规模猪场猪瘟免疫失败调查及免疫程序优化

1、规模猪场猪瘟免疫失败调查及免疫程序优化 原霖基金项目：北京市生猪产业技术体系创新团队（GWZJ-2009-05）作者简介：原霖（1982-），男，硕士，主要从事动物传染病诊断的研究，E-mail：通讯作者：顾小雪，E-mail： 顾小雪 张硕 汪葆玥 胡冬梅 李晓霞 遇秀玲 翟新验 田克恭 （中国动物疫病预防控制中心，北京，100125）摘要：本研究主要是调查规模猪场猪瘟的免疫效果，选取北京市3个规模猪场，每场随机抽取10头仔猪分别在25、60和90日龄采血分离血清，检测猪瘟抗体。A、B、C三个猪场的母源抗体阳性率分别为100%、50%、0%；二次免疫后抗体阳性率分别为10%、90%、90%。

2、由于猪场A猪瘟免疫失败，对其免疫程序进行了优化，将首免时间推迟至50日龄。优化免疫程序后二次免疫后抗体阳性率达到70%。结果表明，母源抗体阳性率直接影响猪瘟疫苗对仔猪的免疫效果，仔猪母源抗体降至50%左右进行猪瘟免疫可取得比较理想的结果。本研究为规模猪场结合仔猪母源抗体水平制定合理猪瘟免疫方案提供了较好的参考。关键词：规模猪场；猪瘟；免疫失败；免疫程序Survey of immune failure of classical swine fever in pigs on large-scale pig farms and optimization of immunity procedureYU

3、AN Lin，GU Xiao-xue，ZHANG Shuo，WANG Bao-yue，HU Dong-mei，LI Xiao-xia，YU Xiu-ling，ZHAI Xin-yan，TIAN Ke-gong（China Animal Disease Control Centre，Beijing，100125）Abstract：The objective of this study is to investigate immune status of classical swine fever( CSF) in large-scale pig farms. 3 large-scale pig

4、farms in Beijing were chosen. Blood samples were collected from 10 piglets for each farm on 25、60 and 90-day-old individually, following to be tested antibody titers to CSFV. The positive rates of maternal antibodies to CSFV in 3 pig farms（A、B、C）were 100%，50%，0%. The positive rates of antibodies to

5、CSFV after the second vaccination in 3 pig farms（A、B、C）reached 10%，90%，90%。In light of immune failure in pig farm A, optimization of the immunity procedure was conducted. The date of initial administration was postponed to 50-day-old. The positive rates of antibodies to CSFV after the second immuniz

6、ation were 70%. The results showed that the maternal antibody level directly influenced immune efficiency of CSF. The available result is to be obtained when piglets are vaccinated with a drop of 50% in positive rate of maternal antibody to CSFV. This study provides valuable references for the formu

7、lation of optimized immunity procedure.Keywords: large-scale pig farm；classical swine fever；immune failure；immunity procedure猪瘟（classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种以高热、出血为主要特征的烈性、高度接触性传染病，是危害我国养猪业最严重的疫病之一。OIE将其列为必须报告的疫病1，我国将其列为一类动物疫病。由于我国实行了猪瘟强制免疫政策，猪瘟疫情总体上得到了控制。但是近年来由于非典型猪瘟、温和性猪瘟造成的持续隐性感染，以及

8、免疫程序不合理等因素的影响常常导致猪瘟疫苗免疫失败，给各猪场带来极大的风险。本研究对北京3个规模猪场20110日龄商品猪猪瘟疫苗免疫后的抗体水平进行了连续监测。根据监测结果，分析了猪瘟疫苗免疫失败的原因，优化了免疫程序，为规模猪场制定符合本场情况的免疫方案提供了参考依据。1 材料与方法1.1 试验材料 试验猪场（A、B、C）为北京市3个规模猪场，试验猪为20110日龄，采用常规方法采血并分离血清。猪瘟疫苗采用某公司生产的猪瘟脾淋苗。猪瘟抗体检测试剂为美国IDEXX猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒，批号：V731，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。酶标仪为TECAN公司的SUNRISE酶标仪，

