外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用

1、外用中药【白芷香肤保健液】对黑色素产生过程中酪氨酸酶的抑制作用摘要目的：通过测定【白芷香肤保健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其治疗黑色素增多性疾患的机制。方法：实验于20040I05在福建中医学院毒理实验室完成，采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。结果：【白芷香肤保健液】在高(250 gL)、中(200 gL)、低(150 gL)3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率和t值分别是：高组9758，5897；中组9632，5925；低组9614，6006。其抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。与对照组比较，差异有显著性意义(P<0001)。结论：【白

2、芷香肤保健液】治疗黑色素增多性皮肤病的主要机制是抑制酪氨酸酶的活性。主题词：黄褐斑；外用药(白芷香肤保健液)；一元酚单氧酶0 引言黄褐斑是一种慢性难治性色素代谢增多性皮肤病。近年来的国内外研究资料表明黄褐斑的病因与体内氧化与抗氧化平衡失调、内分泌失调、皮损区微生态失衡、机体微量元素含量异常、血液流变学改变以及紫外光照射、口服避孕药等因素有关。在治疗上，现代医学主要以化学脱色为主，如用氢醌、壬二酸、维甲酸、酚化合物等。一般需半年以上见效，且复发率高，并有造成永久脱色和药源性褐黄斑之弊心-。由于酪氨酸酶是黑色素产生过程中的重要催化酶，控制其活力即可控制黑素生成的量。因此，本研究通过测定【白芷香肤保

3、健液】对酪氨酸酶的抑制率，揭示其作用机制，为用于治疗黑素增多性疾患提供科学的实验依据。1材料和方法设计：以细胞为研究对象，重复观察测量的验证性研究。单位：一所中医学院中药教研室。材料：实验于20040I05在福建中医学院毒理实验室完成，实验室等级为二级。仪器：752紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司，分析仪器总厂)。试剂：蘑菇酪氨酸酶(tyrosinaseEC1，14，18，1)；DL一多巴(DLB一3，4-dopa)。上述两种试剂均购自美国Sigma公司。药物：药物来源：【白芷香肤保健液】组方中药材，均购自福建中医学院国医堂(药材来源于福州市药材站)。经福建中医学院中药鉴定教研室金

4、琪漾教授(原中国中医药学会中药鉴定专业委员会副主任委员)鉴定，符合中华人民共和国药典规定。方药组成：当归、山茱萸、山楂、甘草、食用白米醋等。中药制备方法：中药复方饮片打成粗粉(40目)后，称取粉末25 g于具塞三角瓶中加食用白米醋100 mE(福州民天集团公司生产，产品批号：20030305A)混匀，分别浸泡60，50，40，30，20 d 5瓶，隔天震摇1次。分别过滤上清液，制得浓度为250 gL的药液(每100 mL白米醋中含原生药25 g)。再用白醋稀释，将中药生药终浓度设定为高(250 gL)、中(200 gL)、低(150 gL)3个不同浓度供试。设计、实施、评估者：研究设计者为第一

5、作者，实施干预者为全部作者，评估者为第一作者。方法：酪氨酸酶活性测定方法：采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性。反应混合物与体积见表1。测定时，用移液管按表1所示体积，分别准确吸取A，B，C，D 4组反应液的前3种于10 mL容量瓶中，摇匀，置37水浴中保温10 min，取出后加入15 gLDL一多巴2 mL，于2，3，4，5，6，7，8，9 min时用分光光度计测定吸光度(A475)值。以磷酸缓冲液为空白，以不加药物的反应组为对照，分别测定酪氨酸酶的活性。每次实验重复3次，取平均值，最后按下式计算酪氨酸酶的抑制率：酪氨酸酶的抑制率()=(AB)一(CD)】(AB)X 100，A：未

6、加中药的加酶混合液所测的吸光度。B：未加中药亦未加酶混合液所测的吸光度。c：加中药和酶的混合液所测的吸光度。D：加中药而未加酶的混合液所测的吸光度。主要观察指标：主要结局：检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性。次要结局：检测【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶的抑制率。统计学分析：采用SPSS 100由福建中医学院统计学教研室进行数据处理，行组间双侧t检验。2结果【白芷香肤保健液】在高、中、低3个浓度对蘑菇酪氨酸酶的活性均有很强的抑制作用。最高抑制率达9758。【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用，随药物浸泡时间和浓度的增加而增强。【白芷香肤保健液】对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用与对照

