小鼠肝脏线粒体的超活染色及观察

1、小鼠肝脏线粒体的超活染色与观察摘要本次实验通过运用 Janus green B 对小鼠的肝脏细胞迚行体外超活染色,运用 Janus green B被氧化后变为蓝色的原理,在光学显微镜下原位观察小鼠肝细胞中线 粒体的形态及分布。关键词Ringer 溶液 超活染色 Janus green B前言一 . 实验材料及方法1.1 实验材料显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载 玻片、盖玻片、表面皿,吸管、牙签、吸水纸, Ringer 溶液, 1%、 1/5 000詹纳斯 绿 B 溶液1.2 实验方法二 . 实验结果及分析2.1 实验结果图 1. 超活染色后的肝细胞与红细胞(10

2、x40最后在 10×40显微镜下观察到肝细胞内含有一些被染成浅蓝色的小点,分 布呈圆形,靠近细胞膜。肝细胞内线粒体被詹纳斯绿试剂染成蓝色,因染色时 间不足的原因,染色不够明显,线粒体呈现浅蓝绿色。2.2 实验分析活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方 法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生 任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的 细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,通常把活体染色分为体内活染 与体外活染两类,体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内,染料的 胶粒固

3、定、堆积在细胞内某些特殊结构里,达到易于识别的目的。体外活染又 称超活染色,它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸 染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、 堆积在细胞内某些特殊的部分, 主要是染料的 “电 化学“特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面 带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之 间就収生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用,应选择那 些对细胞无毒性或毒性极小的染料,而且总是要配成稀淡的溶液来使用;一般 是以碱性染料最为适用,可能因为它具有溶解在类脂质 (如卵磷脂、胆固

4、醇等 的特性,易于被细胞吸收。詹纳斯绿 B(Janus green B和中性红 (neutral red两种碱性 染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。三 . 实验补充詹纳斯绿 B 是一种活体染色剂, 专一用于线粒体的染色。 它可以和线粒体中 的细胞色素 C 氧化酶结合,从而出现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料 保持氧化状态 (即有色状态 呈蓝绿色 , 而在周围的细胞质中染料被还原 , 成为无 色状态。必须指出的是,只有具有活性的细胞色素 C 氧化酶才能够把詹纳斯绿 B 氧化,从而使它显出颜色,因此,在实验过程中务必保持所取的材料的活性。 通常,需要把生物材料置于04的冰水浴低温中,并且操作要迅速。 中性红是一种弱碱性 pH 指示剂,变色范围 pH6.48.0之间(由红变黄 。在 中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于 液泡在一般情况下呈酸性反应,因此,迚入液泡的中性红便解离出大量阳离子 而呈现樱桃红色,在这种情况下,原生质和细胞壁一般不着色;死细胞由于原 生质变性凝固,细胞液不能维持在液泡内,因