分离纯化蛋白质的方法及原理_第1页
分离纯化蛋白质的方法及原理_第2页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、分离纯化蛋白质的方法及原理（一）利用分子大小1 1、透析：原理：利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质 如无机盐、单糖、水等分开。方法：将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行涉及的问题：如何加快透析过程（1 1）加大浓度差，及时更换透析液（2 2）利用磁力搅拌器常用的半透膜：玻璃纸、火棉和其他材料合成2 2、超过滤：原理：利用压力和离心力，强行使其他小分子和水通过半透膜，而蛋白质 留在膜上3 3、凝胶过滤层析：原理：当不同分子大小的蛋白质混合物流进凝胶层析柱时，比凝胶 网孔大的分子不能进入珠内网状结构，排阻在凝胶珠以外，在凝胶珠缝隙间隙中向下 移动。而比孔小的分子不同

2、程度地进入凝胶珠内，这样由于不同大小分子所经历的路 径不同而到分离。结果：大分子先被洗脱下来，小分子后被洗脱下来（二）利用溶解度差别4 4、等电点沉淀：原理：不同蛋白质具有不同的等电点，当蛋白质混合物调到其中一 种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来. .。5 5、盐析与盐溶 ：原理：低浓度时， 中性盐可以增加蛋白质溶解度这种现象称为盐溶 当离子强度增加，足够高时，例如饱和或半饱和程度，很多蛋白质可以从水中沉淀出 来，这种现象称为盐析（三）根据电荷不同6 6、 SDS-PAGESDS-PAGE 全称 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理：通过加热和 SDSSDS 可以使蛋白质变

3、性，多亚基的蛋白质也解离为单亚基，处理后的样品中肽链是处于无二硫键连接的，分离的状态。电泳时SDS-SDS-蛋白质复合物在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而主要取决于蛋白质分子量。 所以SDS-PAGESDS-PAGE 常用来分析蛋白质的纯度和大致测定蛋白质的分子量。7 7、离子交换层析：原理：氨基酸分离常用阳离子交换树脂，树脂被处理成钠型，将 混合氨基酸上柱，氨基酸主要以阳离子形式存在，在树脂上与钠离子发生交换，而被 挂在树脂上。氨基酸在树脂上结合的牢固程度取决于氨基酸与树脂之间的亲和力， 决定亲和力的 因素有：（1 1）主要是静电吸引力 （2 2）氨基酸侧链同树脂之间的疏水作用 氨基酸与阳离子交换树脂间的静电引力大小次序依次是：碱性氨基酸 R2+R2+中性氨基酸 R+R+酸性氨基酸 R0R0。因此洗脱顺序应该是：酸性氨基酸 中性氨基酸 碱性氨基酸为使氨基酸从树脂上洗脱下来采用逐步提高 pHpH 和盐浓度的方法2、忍别人所不能忍的痛，吃别人所别人所不能吃的苦，是为了收获得不到的收获。就像驴子面前吊着个萝卜就会往前走。正因为有

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 信息产业

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论