药物分析第3章药物的鉴别

1、第三章第三章 药物的鉴别药物的鉴别 光谱鉴别法光谱鉴别法2色谱鉴别法色谱鉴别法3其它鉴别法其它鉴别法4化学鉴别法化学鉴别法1 概概 述述目的：鉴别药物真伪。目的：鉴别药物真伪。化学反应化学反应仪器分析仪器分析测定物理测定物理常数常数综合分析综合分析药物鉴别特点药物鉴别特点已知物确证已知物确证试验试验1鉴别试验为鉴别试验为个别分析，个别分析，非系统分析非系统分析2通常采用不通常采用不同方法鉴别，同方法鉴别，综合分析综合分析3原料药鉴别项下原料药鉴别项下试验项目为试验项目为3 34 4有的仅有的仅1 12 2个，个，制剂鉴别项目一制剂鉴别项目一般比原料药少般比原料药少4药物鉴别方法药物鉴别方法化学

2、鉴别法化学鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法其它鉴别法其它鉴别法第一节第一节 化学鉴别法化学鉴别法Ch.P、USP一般鉴别试验一般鉴别试验不同的称号不同的称号JP、BP定性反应定性反应一、一般鉴别试验（一、一般鉴别试验（general identification test） （一）概念、特点及试验项目（一）概念、特点及试验项目l以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物真伪的。通过化学反应来鉴别药物真伪的。 l无机药物：根据其组成的阴离子和阳离子的特无机药物：根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应，并以药典附录殊反应，并以

3、药典附录III项下的一般鉴别试验项下的一般鉴别试验为依据。为依据。l有机药物：采用典型的官能团反应。有机药物：采用典型的官能团反应。l一般鉴别试验的项目（一般鉴别试验的项目（2015版药典有版药典有35项）。项）。l一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物。一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物。l一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物，如为一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时，数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时，除另有规定外，均不适用。除另有规定外，均不适用。 l通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药

4、物。不能证实是哪一种药物。 合合适适试试剂剂气体产生气体产生荧光出现荧光出现沉淀生成沉淀生成颜色改变颜色改变真伪真伪药物有效成分的有无判断药物有效成分的有无判断衍生物熔点衍生物熔点1、干法、干法 l 将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。 l （1）焰色试验：常用干法。利用某些元素所具有）焰色试验：常用干法。利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。 l 方法：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在方法：取铂

5、丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。l （2）加热分解：在适当的温度条件下，加热使供）加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。试品分解，生成有特殊气味的气体。2、湿法、湿法 l 系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。色、沉淀、气体、荧光等。（1）显色反应鉴别法）显色反应鉴别法l 系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定系指供试品溶液中加入适

6、当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：鉴别试验中最为常用的反应类型有：l 1）三氯化铁呈色反应）三氯化铁呈色反应酚羟基或水解后产生酚酚羟基或水解后产生酚羟基；羟基； l 2）异羟肟酸铁反应）异羟肟酸铁反应多为芳酸及其酯类、酰胺多为芳酸及其酯类、酰胺类；类； l 3）茚三酮呈色反应）茚三酮呈色反应脂肪氨基；脂肪氨基；l 4）重氮化）重氮化-偶合显色反应偶合显色反应芳伯氨基或能产生芳伯氨基或能产生芳伯氨基；芳伯氨基；l 5）氧化还原显色反应及其它颜色反应。）氧化还原显色反应及其它颜色反应。（2）沉淀生

7、成反应鉴别法）沉淀生成反应鉴别法 常用的这类反应有：常用的这类反应有：l 1）与重金属离子的沉淀反应）与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；l 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； l 3）其它沉淀反应。）其它沉淀反应。（3）荧光反应鉴别法）荧光反应鉴别法 常用的荧光发射形式有以下类型：常用的荧光发射形式有以下类型：l 1）药物本身可在可见光下发射荧光；）药物本身可在可见光下发射

8、荧光；l 2）药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发）药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；射荧光；l 3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；l 4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。经其它反应后，发射荧光。 （4）气体生成反应鉴别法）气体生成反应鉴别法l 1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；（胺）气；l 2）化学结构中含硫的药物，可

9、经强酸处理后，加）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；热，发生硫化氢气体；l 3）含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；）含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。醇可产生乙酸乙酯的香味。 橙黄到猩橙黄到猩红色沉淀红色沉淀供试品供试品稀盐酸稀盐酸1ml0.1mol/L亚硝酸钠亚硝酸钠碱性碱性-萘酚试液萘酚试液NH2R+HNO2H+RN+N+OHNNROHNaOH加三氯化铁加三氯化铁试液试液1 1滴滴即显紫色即显紫色供试品供试品加稀盐酸加稀盐酸即析出白色即析出白

10、色水杨酸沉淀水杨酸沉淀分离沉淀分离沉淀在醋酸铵试液中溶解在醋酸铵试液中溶解l 取供试品的中性溶液，加三氯化铁取供试品的中性溶液，加三氯化铁试液，即生成赭色沉淀；加稀盐酸，变试液，即生成赭色沉淀；加稀盐酸，变为白色沉淀。为白色沉淀。 l 取供试品，置干燥试管中，加硫酸取供试品，置干燥试管中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在试管内壁凝结成白色升华物。试管内壁凝结成白色升华物。 铂丝铂丝盐酸盐酸无色火焰中燃烧无色火焰中燃烧供试品供试品中性溶液中性溶液醋酸氧铀锌试液醋酸氧铀锌试液火焰即显鲜黄色火焰即显鲜黄色发生黄色沉淀发生黄色沉淀白色沉淀白色沉淀分离分离沉淀不