9、购自东胜创新公司。1.2 猪场原免疫程序 仔猪25日龄左右进行首免，60日龄左右进行二免；母猪配种前免疫，每次免疫剂量为1头份。1.3 原免疫程序下的猪瘟抗体检测从3个规模猪场不同产房随机抽取10头仔猪，记录耳标号分别于约25日龄（一免前）、约60日龄（一免后30天）、约90日龄（二免后30天）分别采血分离血清，采血后第二天进行免疫。用猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒进行猪瘟抗体检测，结果以抗体阻断率表示。1.4 优化免疫程序后的猪瘟抗体检测 根据3个规模场免疫后检测的抗体水平，对猪瘟疫苗二免后抗体阳性率低于70%的场所用免疫程序进行调整。按照调整后免疫程序进行采血分离血清，用猪瘟抗体阻断EL

10、ISA检测试剂盒进行猪瘟抗体水平检测，结果以抗体阻断率表示。1.5 ELISA试剂盒结果判定 抗体检测程序按照试剂盒说明书进行。结果以阻断率（blocking%）计算。Blocking%= （阴性对照平均OD450值-样品的OD450值）/阴性对照平均OD450值。Blocking%40%判为阳性，30%判为阴性，之间为可疑。2 结果2.1 原免疫程序下的猪瘟抗体检测结果 猪场A仔猪，一免前抗体阳性率为100%（10/10），一免后30天抗体阳性率下降至30%（3/10），二免后30天抗体阳性率下降至10%（1/10），详见表1。猪场B仔猪，一免前抗体阳性率为50%（5/10），一免后30天抗

11、体阳性率上升至60%（6/10），二免后30天抗体阳性率上升至90%（9/10），详见表2。猪场C仔猪，一免前抗体阳性率为0%（0/10），一免后30天抗体阳性率上升至80%（8/10），二免后30天抗体阳性率上升至90%（9/10），详见表3。免疫前母源抗体阳性率最高的A场，二免后抗体阳性率最低；相反免疫前母源抗体阳性率最低的C场，一免后抗体阳性率即达到80%；B场母源抗体阳性率居中，抗体稳步上升，二免后上升至90%，详见图1。表1 A猪场猪瘟抗体阻断率结果编号采血时间25日龄（一免前）60日龄（一免后30天）90日龄（二免后30天）191.55%56.59%34.57%±291.

12、95%64.53%31.38%±341.83%10.18%38.51%±490.06%36.68%±40.74%591.00%44.17%6.77%692.50%33.29%±9.59%792.34%62.87%12.04%891.24%28.21%6.77%992.82%34.57%±-12.42%1072.22%-3.65%-11.82%注：采血后1天进行猪瘟疫苗免疫。“”：阳性，“±”：可疑，“”：阴性。 表2 B猪场猪瘟抗体阻断率结果编号采血时间25日龄（一免前）60日龄（一免后30天）90日龄（二免后30天）121.78%5

13、6.21%78.02%269.69%40.78%51.34%380.74%56.21%68.11%468.98%36.68%±51.24%522.34%20.42%22.31%632.52%±42.51%58.16%726.56%34.57%±81.21%876.72%40.78%50.09%973.64%62.04%57.35%103.30%12.61%63.23%注：采血后1天进行猪瘟疫苗免疫。“”：阳性，“±”：可疑，“”：阴性。表3 C猪瘟抗体阻断率结果编号采血时间25日龄（一免前）60日龄（一免后30天）90日龄（二免后30天）1-7.04%5

14、1.66%76.97%2-9.67%25.86%79.04%3-11.10%50.70%70.31%4-19.83%57.23%80.90%5-15.24%68.37%81.64%6-5.08%59.35%81.12%7-0.56%70.74%78.60%83.05%64.98%78.01%92.52%62.23%80.82%102.90%11.65%17.51%注：采血后1天进行猪瘟疫苗免疫。“”：阳性，“±”：可疑，“”：阴性。图1 A、B、C三猪场猪瘟抗体阳性率2.2 免疫程序优化后的猪场A猪瘟抗体检测结果 由于猪场A二免后猪瘟抗体阳性率下降至10%，猪瘟疫苗免疫失败，所以对猪

