碱水解紫外分光光度法测定白芍总苷含量

1、第27卷第10期分析试验室Vol.27.No.102008年10月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2008210碱水解紫外分光光度法测定白芍总苷含量任凤莲,瞿白露,谭小艳(中南大学化学化工学院,长沙410083)摘要:建立了中药白芍中白芍总苷的紫外测定方法。将白芍总苷粗品水解得到产物苯甲酸作为对照品,在最大吸收波长228nm处,定白芍总苷含量。在2.010.0gmL范围内,的线性关系,r=0.9984。=699.。关键词:白芍;:3:100020720(2008)102073203(Paeonia1lactifloraPall.)经去皮水煮加工后的干燥根。白

2、芍具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴止汗的作用,其临床应用十分广泛2,31实验部分1.1仪器与材料TU1800紫外可见光度计(北京普析通用),DZF2150数显小型恒温真空干燥箱,W201恒温水。白芍的主要有效活性成分为单萜苷类化合物。芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等统称为白芍总4苷(totalglucosidesofpaeony,TGP)。白芍总苷具有多途径抑制自身免疫反应,以及抗炎、止痛、保肝等多种药理作用,对类风湿性关节炎有确切疗效5,6浴锅,98212C型数字控温电热套。苯甲酸对照品(纯度99.5%,湘中地质研究所),其余试剂均为分析纯,白芍药材购自安徽亳州地区亳县药

3、材基地,经鉴定为毛茛科芍药属植物白芍,白芍饮片购自安徽汉枫中药饮片公司,产地安徽。1.2实验方法1.2.1对照品溶液的制备准确称取干燥至恒量的苯甲酸对照品2010mg,用10gLNaHCO3定容于200mL容量瓶中。制成浓度为011mgmL的苯甲酸标准溶液。准确移取110、210、310、410、510mL011mgmL的苯甲酸标准溶液于50mL容量瓶中,用10gLNaHCO3定容,得210、410、610、810、1010gmL的系列对照品溶液。1.2.2供试品溶液的制备称取白芍根粉末40g,加体积分数80%乙醇适量煎煮2h,提取两次,。对白芍中单萜苷类成分的测定,报道最多7,8的为高效液相

4、色谱法电泳法10、薄层扫描法9、毛细管。这几种方法虽然定量比较准确,但需要纯度高稳定性好的对照品,且在分离较好的情况下才能进行定量测定。文献多报道把含量最高的芍药苷这一单一成分作为白芍的质控标准,或测定其中的两三种单萜苷来表征白芍总苷11,而白芍总苷是由一类结构相近的单萜苷类化合物组成的混合物,因此进行白芍总苷的测定将具重要意义。白芍总苷各成分都具有苯甲酸酯键结构,将其水解可生成苯甲酸12。本文以苯甲酸为对照品,使用紫外分光光度法对白芍总苷量进行测定。本法具有通用性,实验结果表明该方法简便、实用性强。合并提取液,减压浓缩至无乙醇味,加入适量10gL壳聚糖溶液,静止过滤得澄清液。将澄清液通过已处

5、理好的大孔吸附树脂,先用水洗脱,然后用25%乙醇洗脱,回收乙醇,真空干燥得淡棕色粉末,即为白芍总苷粗品。同法制备3批,以生药收稿日期:2007205224;修订日期:2007208210作者简介:任凤莲(1946-),女,教授;E2mail:amanda98200373© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 第27卷第10期分析试验室Vol.27.No.102008年10月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2008210材

6、计得平均收率为4.75%。准确称取白芍总苷样品30mg,置于150mL圆底烧瓶,用50gLNaOH溶液20mL溶解,于沸水浴中水解2h。水解液调节pH为1.4,加入固体氯化钠至饱和,于125mL分液漏斗中用乙醚萃取4次(20、15、15、15mL),合并乙醚萃取液,加无水硫酸钠脱水,滤液回收乙醚至干,残渣用10gLNaHCO3溶解,移至25mL容量瓶中,用10gLNaHCO3定容。吸取2.0mL于50mL容量瓶中,用10gLNaHCO3定容,即标绘制标准曲线。结果表明,在2.010.0gmL范围内与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为,相关系数r=0.9984。A=0.01868+0.07984

7、表1不同水解条件对白芍总苷含量的影响Tab.1Effectofdifferenthydrolysisconditionsontotalglu2cosidecontentofpaeony序号345678910水解时间tmin50gLNaOH用量VmL粗品中TGP量w%为供试品溶液。10gLNaHCO3溶液作为参比溶液在228nm处测量吸光度,计算出苯甲酸的量,再由公式:w白芍总苷%=%4801271221121212012012012040601802405.020.025.030.025.025.025.025.057.5964.0265.5266.0266.5565.6557.3561.10

