细菌的简单染色_第1页
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文档简介

1、实验四 细菌的单染色法实验目的：1、熟悉显微镜的使用方法与保养。2、掌握细菌单染色标本的制作。实验材料： 1、葡萄球菌、大肠杆菌1824h培养物。2、载玻片、接种环、酒精灯、生理盐水、染色液等。3、0.5吕氏亚甲蓝或1：10稀释的石炭酸复红。实验原理： 由于细菌微小、无色半透明，所以必须进行染色，以增加反差，才能在光学显微镜下看清楚。只用种染料染色的方法叫单染色法，单染色法只能显示细菌的形态、排列，不能显示细菌结构，不能鉴别细菌。由于细菌在中性、弱碱性环境中大多带正电荷，故易与带负电荷的碱性染料结合，如亚甲蓝、结晶紫、碱性复红等。实验方法：1、标本片的制作1) 涂片：取一张洁净的载玻片，用接种

2、环取一环生理盐水于载玻片的中央；将接种环在酒精灯上灼烧灭菌、冷却后，无菌操作挑取取少许细菌培养物，然后在有生理盐水的玻片上磨开，涂成直径1cm的薄膜。2) 干燥：在空气中自然干燥，必要时可将涂片膜面向上，小心间断地在弱火高处略烘，以助水分蒸发，但切勿紧靠火焰，以免涂膜烤枯，防止菌体变形。3) 固定：干燥后，手持已干燥标本片一端，标本面向上，在酒精灯上方温度最高处来回过3次，使菌体固定于玻片上。固定的目的是将细菌杀死，使细菌粘附在玻片上，染色时不容易脱落，同时改变菌体对燃料的通透性，使菌体蛋白变性易着色，增强染色效果。2、染色将载玻片平放于载玻片支架上，滴加染液覆盖涂菌部位即可，吕氏碱性美蓝1.5min，草酸铵结晶紫染液或齐氏石炭酸复红染液1min。倾去染液，自来水冲洗，水流不宜过急、过大，无直接冲涂片处，至洗出水无色为止。吸水纸吸去多余水分，干燥（同上），镜

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