产高温蛋白酶高温菌的筛选_图文

1、第23卷第4期2004年12月武汉工业学院学报Journal of Wuhan Polytechnic University Vol. 23No. 4Dec. 2004 收稿日期:2004-09-21作者简介:刘军(1966- , 男, 湖北省南漳县人, 博士。文章编号:1009-4881(2004 04-0022-02产高温蛋白酶高温菌的筛选刘军(武汉工业学院生物与化学工程系, 湖北武汉430023摘要:利用平板透明圈法, 从堆肥、土壤中筛选到88种产高温蛋白酶的高温菌, 筛选平板上都产生明显的蛋白水解透明圈。高温菌的耐热机制、, 。关键词:高温菌; 高温蛋白酶; 筛选中图分类号:Q0引言蛋

2、白酶是一类常用的工业和研究用酶。它在洗涤剂、制革脱毛、生丝脱胶、有机合成、酒类澄清、明胶及蛋白胨生产、肉质嫩化、医葯等方面广为应用, 在酶制剂市场占65%的份额1。目前, 工业上所用的蛋白酶主要是常温酶。高温蛋白酶由于具有显著的热稳定性及其对有机溶剂、去垢剂和变性剂较强的抗性而在蛋白酶应用的各个领域显示出极大的潜力2。上世纪五、六十年代国外学者已开始了高温菌产高温蛋白酶的研究, 至今已有许多这方面的报道。国内对高温菌的研究起步较晚, 到八十年代才有复旦大学、中科院北京微生物研究所和云南省微生物研究所三家单位较具规模。对高温菌产蛋白酶的研究更少, 所筛选到的菌株产高温蛋白酶的能力也不高, 所报道

3、的高温蛋白酶主要来自嗜热脂肪芽孢杆菌25。因此, 应当加快产高温蛋白酶高温菌的研究, 继续筛选产高温蛋白酶的优良菌株, 扩大产高温蛋白酶菌种的来源。我们开展了产高温蛋白酶的高温菌的筛选, 从堆肥、土壤等样品中筛选产高温蛋白酶的高温菌, 得到了一些产高温蛋白酶的高温菌株。1材料与方法111培养基11111酪素培养基2, 3蛋白胨1%, 葡萄糖011%,NaCl 015%,CaCl 20101%,L 2Tyr 0101%, 琼脂118%, 酪素015%,p H 712714, 113, 灭菌30min 。用于菌种分离。11112P YS 培养基2酵母膏014%, 蛋白胨018%, NaCl 013

4、%, 琼脂118%, p H712714, 121, 灭菌30min 。用于菌种保藏。112土样从堆肥、菜地等环境采集土样, 用于产高温蛋白酶高温菌的分离。113产高温蛋白酶高温菌的筛选将土样按110(g/v 的比例加入无菌蒸馏水中, 充分振荡后, 静置。上清液作适当比例稀释, 取015ml 涂酪素平板。平板用透明胶带封口, 并且在培养箱里放置装有水的烧杯, 以防止培养基干裂。65下培养。观察菌落生长情况及菌落周围蛋白水解透明圈产生情况。挑取生长良好且能产生透明圈的菌落, 接种至P YS 斜面培养基上保存。2结果与讨论我们从不同地方的堆肥、土壤中采集土样, 筛选产高温蛋白酶的高温菌。结果得到8

5、8种产高温蛋白酶的高温菌株。这88种菌株在含有酪素的筛选平板上产生明显的蛋白水解透明圈, 如图1所示, 其透明圈直径与菌落直径比(R 见表1。 表1产高温蛋白酶高温菌产生的蛋白水解透明圈直径与其菌落直径比值 菌株编号R菌株编号R41088118图1115到410之间; 个别菌株该值比较大, 比如10、17、30、65, 它们的透明圈直径与菌落直径之比分别达513,613,615,8。透明圈直径与菌落直径之比可作为判断菌株产酶能力大小的初步指标。这些产酶高温菌的获得为进一步研究高温菌的耐热机制、高温酶的热稳定性机理等理论问题及高温蛋白酶的应用, 奠定了基础。3结论通过透明圈法, 从堆肥、土壤中筛

6、选到88种产高温蛋白酶的高温菌, 这些菌株在酪素筛选平板上都产生明显的蛋白水解透明圈。这些产酶高温菌的获得为进一步研究高温菌的耐热机制、高温酶的热稳定性机理等理论问题及高温蛋白酶的应用, 奠定了基础。参考文献:1Rao MB ,Tanksale AM , Ghat ge M , et al 1Molecular and Biotechnological Aspect s of Microbial Proteases J 1Microbiology and MolecularBiology Reviews , 1998, 62(3 :597-63512戴玄, 唐兵, 陈向东, 等1产高温蛋白酶微

7、生物菌种资源的研究J 1微生物学杂志,1997, 17(3 :25-28. 3刘军, 陈向东, 彭珍荣1分离嗜热脂肪芽孢杆菌单个菌落的方法J1微生物学通报,1998, 25(5 :302-303. 4唐兵, 周林峰, 陈向东, 等. 嗜热脂肪芽孢杆(下转第33页 个站点都能接收到实时视频的要求。本文中笔者开发的N ELL DVS2000数码视讯系统在实际应用中已取得了很好的效果。随着计算机技术、视频技术、控制技术、通信技术的发展, 多媒体网络监控系统的应用前景必然十分广阔。THE DESIG N AND REA LIZATION OF A MU LTI MEDI ANETWORK SURVEI

8、 LLANCE SYSTEMF EN G Hong 2cai , C H EN Yon g 2qi an g , D U X i ao 2qi n(Depart ment of Co mp uter and Information Engineering ,Wuhan Polytechnic University ,Wuhan 430023,China Abstract :From two sides of hardware and software ,t his paper has expatiated on t he design p rinciple , and int roduced

9、t he design scheme of a kind of multimedia network surveillance system , is base on network. Through analyzing all kinds of data stream in t , t he t he main f unction of all kinds of hardware in detail , and t f software module.Key words ure ;software module (上接第23J1微生物学报, 2000, 40(2 :188-192.5Wu J

10、 , Bian Y , Tang B , et al 1Cloning andanalysis ofWF146Protease ,ANovelThermop hilic Subtilisin -like Protease wit h Four Inserted Surface Loop s J 1FEMS Microbiol Lett , 2004, 230(2 :251-258.SCREE NI NG OF THE STRAI NS PRODUCI NGTHERMOPHI LIC PROTEASESL I U J un(Department of Biotechnology and Chem

11、ical Engineering ,Wuhan Polytechnic University ,Wuhan 430023,China Abstract :Eighty 2eight strains for producing thermophilic proteases were obtained f rom compost and soil. They all formed transparent squares in casein plates. The results established the foundation for studying the thermophilic mec

12、hanisms of thermophiles and thermophilic proteases ,and for utilizing thermophilic proteases. K ey words :thermophile;thermophilic proteases ;screening(上接第26页CREATI NG AND SI MU LATI NG A HEAT E NERGY MODE L FOR A SERIES QUE NCH MACHI NEX I E Zhao 2hong(Depart ment of Electrical and Information Engineering ,Wuhan Polytechnic U niversity ,Wuhan 430023,China Abstract :Bycreating a heat energy model for a series quench machine , and using it for comp uter simulation ,t his paper offered a met hod to find