11、溶解沉淀不溶解供试品溶液供试品溶液白色沉淀白色沉淀分离分离沉淀溶解沉淀溶解加入氯化钡试液加入氯化钡试液加入醋酸铅试液加入醋酸铅试液二、专属鉴别试验（二、专属鉴别试验（specific identification test） 根据每一种药物化学结构的差异及其所根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。是证的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。是证实某一种药物的依据。实某一种药物的依据。 第二节第二节 光谱鉴别法光谱鉴别法一、紫外光谱鉴别法一、紫外光谱鉴别法 1、原理、特点及适用范围、原理、特点及适

12、用范围l 原理：有机药物具有能吸收紫外可见光的基团，原理：有机药物具有能吸收紫外可见光的基团，则显示特征的吸收光谱，不同结构的物质可产生则显示特征的吸收光谱，不同结构的物质可产生不同的紫外可见吸收光谱不同的紫外可见吸收光谱l 特点：具有一定的专属性，仪器普及率高，操作特点：具有一定的专属性，仪器普及率高，操作简单，应用范围广。缺点是光谱较简单，曲线性简单，应用范围广。缺点是光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于状变化不大，专属性小于IR。l 适用范围：含有适用范围：含有芳环或共轭双键芳环或共轭双键的药物在紫外光区的药物在紫外光区有特征吸收，含有生色团和助色团的药物在可见光有特征吸收，含有生色

13、团和助色团的药物在可见光区有吸收。区有吸收。2、常用的方法、常用的方法l 对比吸收曲线一致性对比吸收曲线一致性 l 对比最大吸收波长和相应吸光度的一致性对比最大吸收波长和相应吸光度的一致性l 对比吸收系数的一致性对比吸收系数的一致性l 对比最大、最小吸收波长和相应吸光度比值的一致对比最大、最小吸收波长和相应吸光度比值的一致性经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。性经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。l对比最大吸收波长和同时测定最小吸收波长对比最大吸收波长和同时测定最小吸收波长的一致性的一致性l规定一定浓度的供试品在最大吸收波长处的规定一定浓度的供试品在最大吸收波长处的吸收度吸收度

14、 l规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收系数法 l规定吸收波长和吸收度比值法规定吸收波长和吸收度比值法二、红外光谱鉴别法二、红外光谱鉴别法l特点：能反映出药物分子的结构特点，专特点：能反映出药物分子的结构特点，专属性强，准确率高。不单独使用本方法进属性强，准确率高。不单独使用本方法进行鉴别。行鉴别。l方法：标准图谱对照法方法：标准图谱对照法l试样制备方法：压片法、糊法、膜法、溶试样制备方法：压片法、糊法、膜法、溶液法液法 第三节第三节 色谱鉴别法色谱鉴别法进行进行鉴别鉴别比移值比移值Rf保留时间保留时间色谱鉴别法色谱鉴别法l原理：不同物质在不同色谱条件下，产生各原理：不同物质在不同色谱条

15、件下，产生各自的特征色谱行为。与对照品在相同条件下自的特征色谱行为。与对照品在相同条件下进行色谱分离，并比较其保留行为和检测结进行色谱分离，并比较其保留行为和检测结果是否一致来验证真伪。果是否一致来验证真伪。l方法：方法：（1）薄层色谱鉴别法）薄层色谱鉴别法l在实际工作中，一般采用对照品（或标准品）在实际工作中，一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品斑点的比较法，要求供试品斑点的Rf值应与对照品值应与对照品斑点一致。斑点一致。 （2）高效液相色谱鉴别法和气相色谱鉴别法）高效液相色谱鉴别法和气相色谱鉴别法l一般规定按供试品含量测定项下的高效液一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进

16、行试验。要求供试品和对照相色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。含量测定方品色谱峰的保留时间应一致。含量测定方法为内标法时，可要求供试品溶液和对照法为内标法时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物峰的保留时间比值应相同。峰的保留时间比值应相同。 (Rf的最佳范围的最佳范围0.3-0.5,可用范可用范围围0.2-0.8)薄层色谱法薄层色谱法比移值比移值(Rf)定性参数定性参数原点到斑点中心距离原点到斑点中心距离原点到溶剂前沿距离原点到溶剂前沿距离Rf=ll0原点原点 l l0 0l l1 1l l2 2前沿前沿1、2

17、样品样品 3标准品标准品前沿前沿原点原点 1.5-2.0cm2.0cm1 2 30.5-1.0cmhW1/2 0.5h0.607hW0tt0tRl 鉴别试验条件鉴别试验条件（一）溶液的浓度（一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。如化学法中要观察沉淀、颜色；影响结果的判断。如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中法中max, A、（二）溶液的温度（二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。观察不到结果。%11cmE （三）溶液的酸碱度（三）溶液的酸碱度 使反应物处于活化状态、反应产物处于稳定可使反应物处于活化状态、反应产物处于稳定可以观察状态。以观察状态。 （四）试验时间（四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。时间和条件。 （五）