高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量

1、高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量缪宁梅1,马 婕2(1.江苏省药品检验所,江苏南京210008;2.中国药科大学,江苏南京210009摘 要:目的建立高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液含量的方法。方法采用氨基键合硅胶色谱柱(4.6mm 250mm,5 m;以乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 50为流动相,流速为1.0mL/min;检测波长为200nm 。结果门冬氨酸与鸟氨酸都在1252500 g/mL 浓度范围内有良好的线性关系(r =0.9999,两者的平均回收率分别为99.92%与100.25%,R SD 分别为0.34%与0.70%。结论此法简便、快速、准确

2、,适用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量测定。关键词:门冬氨酸;鸟氨酸;含量测定;高效液相色谱法中图分类号:R977.4;R927.2 文献标识码:A 文章编号:1005 1678(200701 0052 02Assay of ornitbinaspaetant injection by HPLCMIAO Ning mei 1,MA Jie 2(1.Jiangsu Institute f o r Drug Control,Nanjing 210008,China;2.China Pharmaceutical University ,Nan jing 210009,ChinaAbstract:Purp

3、ose To establish an HPLC method for the assay of ornitbinaspaetant injection.Methods The assay was performed on a Kromasil NH 2column (4.6mm 250mm,5 m.The mobile phase was composed of acetonitrile 0.05mol/L KH 2PO 4(50 50.The flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 200nm.Results Both as

4、partate and ornithine showed good linear (r =0.9999in the range of 125 2500 g/mL.The average recovery was 99.92%and 100.25%respecttively.Conclusion The method might be simple,rapid and accurate.It is suitable for the assay of ornitbinaspaetant injection.Key words:aspartate;ornithine;assay;HPLC收稿日期:2

5、006 04 12;修回日期:2006 05 29作者简介:缪宁梅(1973 ,女,江苏南京人,主管药师,主要从事药品检验工作。门冬氨酸鸟氨酸注射液是我国首个用于临床的具有护肝、解毒、能量三效合一的新药,其主要治疗成分是门冬氨酸和鸟氨酸,临床用于急、慢性肝病的治疗,包括肝硬化、脂肪肝及肝炎所引起的血氨升高,对肝性脑病尤其有效1。本文参照有关文献2 3采用高效液相色谱(HPLC法,直接测定门冬氨酸鸟氨酸注射液中门冬氨酸与鸟氨酸的含量,方法简便、快速、灵敏度高、重现性好。1 材 料门冬氨酸对照品,中国药品生物制品检定所,批号:140691 200401;盐酸鸟氨酸对照品,Merck 公司,批号:K

6、29829706141;门冬氨酸鸟氨酸注射液,规格:10mL 5g,南京某制药有限公司,批号:050801、050802、050803。HP1100HPLC 仪(包括二元输液泵、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器,美国惠普公司。2 方法与结果2.1 色谱条件的选择2.1.1 检测波长的确定 取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释分别制成每1mL 中约含门冬氨酸1mg 和鸟氨酸1mg 的溶液,DAD 检测器全波长范围内进行扫描,门冬氨酸与鸟氨酸均在200210nm 波长范围内有吸收,属末端吸收。同时用200,204,210nm 进行检测,基线噪音基本相

7、同,但200nm 的响应值最大,故选择200nm 作为测定波长。2.1.2 色谱柱和流动相的选择 经反复试验,用氨基键合硅胶色谱柱(4.6mm 250mm,5 m;以乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 50为流动相;流速为1.0mL/min 。理论塔板数按鸟氨酸峰计算应不52中国生化药物杂志Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2007年第28卷第1期 。1.辅料;2.氯离子;3.鸟氨酸;4.门冬氨酸1.Stuff; 2.Chl oride ion;3.As partate; 4.Orni thine图1 供试品与对照品的HPLC

8、 色谱图Fig 1 HPLC chromatogram of sample and reference substance2.2 线性关系精密称取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释制成每1mL 含门冬氨酸与鸟氨酸均为12.5mg 的溶液。精密量取0.1,0.3,0.5,0.7,0.8,1.0,2.0mL,分别置10mL 量瓶中,加50%乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取20 L,分别注入HPLC 仪,记录色谱图,以峰面积(A 对浓度(C 作线性回归,得直线方程为:门冬氨酸A =3668.3C +58.823,r =0.9999;鸟氨酸A =1162

9、.3C +3.100,r =0.9999。结果表明,在1252500 g/mL 范围内,A 与C 均呈良好的线性关系。2.3 回收率试验精密量取门冬氨酸鸟氨酸注射液适量,加50%乙腈溶液稀释制成每1mL 约含门冬氨酸与鸟氨酸均为25mg 的贮备溶液。分别精密称取相当于门冬氨酸与鸟氨酸对照品各20,25,30mg,分置3个50mL 量瓶中,加50%磷酸溶液1滴,用50%乙腈溶液适量使溶解,精密量取贮备溶液1mL,分置上述3个50mL 量瓶中,用50%乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,即得相对标示量浓度为80%,100%,120%的加样回收溶液。另精密称取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量,加50%磷酸溶液1

10、滴,加50%乙腈溶液溶解并稀释制成每1mL 约含门冬氨酸与鸟氨酸均为1mg 的溶液,作为对照品溶液。按2.1项色谱条件测定,结果门冬氨酸的平均回收率为99.92%,RSD 为0.34%(n =9;鸟氨酸的平均回收率为100.25%,RSD 为0.70%(n =9,方法的回收率良好,其他成分及辅料对测定无干扰。2.4 溶液的稳定性精密量取门冬氨酸鸟氨酸注射液适量,加50%乙腈溶液稀释制成每1mL 约含门冬氨酸与鸟氨酸均为1mg 的溶液,作为供试品溶液。分别于0,2,4,6,8,10h 测定,结果表明供试品溶液在室温条件下,10h 内稳定,门冬氨酸的R SD 为0.26%(n =6;鸟氨酸的R S

11、D 为0.44%(n =6。2.5 重复性试验按2.4项方法配制6份供试品溶液,重复测定,结果门冬氨酸的RSD 为0.63%(n =6;鸟氨酸的R SD 为0.60%(n =6,重复性良好。2.6 供试品测定精密量取2.4项供试品溶液20 L 注入HPLC 仪,记录色谱图;按2.3项方法配制对照品溶液同法测定,按外标法分别以峰面积计算,即得门冬氨酸和鸟氨酸的含量。同时与二甲醛为衍生剂进行测定的方法7相比较,测定门冬氨酸与鸟氨酸的结果见表1。表1 不同方法测定门冬氨酸与鸟氨酸含量的比较T ab 1 Determination result of different methods of aspa

12、rtate and or nithine 批号门冬氨酸含量/%本文方法衍生化法鸟氨酸含量/%3 讨 论选择氨基键合硅胶色谱柱,以乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液(50 50为流动相测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量,不需进行衍生化,供试品保留时间适宜,全分析过程仅15min,色谱峰型对称性良好。实验结果还表明分别采用流动相和50%乙腈溶液作溶剂,色谱行为基本相同,故选用后者。门冬氨酸在50%乙腈溶液中的溶解度小,加1滴50%磷酸溶液后其溶解性大为改观,且对测定结果无影响。由于测定波长为200nm,盐酸鸟氨酸中的氯离子出峰,辅料也出峰,但与相邻被测成分鸟氨酸主峰分离良好,不干扰含量测定。参考文献:1 陈孝治.瑞甘J.中南药学,2004,2(4:254 255.2 王荣梅.高效液相色谱法测定盐酸精氨酸注射液的含量J.中国生化药物杂志,2003,24(6:296