生凝集。13.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较罕见）。13.10A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。13.11由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。13.12当用血清配制红细胞悬液时，若血

41、清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。13.13红细胞被细菌污染。13.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。13.15用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。13.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。13.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。13.18温度过高会造成假阴性。因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为422，如达37凝集力即下降。13.19弄错标本、试剂、标

42、签，或出现记录错误。14、相关文件14.1.全国临床检验操作规程第三版；14.2试剂盒说明书。14.3 输血科输血实验室管理程序。14.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据输血实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过

43、滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K 2抗凝血34ml,24小时内送检。将不抗凝血离心分离出血清备用。6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1) XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)

44、DiaMed-ID Incubator 37 S 温育器；3) DiaMed-ID Centrifuge 12 S7.5操作程序：婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1) 取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。2) 在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50l。3) 将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。4) 结果观察：5) 阳性

45、：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。6) 阴性：在微管底部形成密集的细胞扣。 患儿红细胞抗体放散试验7) 患儿红细胞用大量生理盐水洗涤三次，取压积红细胞1ml左右，加等量的生理盐水混匀。8) 将上面备好的红细胞悬液置57的水浴箱中振荡10分钟后取出，立刻以2000转/分离心2-3分钟。9) 吸上层红色液体（即放射液）于清洁试管中备用。10) 分别取标准红细胞用稀释液配成0.8%的悬液，然后在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，分别加入50l备好的标准红细胞悬液，并于各孔均加入25l放散液。11) 在戴安娜孵育器上孵育15分钟后于戴安娜离心机上离心10分钟后

46、观察结果。12) 结果判定阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。阴性：在微管底部形成密集的细胞扣。红细胞放散液抗体检测结果判读试剂红细胞意义OAB-+-放散出IgG抗A-+放散出IgG抗B-+放散出交叉反应性抗体或IgG抗A和抗B（或抗AB抗体）-未放散出抗体+/-+/-放散出不规则抗体（ABO以外抗体）患儿血清中游离抗体测定13) 取患儿不抗凝血离心，吸取血清血备用。14) 分别取标准红细胞用稀释液配成0.8%的悬液，然后在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，分别加入50l备好的标准红细胞悬液，并于各孔均加入25l患儿血清。15) 在戴安娜孵育器上孵育

47、15分钟后于戴安娜离心机上离心10分钟后观察结果。16) 结果判定：血浆游离抗体检测结果判读试剂红细胞意义ABO+-游离的IgG抗A-+-游离的IgG抗B+-游离的IgG抗AB（交叉反应性抗体）-无游离IgG抗体-/+-/+游离的不规则抗体（ABO以外抗体）8、结果分析：根据三项实验结果综合判断ABO新生儿溶血病（排除O细胞阳性情况）直抗试验游离试验放散试验结 论-不能证实为由血型免疫性抗体引起的HDN+-可以证实为HDN-+-可疑为HDN-+可以证实为ABO HDN+-+可以证实为ABO HDN+-可以证实为ABO HDN-+可以证实为ABO HDN+可以证实为ABO HDN9、注意事项：9

48、.1母亲检出的IgG类红细胞血型抗体，如在新生儿红细胞上缺乏相应的抗原，则与HDN无关。9.2患儿血清及红细胞放散液中检出了IgG类红细胞血型同种抗体，且患儿红细胞表达相应的红细胞血型抗原、抗体特异性与母体血清中红细胞血型抗体特异性一致，可明确诊断为HDN。9.3当母亲患有IgG抗体自身免疫溶血性疾病时，IgG抗体可进入胎儿体内引起贫血，患儿DAT也可为阳性，检测母亲DAT为阳性有助于鉴别。9.4鉴定患儿血型时应注意“遮断现象”影响鉴定结果，如患儿为RhD阳性且红细胞D抗原已完全被来自母体的IgG抗-D饱和，DAT呈阳性，用IgM抗-D鉴定RhD血型可出现假阴性，此时可用温和的热洗脱法解决Rh

