胶束电动毛细管色谱法测定半夏等药材中苯甲酸的含量

1、胶束电动毛细管色谱法测定半夏等药材中苯甲酸的含量作者：曹艳， 黄必胜， 王平 ， 陈科力【关键词】 半夏；,掌叶半夏；,水半夏；,苯甲酸,；,胶束电动毛细管色谱法摘要：目的建立胶束电动毛细管电泳色谱法(MECC)测定半夏及其同科其它品种药材中苯甲酸的含量的方法。方法用MECC法对样品进行分析。毛细管柱内径75 m，长62.5 cm；运行电压25 kV，检测波长200 nm，分离温度35；冲液为30 mmolL1，SDS30 mmolL1硼酸15甲醇（pH值9.5）；压力进样，进样时间3 s。结果苯甲酸在0.0442.2 mg/ml浓度范围内具有良好的线形关系（ r0.9994）， 平均回收率为

2、96.7% (RSD=2.4%, n=6), 对半夏及其同科属其它品种共14个样品中的苯甲酸含量进行了测定。结论该方法快速、简便、并且较为准确，可供评价半夏等品种质量时参考。关键词：半夏； 掌叶半夏； 水半夏； 苯甲酸 ； 胶束电动毛细管色谱法Abstract：ObjectiveThe method of micellar electrokinetic capillary chromatography（MECC）was established to determine the contents of benzoic acid in Rhizoma Pinelliae and several R

3、hizomes from other Araceae species; MethodsThe samples from rhizomes of P. ternana and other species of Araceae were analyzed by MECC; The Capillary column was 62. 5 cm long and 75 m in internal diameter; The operation voltage 25 kV ; test wavelength 200 nm; column temperature 35 ; the mobile buffer

4、 was 30 mmolL1 SDS30mmolL1 boric acid 15% methyl alcohol (pH 9. 5); The sampling was conducted by pressure, the sampling time was 3 seconds. ResultsThe linear range of determination for benzoic acid was 0. 0442.2 mg/ml (r =0. 999 4). The average recovery rate was 96.7%(cv =2.4%,n =6). The contents o

5、f benzoic acid in the 14 samples from P. ternana and other species of Araceae were determined. ConclusionThe method is fast, simple, convenient, comparatively accurate, and can be used to refer when appraising quality of Rhizoma Pinelliae and several species.Key words：Pinellia ternana; Pinellia peda

6、tisecta; Typhonium flagelliforme; Benzoic acid; MECC半夏为天南星科植物半夏Pinellia. ternata (Thunb.) Breit.的块茎，是常用中药，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效1。半夏含有苷类、酚类、甾醇类、生物碱类以及有机酸如琥珀酸、苯甲酸等成分。半夏中的有机酸是活性部位之一，何凌云等2曾用薄层扫描法对半夏药材中琥珀酸的含量进行了测定；我们也曾采用HPLC法对半夏中琥珀酸进行含量测定（中国医院药学杂志待发表）。毛细管电泳法是一种灵敏度较高的含量测定法，本文探索应用MECC法对半夏中所含另一种有机酸苯甲酸进行含量测定。天

7、南星科中有一些中药材为半夏的易混品，如掌叶半夏、水半夏等与半夏的形态、结构、功效较为类似，均含有琥珀酸、苯甲酸等成分，因而也一并进行测定。苯甲酸的含量测定已有多种方法报道，如：薄层扫描法3、气质联用法4、HPLC法5等。本文建立了MECC法对半夏等中药中苯甲酸进行含量测定的方法。现报道如下。1 仪器与材料1.1 高效毛细管电泳仪Beckman Coulter P/ACETM MDQ Capillary Electrophoresis System，配有二极管陈列检测器。熔融石英毛细管（内径75m，总长度62.5 cm，有效长度50 cm，河北永年光学纤维厂生产）；数据处理软件系统：32kara