7、组比较，差异有显著性意义。(P<0001)，见表2。3讨论黑色素形成机制I 31：在黑色素细胞内，酪氨酸经酪氨酸酶催化形成多巴，多巴去氢后形成多巴醌，后者重新排列成5，6一醌吲哚，其发生聚合后与黑素体内的结构蛋白结合形成黑素蛋白即黑色素。黑色素合成后，从黑色素细胞输送到角阮细胞，并随角阮细胞的成熟而弥散到表皮各层，最后随表皮脱落而消失。因jt-L，酪氨酸酶是皮肤黑色素生物合成的主要限速酶。若要人为地阻止(皮肤)色素的沉着，就应改善色素细胞中酪氨酸酶的代谢，限制酪氨酸向黑色素转化，抑制酪氨酸酶的活性。现代医学对色素增多性疾病治疗的疗效欠佳、副作用较大和中医药治疗的疗效较好、副作用较小，使得

8、不少学者进行了中药对磨菇酪氨酸酶活性影响的较大规模筛查H，“，并在此基础上开展了以鼠黑素瘤细胞和动物模型的少量实验研究哺，。但总体上单味中药研究多，复方中药研究少。目前的复方研究决大部分限于中医常用于治疗黄褐斑的古方、经典方。如：六味地黄丸、逍遥丸、桃红四物汤、肾气丸、补中益气汤等，研究水平还处于验证疗效阶段。研究发现六味地黄丸中熟地、丹皮使酪氨酸酶活性增高；茯苓、淮山、山茱萸使酪氨酸酶活性降低。泽泻醇提物使酪氨酸酶活性增高；水提物则降低。提示：组方应注意协同作用；提取溶剂的不同也可能造成疗效的差异。而从表2中可以看出：【白芷香肤保健液】是一种高效的酪氨酸酶抑制剂，在本实验过程中用肉眼即可看见

9、加入【白芷香肤保健液】的反应混合物组颜色快速变浅，统计学处理发现在反应3 min时最为显著，说明其降低黑色素生成的作用很强，因此抑制率高达9758。这一结果既从一个角度揭示了【白芷香肤保健液】治疗黄褐斑的机制是：抑制酪氨酸酶的活性；也从另一方面证明了【白芷香肤保健液】组方用药、溶剂选择的合理性。首先【白芷香肤保健液】的组方是以中医活血、补肾、祛斑、增自理论为治疗大法，以中药现代药理基础为选药原则，充分发挥中药相须、相使的协同配伍，选择既能活血、补肾、祛斑、增白又有降低酪氨酸酶活性的药物如当归、山茱萸、山楂、甘草等组成新的复方；并以历代公认的美白药食两用佳品白醋为溶剂。因为中医认为"1

10、：醋有散瘀，止血、解毒、杀虫的功效。现代研究发现食醋含有多种有机酸(如：醋酸、乳酸、琥珀酸等)、氨基酸、维生素和微量元素等。食醋可以美容护肤，因其所含的醋酸、乳酸、氨基酸、甘油和醛类化合物对人的皮肤有柔和的刺激作用，能使血管扩张，增加皮肤的血液循环，使皮肤光泽；作为溶剂可促进药物的透皮吸收。同时食醋还可抑制体内过氧化脂质产生，延缓衰老。这些特性都与黄褐斑的病因：抗氧化平衡失调；机体微量元素含量异常；血液流变学改变密切相关。此外，在对【白芷香肤保健液】的相关研究中发现，【白芷香肤保健液】组方药物中含有丰富的微量元素Zn，Mn，Se和多种氨基酸(另文报道)。【白芷香肤保健液】对黄褐斑的治疗作用也与其所含微量元素和多种氨基酸有关。微量元素增强了机体抗氧化能力，调整元素的失衡；而氨基酸改善了皮肤的营养状况，促进新陈代谢，增强黑色素的淡化过程。诸因素的协同功用，使其对影响身心健康的黑色素增多性皮肤病产生了良好的临床疗效。但中药的活性成分很多，究竟是何种成分在起主导作用，【白芷香肤保健液】是否还