高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定毛冬青药材中Ilexgen

1、高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定毛冬青药材中Ilexgenin A的含量        【摘要】     目的建立毛冬青药材中Ilexgenin A的高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）的含量测定方法。 方法采用Lichrospher-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5m)，流动相为乙腈0.1%醋酸溶液（6040），流速1 ml/min，蒸发光散射检测器：漂移管温度96，气体流速2.1 L/min。结果Ilexgenin A在0.

2、714.5g浓度范围内线性关系良好，r = 0.999 7（n = 6）。平均回收率为100.32 %，RSD = 1.38 % (n = 6)。结论本法操作快速、准确，可作为毛冬青药材中IlexgeninA的质量控制方法。     【关键词】  毛冬青 Ilexgenin A 高效液相色谱-蒸发夹散射检测    Determination of Content of Ilexgenin A in Ilex Pubescens by HPLC-ELSDCHENG Xinju， LI Jiaping， YU

3、AN Haiming，  WU Di，ZENG Xianyi Jiangxi Medicinal Research Institute, Nanchang  330029, ChinaAbstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the determination of content of Ilexgenin A in Ilex Pubescens .MethodsLichroshper-C18 (4.6 mm×250 mm，5m) column was used in HPLC with

4、 mobile phase Acetonitrite-0.1%Acetic acid (6040). The flow rate was 1mlmin, an evaporative light-scattering detector was used and the parameters were set as follows: drift tube temperature was 96 and gas flow rate was 2.1 L/min .ResultsThe linear range of Ilexgenin A is from 0.7 14.5g, r=0.9997（n=6

5、）.The average recovery is 100.23%，RSD = 1.38% (n = 6).ConclusionThis method is rapid and accurate. It can be used for quality control on Ilexgenin A of Ilex Pubescens.Key words：Ilex Pubescens ;   Ilexgenin A ;   HPLC-ELSD ;   Determination of content    毛

6、冬青药材为冬青科冬青属植物毛冬青Ilex pubescens Hook et Arm 的干燥根。功能清热解毒，活血通脉，消肿止痛。用于治疗风热感冒、肺热咳喘、冠心病、血栓闭塞性脉管炎。其生长在南方地区，为江西省道地中药材的一种，含有大量皂苷活性成分物质1，2。在毛冬青药材的质量标准研究中，我们首次用高效液相色谱-蒸发光散射检测器的分析方法对其中的一个成分（Ilexgenin A）进行了含量测定3，4。1  仪器和试药岛津LC-10AD泵，Alltech 500 ELSD检测器，Sepu3000色谱工作站；Ilexgenin A对照品（批号：050804，含量100% HPLC法）自制

7、；毛冬青药材：江西省各地采挖；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。2  方法与结果2.1  色谱条件色谱柱为Lichrospher -C18 (4.6 mm×250 mm，5m)；流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（6040）；流速1mlmin；蒸发光散射检测器飘移管温度为96，气体流速为2.1 L/min。2.2 测定方法2.2.1 对照品溶液的制备 取Ilexgenin A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含65g的溶液，即得。2.2.2 供试品溶液的制备 取毛冬青药材粉末（过4号筛），约1.5 g，精密称定，置250 ml回流瓶

8、中，加100 ml的乙醇，回流1 h，取下，滤过，然后用乙醇洗涤数次，滤液蒸干，残渣用甲醇溶解到10 ml量瓶中，摇匀，即得。2.2.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液5 l和10 l及供试品溶液510 l注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。2.3 专属性实验取对照品和供试品溶液按上述方法进行测定，结果在Ilexgenin A对照品相应的保留时间处有一相同的峰，周边无其它杂质峰干扰。保留时间在8 min左右，理论板数以Ilexgenin A峰计大于8 000。结果见图12。2.4  蒸发光散射检测器的条件考察2.4.1  漂移管温度的选择在上述色

9、谱条件下，固定漂移管的气流量为2.1 L/min，改变漂移管温度，用Ilexgenin A对照品溶液进样，测定其峰面积及信噪比（S/N），选择峰面积和信噪比两者均为最大值时的温度，得到最优化的漂移管温度为96。2.4.2  漂移管中气流量的选择在上述色谱条件下，固定漂移管的温度为96，改变漂移管的气流量，用Ilexgenin A对照品溶液进样，测定其峰面积及信噪比（S/N），选择峰面积和信噪比两者均为最大值时的气流量，得到最优化的漂移管气流量为2.1 L/min。2.5 标准曲线的制备取Ilexgenin A 对照品约15 mg置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，从中吸取0.

10、5，1，2.5，5，7.5 和10l注入色谱仪中进行测定，结果在0.7 14.5 g的范围内，浓度与峰面积的对数值成一直线，回归方程为lgA = 1.481 1 lgC+ 6.174 7 , 相关系数 r = 0.999 7（ n = 6 ）。2.6 溶液的稳定性实验取样品溶液一份，在不同的时间点测定，结果在24 h内稳定性好。  2.7 重复性实验取同一批毛冬青药材，分别制配6份相同浓度的供试品溶液进行测定，计算平均含量为0.217%，RSD为1.23%。2.8   回收率实验分别称取同一批已知含量的毛冬青药材（含量：0.217%）适量，加入一定量的I

11、lexgenin A对照品，共6份，制成供试品溶液，进行测定，计算平均回收率为100.32%，RSD为1.38%。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）2.9 药材的测定对从不同地方、不同时间采集的毛冬青药材，经干燥粉碎，过4号筛，分别取1.5 g，精密称定，按上述方法操作，测定。结果见表2。表2  毛冬青药材中Ilexgenin A 的测定结果（略）3 讨论毛冬青药材中的大部分皂苷类物质没有紫外吸收，我们采用蒸发光散射检测器对其中的皂苷类物质进行检测，得到满意的结果。    本实验采用不同浓度的乙醇进行不同时间的超声和回流提取试验，结果表明

12、，毛冬青药材采用95%乙醇100ml，回流1 h，其中的Ilexgenin A 提取比较完全，含量最高。在实验过程中，使用过甲醇-水，乙腈-水和乙腈-0.1%醋酸水溶液作流动相，乙腈-水作流动相较好，在水中加少许冰醋酸，对峰形能得到更好的改善，因此，本法选用了乙腈-0.1%醋酸溶液（6040）作为流动相。本法中浓度和峰面积的对数值曲线为一良好的直线，此直线未过原点，因此在本方法中应采用外标两点对数方程来进行计算。    本方法经实验证明，准确性高，重复性好，简便快速，可对毛冬青药材的质量进行有效的控制。    【参考文献】  1宋立人，洪恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典，