15、场A的免疫程序进行了调整，将免疫时间推迟约20天，即50日龄左右进行首免、80日龄左右进行二免。分别于50日龄，80日龄（一免后30天），110日龄（二免后30天）采血分离血清。检测结果表明，一免前抗体阳性率为30%（3/10），一免后30天抗体阳性率上升至50%（5/10），二免后30天抗体阳性率上升至70%（7/10），达到国家规定的70%群体免疫合格率。详见表4。表4 免疫程序进行优化后A猪场猪瘟抗体阻断率结果编号采血时间50日龄（一免前）80日龄（一免后30天）110日龄（二免后30天）121.78%20.98%31.54%±259.69%24.35%70.52%310.74

16、%67.70%72.35%468.08%0.35%34.63%±520.24%40.32%65.89%611.52%71.39%78.76%726.76%50.71%66.01%876.72%13.73%30.74%±913.24%70.64%74.17%103.00%20.98%71.00%注：采血后1天进行猪瘟疫苗免疫。“”：阳性，“±”：可疑，“”：阴性。3 结论与讨论3.1不同猪场猪瘟免疫情况分析 从本试验选取的3个规模猪场仔猪猪瘟抗体水平发现：尽管A、B、C 3个猪场采用相同的疫苗和免疫程序，但是由于一免以前抗体（母源抗体）水平不同导致猪瘟疫苗免疫后抗体

17、水平存在很大差异。猪场A因在母源抗体水平很高的情况下进行猪瘟疫苗免疫导致免疫失败，而优化免疫程序推迟首免时间至母源抗体水平下降后，二免后抗体阳性率可达群体免疫保护水平。猪场B一免前母源抗体水平在50%，一免后达到60%，二免后达到了90%抗体水平。猪场C一免前母源抗体阳性率为0%，一免后即可达到80%，二免后达到90%。其中，B场是临床上比较普遍的情况，采取常规免疫程序可取得很好的免疫保护效果。A场和C场的情况在规模猪场比较少见。经进一步调查发现猪场A在1年前暴发过猪瘟疫情，母猪均为当时发病后耐过的猪，一旦出现A场的情况，免疫后仔猪抗体水平低于群体免疫保护水平，猪场随时面临大规模暴发猪瘟的危险

18、，应筛查淘汰带毒母猪并及时调整免疫程序。猪场C的母猪在产前进行过猪瘟免疫，出现上述状况可能是由于疫苗失效或其他原因引起，如果出现C场的情况，母猪和初生仔猪存在均无猪瘟抗体保护的“空窗期”，猪场也面临巨大风险，应对母猪及时补免，对仔猪进行超前免疫。3.2 仔猪母源抗体对猪瘟疫苗免疫的影响 本试验所用的猪瘟抗体ELISA试剂盒（IDEXX）检测的抗体效价与猪瘟中和抗体呈一定的相关性2-3。母源抗体较高时接种疫苗会致使一部分疫苗毒被母源抗体中和因而常造成免疫效果不佳。检测结果表明仔猪母源抗体在50%左右进行免疫可取得比较理想的免疫效果。罗勇等2010年用ELISA（IDEXX）监测了仔猪猪瘟母源抗体

19、消退过程：仔猪在7日龄时猪瘟母源抗体水平最高为67.0%，21日龄抗体下降至51.5%，28日龄为43.9%，35日龄为38.5%4。李儒曙等2007年同样用ELISA（IDEXX）法探究仔猪猪瘟母源抗体消长规律5，他们所获得的结果与本研究所得结果基本相符。马强等 6，吴家强等7，蔡葵蒸等8，采用不同检测方法对猪瘟母源抗体消长情况进行了检测，结果与本试验存在一定差异，可能是由于检测方法不同或猪场实际情况存在差异导致。3.3 猪瘟免疫程序的确定 近年来各地均有猪瘟免疫失败的报道，很多猪场技术人员和研究者在研究和论证最佳的猪瘟首免日龄和免疫程序。本试验的结果表明，临床大部分猪场均符合B场的情况采取20、50日龄或30、60日龄进行两次猪瘟疫苗免疫即可取得很好的免疫保护效果。但是所有猪场都“一刀切”式采用相同的猪瘟免疫程序可能导致个别养殖场的猪瘟免疫失败。各养殖场应定期进行猪群抗体监测，结合仔猪母源抗体和免疫后抗体消长情况评估免疫效果，及时调整免疫方案，最终确定适合自身情况的免疫程序。参考文献1 OIE .Manual of Diagnos