气活血方药对D半乳糖拟衰老大鼠免疫器官质量及大脑皮层SOD

1、气活血方药对D半乳糖拟衰老大鼠免疫器官质量及大脑皮层SOD、MDA的影响【摘要】 目的 探讨益气药、活血药在抗衰老过程中发挥的不同作用及机制。方法 通过腹腔注射D半乳糖（Dgal）建立大鼠衰老模型，同时模型给药组按不同剂量灌饲中药。50 d后处死检测其胸腺、脾脏的重量，大脑皮层超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果 与模型组相比给药各组胸腺和脾脏重量均有增加(P0.05)。与模型组相比各给药组均显著提高大脑皮层SOD活性(P0.01)，降低MDA的含量(P0.01)，但作用有差别。结论 益气药、活血药在延缓衰老中发挥的作用各有侧重，合理剂量、共同使用效果最佳。 【关键词

2、】  益气活血方药；衰老；免疫；SOD；MDAEffect of Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation on the weights of immune organs and the levels of SOD, MDA of cortex of aged ratsLIU Fang, JIN Hong, ZHANG YunZhi.Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, Shaanxi, China    【Ab

3、stract】Objective  To observe the impact of the Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation on playing different roles about antiaging and to investigate its mechanisms. Methods  The model groups were established by abdomen injection with Dgal. At the same time, the model dosage

4、groups were administered with Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation according to different dosage. After treatment 50 d, the weights of spleen and thymus glands were tested, and the levels of SOD and MDA of cortex were measured. Results  The weights of spleens and thymus glands

5、 of rats in the dosage groups were increased compared with those in the model group  (P0.05).Compared with those of the model group, the levels of SOD were elevated more greatly (P0.01) and the levels of MDA were decreased(P0.01) in the dosage groups, but the function was different. Conclusions

6、  Benefiting Qi drug and Activating Blood drug plays the different role in the antiaging aspect, using the two kinds of medicine together in a proper dosage is more potent than using only one kind.    【Key words】Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation; Aging; Immun

7、ity; SOD; MDA“气血失调，气虚血瘀”致衰老学说是近年来传统医学提出的关于衰老机制的新学说。此学说一经提出受到了医学界的广泛关注，一些学者也作了大量的相关研究，无论从动物实验还是临床实验都证明益气活血方药能够改善机体各系统器官的功能状态从而延缓衰老1。本研究根据此学说“益气活血”的治则和中医“以药效证”的原理，通过拆方，选择益气、活血的代表药物作用于D半乳糖（Dgal）拟衰老大鼠模型，观察两种辨证在延缓衰老过程中发挥的作用，探讨益气活血法抗衰老的机制并为科学组方提供理论依据。1  材料与方法1.1&nb

8、sp; 动物 雄性健康SD大鼠，3月龄（体重200250 g），SPF级（由复旦大学实验动物中心提供，许可证号：SDXK沪20020002）。将大鼠随机分为空白组模型组益气药大剂量组益气药小剂量组活血药大剂量组活血药小剂量组益气活血大剂量组益气活血小剂量组，每组8只。1.2  试剂 药物：人参、黄芪、丹参、川芎（上海顺天堂药业有限公司提供）。试剂：Dgal（美国Sigma公司生产，购于上海捷贝思基因技术有限公司）；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒（购于南京建成生物工程研究所，批号：20050607）。1.3  方法1.3.1 

9、; 药物制备 益气药：人参、黄芪水提，制成浓缩液（1 ml=1 g生药材），4贮存备用。活血药：川芎、丹参，用75%浓度的乙醇回流提取1,回收乙醇，制成浓缩液(1 ml=1 g生药材),4贮存备用。益气药+活血药：人参、黄芪水提；川芎、丹参用75%浓度的乙醇回流提取，回收乙醇。合并浓缩液（1 ml=1 g生药材）,4贮存备用。Dgal溶液的制备:在天平上称量Dgal，用生理盐水溶解配成5% Dgal溶液。1.3.2  模型制备 组：腹腔注射生理盐水0.1 ml/100 g,连续50 d；组：腹腔注射5% Dgal生理盐水溶液，1 ml/100 g体重,1次/d,连