49、D血型鉴定困难问题。9.5当新生儿ABO血型鉴定有困难时，可以根据其父母的血型推测新生儿血型（作为参考）。9.6使用脐血标本检测ABO血型不合HDN阳性率较高，部分阳性患儿并不出现明显的溶血表现。9.7一旦怀疑为HDN时，宜尽早采集血标本检测。7天后采集的血标本阳性率明显降低，也有部分HDN患儿出生2周后仍可检出阳性结果。10、相关文件10.1.全国临床检验操作规程第三版；10.2试剂盒说明书。10.3 输血科输血实验室管理程序。10.4临床输血质量管理指南田兆嵩主编。红细胞不规则抗体筛选标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞规则抗体筛选的技术操作，确保检测结果准确及临床输血安全有效，依据输血

50、实验室管理程序条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科红细胞规则抗体筛选的操作技术的规范化管理。3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。4、试验方法及原理：不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，多数为免疫性抗体（IG性质），输血前受血者体内若发现此类抗体，应输入无对应抗原的红细胞，以避免抗原抗体反应，引起溶血性输血反应。若产妇体内发现此类抗体，则应确定其效价并观察其效价变化，以避免其引起新生儿溶血病的发生。目前不规则抗体筛查是采用已知抗原表型的O型试剂红细胞，在不同温度下、采用不同介质筛查被检血清中有无有临床意义的不规则抗体。常用的方法有

51、盐水凝集试验、聚凝胺试验、抗人球蛋白试验、酶试验等。本科根据本科实际情况采用盐水凝集试验、聚凝胺试验、抗人球蛋白试验筛查不规则抗体。其反应原理同配血试验。5、样本采集和处理取受检者不抗凝血3ml（若不知受检者血型，应同时抽 EDTA-K 2抗凝血1ml）及时送检。6、实验程序：6.1盐水介质法筛选红细胞不规则抗体试剂：生理盐水，、号不规则抗体筛选细胞（0.5-0.8%的浓度）仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，电热恒温水浴箱。操作程序：取小试管4支，分别加入受检者血清2滴（100L），然后在前三管中分别加入、号筛选细胞试剂各1滴，在第四管中加入3%的自身对照红细胞1滴，混匀后，根据需要（4，室

52、温，37）放置数分钟，用血型专用离心机以1000rpm离心1分钟，轻轻侧动试管，观察结果。结果判断：凝集强度观察同盐水配血试验，自身对照及、管均无凝集者表明未检出红细胞不规则抗体；四管均凝集表明受检者血清（血浆）中含自身抗体或同时伴有同种免疫性红细胞不规则抗体；若自身对照无凝集而、管中至少有1管凝集出现表明受检者血清（血浆）中含有同种免疫性红细胞不规则抗体。本实验的盐水法若出现凝集表示受检者体内有IgM型的不规则抗体存在。6.2凝聚胺法筛选红细胞不规则抗体试剂：生理盐水；、号不规则抗体筛选细胞（0.5-0.8%的浓度）；贝索的试剂盒：低离子溶液（LIM），聚凝胺溶液（POLYBRENE），悬浮

53、液（RESUSPENDING）。仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机；普通离心机。操作步骤：盐水介质法筛查红细胞不规则抗体结束后可转做凝聚胺试验，具体方法如凝聚胺配血法。结果判断：凝集强度观察同凝聚胺配血试验，自身对照及、管均无凝集者表明未检出红细胞不规则抗体；四管均凝集表明受检者血清（血浆）中含IgG自身抗体或同时伴有IgG同种免疫性红细胞不规则抗体；若自身对照无凝集而、管中至少有1管凝集出现表明受检者血清（血浆）中含有IgG型的同种免疫性红细胞不规则抗体。6.3微柱凝胶抗人球蛋白法筛选红细胞不规则抗体试剂：生理盐水，、号不规则抗体筛选细胞（0.5-0.8%的浓度），博迅的不规则抗体筛查卡。仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机。操作程序：微柱凝胶抗人球蛋白法筛选红细胞不规则抗体的具体方法如微术凝胶配血法，具体操作如下：1）将准备好的检测卡做好标记；2）将0.5-0.8%、筛检红细胞各50µl分别加入对应的微管中; 3）将待检者血清各50µl分别加入、微管中；4）37孵育15分钟；5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）。6.3.4结果判断：凝集强度观察同微柱凝胶配血试验，结果判断同凝聚胺法。7、质量控制