8、66.9362.82,22.1经紫外光谱扫描得苯甲酸最大吸收波长为228nm,与对照品完全一致,见图1。其它非活性官能团和杂质在此波长处无干扰,故用苯甲酸为对照品,在228nm处测定。2.4重现性实验称取同一批白芍总苷样品,水解萃取后,平行测定6份进行测定,结果RSD为2.4%。2.5加标回收率准确吸取已知白芍总苷含量的白芍总苷粗品样品溶液6份,依次加入不同量的苯甲酸对照品溶液。余下操作同1.2.2。其结果见表2。2.6样品测定和计算图1水解产物的紫外光谱Fig.1UVspectraofhydrolyzate1-样品溶液对参比;2-对照品溶液对参比对购自安徽的白芍药材和市售饮片按1.2.2法制

9、备成供试液,稀释到合适浓度,加碱水解后按1.2.2项下的操作测量吸光度,计算出苯甲酸量和样品中白芍总苷含量。结果表明白芍生药材中白芍总苷含量为3115%,市售饮片中含量为2134%。2.8讨论2.2水解条件的选择初步试验表明,NaOH用量和水解时间对水解反应有一定的影响。分别取30mg白芍总苷粗品的样品10份,依次加入5、10、15、20、25、30mL的50gLNaOH溶液于沸水浴中水解120min,加入25mL50gLNaOH溶液分别于沸水浴中水解40、60、180、240min,结果见表1。从表1可知,水解120min结果较好,50gLNaOH用量为20mL时即可水解完全。2.3线性关系

10、将上述1.2.1一系列标准溶液于228nm处测定吸光度,以质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐74由于白芍总苷水解后成分相对复杂,对紫外吸收光谱有较大影响,并不能直接来测定苯甲酸的吸光度,必须将其萃取出来。本法萃取得到的样品较纯,其它杂质在苯甲酸最大吸收峰的位置无干扰。另外,白芍中本来就含有少量的游离苯甲酸,经紫外分光光度法测定,本文中的白芍经过提取纯化后所含的游离苯甲酸非常少,游离苯© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 第27卷第10期分析试验室Vol.27

11、.No.102008年10月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2008210甲酸总苯甲酸×100%<4%,可忽略不计。白芍12总苷测定结果表明与HPLC法结果无明显差异。此方法可用于白芍总苷的质控与半定量测定,与HPLC或HPCE法结合使用,可以较好的控制白芍总苷量及其各单体的量。表2加标回收率实验结果Tab.2Determinationresultsofrecovery样品测定值mmg对照品加入量mmg测得量mmg回收率%100.7498.298.5平均回收率%RSD%0.1470.1470.1470.1470.1470.1200.1200.

12、1500.1500.2690.2680.2920.0.32211参考文献1吴健,赵亮.中草药,2005,36(1):1222薛建国,狄留庆,赵晓莉.江苏中医药,2006,27(12):553王巧,刘荣霞,毕开顺等.中草药,2005,36(11):16304周强,粟占国.中国新药与临床杂志,2003,22(11):6875蒋午峻,王巧,李小娜等.河北医科大学学报,2006,27(5):5006Hong2meiXu,WeiWei,Xiao2yiJiaetal.JournalofEth2nopharmacology,2007,109(3):4427司晓萍,顾一炯.时珍国医国药,2004,15(6):

13、3368钱亚南,刘信顺,张先芬.中草药,1995,26(7):3499张雪荣.中草药,2000,31(11):83210陈勇川,穆海川,刘松青等.华西药学杂志,2001,16(6):44711张克荣,白丽,徐赞美等.药物分析杂志,2003,23(3):22212刘玉红,陈燕,易进海.华西药学杂志,2002,17(4):295DeterminationoftotalglucosidecontentofpaeonyinPaeonialactifloriaPall.byAlkalinehydrolysis2UVspec2trophotometry,QUBai2luandTANXiao2yan(Col

14、legeofChemistryandChemicalEngineering,CentralSouthUniversity,Changsha410083),FenxiShiyanshi,2008,27(10):7375RENFeng2lianAbstract:AmethodwasproposedforthedeterminationofthecontentoftotalglucosidesofpaeonyinPaeonialactiflo2raPall.byUVspectrophotometry.Thedeterminationmethodwasestablishedwithbenzoicaci

15、dwhichwashydrolysisproductoftotalglucosidesofpaeonyasacontrastbyUVspectrophotometryat228nm.Agoodlinearrelationshipbe2tweenconcentrationofbenzoicacidanditsabsorbancewasobtained,andthelinearrangewasbetween2.0and10.0gmLwithcorrelationcoefficientofr=0.9984.Theaveragerecovery(n=6)andRSDwere99.1%and2.4%re2spectively.Thismethodissimplerapidandreliable.Itcouldbeusedforthesemi2quantitat