10、续50 d；组：在组基础上，同时用制备好的益气药大剂量（4.44 g·kg-1·d-1）,益气药小剂量（0.74 g·kg-1·d-1），活血药大剂量（3.91 g·kg-1·d-1），活血药小剂量（0.65 g·kg-1·d-1），益气活血大剂量（8.34 g·kg-1·d-1），益气活血小剂量（1.39 g·kg-1·d-1）灌胃,每10天测体重1次，调整灌胃剂量，连续50 d。1.3.3  胸腺、脾重量的测定&n

11、bsp;最末1次给药2 h后处死实验大鼠，摘取胸腺、脾脏电子天平称重。1.3.4  大脑皮层SOD、MDA的测定 在冰台上剥取大脑皮层，用冷生理盐水冲洗标本，用冷匀浆介质研磨配成组织匀浆，按试剂盒所述操作。1.4  统计学处理 数据以x±s表示，显著性检验用方差分析（多个样本均数的两两比较），用SPSS10.0统计软件处理。2  结  果2.1  胸腺、脾脏重量的测定 与模型组相比给药各组胸腺和脾脏重量均有增加(P0.05)。其中益气药加活血药的大剂量组的作用明显优于其他给药组(P0.01)。见表1。

12、2.2  大脑皮层SOD、MDA的测定 与模型组相比各给药组均显著提高大脑皮层SOD活性(P0.01)。其中小剂量的益气药加活血药的作用优于大剂量(P0.05)，其余各给药组之间作用无差别(P0.05)。说明单独使用益气药或活血药均有一定的提高机体SOD活性的作用，但其效果不如二者同时使用显著。与模型组相比给药各组均能降低机体MDA的含量(P0.01)，但作用有差别，其中益气药加活血药的作用优于其他药物组，益气药加活血药的小剂量组比大剂量组明显，其他各给药组之间统计学上作用无差别。见表1。表1  各组胸腺、脾脏重量、大脑皮层SOD、MDA的测定(略)3 讨 论&n

13、bsp;   胸腺是免疫系统的中枢器官，对维持细胞免疫和调解免疫反应起重要作用。机体的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫都和脾脏有密切关系。胸腺和脾脏的功能都和其质量呈正相关性,且有增龄性萎缩的变化，模型组胸腺、脾脏的变化与此相符。因此，动态监测胸腺和脾脏的质量可用于机体免疫功能的评价2。通过该实验对比观察发现益气药和活血药在“益气活血”法延缓衰老中发挥着不同效用，益气药对免疫器官的影响大于活血药，主要表现为使胸腺、脾脏增重明显。益气活血药合用的效果优于单独使用益气药。益气活血药对免疫器官的增重作用表明二者对提高免疫力，延缓衰老有明显效果。益气活血药对

14、免疫功能的影响主要表现为细胞免疫还是体液免疫有待进一步的研究。    大鼠大量连续注射Dgal，可出现与自然衰老相似的改变，并证实Dgal诱发的自由基氧化应激损伤是拟衰老的主要原因，可引起体内尤其是脑组织内自由基含量升高3。大脑皮层SOD、MDA可以反映大脑自由基产生和老化程度，从而反映大脑的功能状态。实验表明，模型组大鼠大脑皮层SOD活性降低，MDA含量升高，说明衰老大鼠确实存在自由基代谢紊乱，抗氧化系统功能降低，氧化产物增加。单独使用益气药或活血药对提高SOD活性，减少MDA的作用都不如二者共同使用效果明显，且小剂量的益气加活血药比大剂量作用强。这说明适当的剂量才能使抗氧化与氧化系统达到平衡，方药中为加大疗效一味增加君药剂量是不可取的。其机制可进一步从细胞分子水平分析。    总之，合理适量搭配益气、活血药可以提高机体免疫力，改善自由基代谢从而达到延缓衰老的目的。由于衰老是机体复杂综合的生理现象