8、t 5.0。试剂：十二烷基硫酸钠（SDS）分析纯，硼酸分析纯，甲醇色谱纯，实验用水为双蒸水。1.2 对照品苯甲酸，分析纯（标示纯度为99.5），武汉有机化工厂，批号20040212。1.3 材料药材样品的来源见表1。药材样品来源和苯甲酸含量，药材及其原植物标本均经作者鉴定。样品于80烘箱中干燥1 h，粉碎后过40目筛，置干燥器中备用。2 方法与结果2.1 MECC分析条件毛细管柱为无涂层熔融石英毛细管，75m（ID）62.5 cm。背景冲液：30 mmolL1 SDS30 mmolL1 硼酸15甲醇，用浓氢氧化钠调 pH值9.5。进样方式：压力进样，进样时间3 s。运行电压25 kV，检测波长

9、200 nm，分离温度35。毛细管冲洗方法：新毛细管在使用前用1MNaOH冲洗30 min，然后依次用实验用水和背景冲液冲洗10 min。每日开始工作前用0.5MNaOH冲洗毛细管柱5 min，然后分别用水和背景冲液冲洗10 min。每次分析间隔，用背景冲液冲洗5 min。在该色谱条件下, 苯甲酸对照品和半夏样品的色谱图见图1图2，半夏等样品中其它组分不干扰苯甲酸的测定。2.2 标准曲线及线形范围精密称取苯甲酸对照品若干，用甲醇定容，分别配制成0.044，0.059，0.27，1.35，2.2 mg/ml共5个浓度梯度的标准溶液。用0.45 m微孔滤膜过滤并超声脱气后，各依次分别进样3 s，进

10、行分析，以峰面积为纵坐标（Y）对浓度横坐标（X）进行回归积分处理。结果表明在0.0442.2 mg/ml浓度范围内对照品峰面积与浓度呈良好的线形关系。Y=137 490+68 485X, r0.999 4。表1 药材样品来源和苯甲酸含量（略）图1 苯甲酸对照品色谱图（略）图2 01号半夏样品色谱图（略）2.3 样品供试液的制备精密称取各样品粉末约1 g，加入95乙醇20 ml，浸泡1 h，超声30 min，抽滤，将滤液中乙醇挥干，甲醇定容至5 ml，作样品液备用。2.4 精密度实验取0.27 mg/ml的对照品溶液，连续进样，峰面积分别为156 075，156 642，159 870，147

11、962，149 986。RSD=2.9。2.5 对照品重现性实验取0.27 mg/ml的对照品溶液，于0，2，4，6，8 h进样，峰面积分别为156 075，149 986，154 232，148 996，160 123。RSD=3.0，表明该对照品在8 h内稳定性良好。2.6 样品重现性实验取1号样品液，于0，2，4，6，8 h进样，峰面积分别为196 018，191 350，199 885，189 876，193 268。RSD=2.0，表明样品液在8 h内稳定性良好。2.7 回收率实验精密称取6份样品（8号样），分别准确加入一定量的苯甲酸对照品溶液，按照2.3项下方法制备供试品溶液，测定

12、并计算回收率。结果加样提取回收率分别为94%，98%，94.6%，95.6%，101.0%，97.2%，平均回收率为96.7%，RSD=2.4%。2.8 样品测定结果 先后测定了各种样品中苯甲酸的含量，结果见表1。测定结果表明野生半夏药材的苯甲酸含量一般较高。3 讨论3.1 由于苯甲酸微溶于水，因此使用毛细管区带电泳方式（CZE），难以使其分离，需采用胶束增溶，即采用毛细管胶束电动色谱法（MECC），让溶质在水相和胶束相间分配系数不同而得到分离。3.2 分析条件的选择 进样时间的选择尤为重要，应参考样品供试液与背景电解质的电导率匹配情况，如果两者不匹配会导致峰形畸变。通过尝试不同的电压、pH值、温度等相关因素，最终确定了MECC分析条件：电压25Kv、温度35、pH值9.5，进样时间3 s，且样品分离较好。参考文献：1 国家药典委员会.中国药典S.北京：化学工业出版社，2005：78.2 何凌云，吴 皓，沈 红，等.薄层扫描法测定不同产