维生素E对小鼠高血脂预防作用研究

1、2005年6月第20卷第3期中国粮油学报Journal o f the Ch i n ese C erea ls and O ils A ssoc i a ti o n周泉城1吴谋成2(山东理工大学轻工与农业工程学院食品系1,淄博255049(华中农业大学食品科学技术学院2,武汉430070摘要成功建立实验性高血脂小鼠模型,观察超临界萃取的总V E、A-V E和总V E+A-V E对机体抗氧化,体重,粪脂及血脂水平的影响。结果表明,模型建立45d后,摄入V E的小鼠,其血清中TC,LDL-C和A I,均显著下降。超临界萃取的总V E和A-V E的混合样可以显著降低血清和肝脏TC以及肝系数。结论

2、表明总V E和A-V E可以降低血脂水平,降低LDL-C调节胆固醇的吸收率,增加脂质的排泄,从而起到明显降血脂,预防动脉硬化形成的效果。关键词超临界维生素E高血脂预防降血脂0前言初步估计,我国高血脂的患病率在7%以上,高血脂的患者约有9000万人,已成为威胁中老年人生命的主要祸首。高血脂是心脑血管疾病的重要危险因素之一11-32。高脂血症是冠心病、心肌梗死、心脏猝死的危险因素。然而,长期使用药物会带来许多问题,如药物的毒副作用以及昂贵的药费所带来的经济负担等142。V E是一种对身体无害的抗氧化剂。本研究以超临界CO2从油菜籽脱臭馏出物中萃取的菜籽总V E(以下简称总V E为原料,考察V E对

3、小鼠实验性高血脂的预防效果,并对其降血脂的机理进行探讨,旨在为通过在饮食中适量补充V E来对高血脂进行预防提供实验依据。1材料与方法经甲酯化处理过的菜籽脱臭馏出物为原料,首先在12.0M Pa、萃取温度60e、分离温度场60e-60e -60e-60e,流量15.0kg/h下萃取脂肪酸甲酯等物质至恒重。再改变萃取条件为萃取压力20.0MPa、萃取温度40e、分离温度场40e-55e-70e -80e、流量25.0kg/h进行第二步超临界萃取,收基金项目:国家/十五0重大科技专项/双低油菜籽副产品利用技术开发0,编号:2001BA501A20收稿日期:2004-05-13作者简介:周泉城,男,1

4、977年出生,博士,食品科学与工程专业集样总重占原料质量11%左右时,停止收集。经HPLC测定V E含量为54.17%,V E的组成是A-V E 为12.01%,C-V E为59.29%,D-V E为28.70%。昆明种SPF小鼠,雄性,56周龄,体重18 22g,由湖北省卫生防疫站实验动物中心提供。小鼠基础饲料购自湖北省卫生防疫站实验动物中心。猪油由市售新鲜的猪板油熬成。胆固醇:购自上海政翔化学试剂研究所。脱氧胆酸钠:购自S ig m a公司。阳性对照物(血脂康:购自北京大维信生物科技有限公司。甲醇、无水乙醇、三氯甲烷、甲醛溶液和冰乙酸均为分析纯。紫外可见分光光度计:UV-256,Shm i

5、 adzu,Japan。低温高速离心机:H I TACH I,SCR20BC,Japan。医用离心机:LD5-2A型,北京医用离心机厂。实验小鼠随机分为正常对照组、高血脂对照组、阳性对照组、总V E组,A-V E组和总V E与A-V E混合组。每组10只。所有受试小鼠先喂基础饲料3d,作适应性饲养;然后除正常对照组继续饲喂基础饲料外,其余组均饲喂高脂饲料。高脂饲料组成为基础饲料82.5%,猪油15%,胆固醇2%,脱氧胆酸钠0. 5%。基础饲料配方为玉米面30%.面粉30%,麦麸35%,鱼粉2%,骨粉2%,食盐1%。除正常对照第20卷第3期周泉城等维生素E对小鼠高血脂预防作用研究表1VE对小鼠摄

6、食量和体重变化的影响(n=10,X?s组别剂量(m g/kg#d摄食量g/(d#cap ita始重(g终重(g增重(gE中剂量总VE高剂量总VE48 5.30?0.0425.86?1.4833.47?1.047.60?0.281a A-VE总VE表2VE对小鼠血清和肝脏中TG,TC的影响(n=10,X?s组别剂量m g/kg#d血清TC(mm ol/L血清TG(mmo l/L肝脏TC(mm ol/L肝脏TG(mm ol/L肝系数低剂量总VE中剂量总VE高剂量总VEA-VE总VE组每天灌胃0.1mL生理盐水、高血脂对照组灌等量的色拉油外,其余组均灌等量的色拉油溶解的样品,试验期为45d。实验开始

7、后密切观察各组动物的体毛,活动及采食情况,定期称量体重,记录进食量。饲养结束后,各组小鼠空腹5h,眼眶取血,及时离心分离血清,测定总胆固醇(TC、总甘油三酯(TG、高密度脂蛋白(HDL-C、低密度脂蛋白(LDL-C、丙二醛(MDA、超氧化歧化酶(SOD,并按公式计算动脉硬化指数(atherogen ic i n dex,A I=A I=(TC-HDL-C/HDL-C。眼眶取血处死后,分离出肝脏,滤纸吸干后称其重量(g,按下式计算肝脏系数:肝脏系数(%=肝脏重量(g/体重(g100%取定量肝脏,用肝脏与生理盐水(w B v1B10匀浆,10000r/m i n离心15m in,取上清液,测定TG

8、和TC。收集粪便称取湿重,低温干燥后称取干重,并用索氏提取法测定粪脂含量。TC、TG、HDL-C、LDL-C、MDA、SOD测定试剂盒购自南京建成生物公司研究所。结果以X?s表示,数据用SAS软件进行t检验差异显著性分析。2结果与分析表1的结果表明,各组小鼠的始重和摄食量均无明显差异(P>0.05。饲养结束后发现各模型组增重均比正常组高。总V E组小鼠增重低于高血脂对照组,总V E组小鼠增重呈剂量负依赖性。2.2V E对血清和肝脏的影响由表2可知,与高血脂对照组相比,总V E各剂量组小鼠血清TC均有显著差异,而A-V E组和总V E+A-V E组则无明显差异;只有阳性对照组和总V E+A

9、-V E组小鼠血清TG呈显著差异,其余组则均无显著性差异;在肝脏TC方面,只有总V E+A-V E 组有显著性差异;在肝脏TG方面,各V E组均无显著性差异;在肝系数方面,总V E+A-V E组有显著性差异。由表3可知,与高血脂对照组相比,各V E组小鼠HDL-C均升高,但未达显著性差异水平。各V E 组小鼠LDL-C均下降,且都有显著性差异。总V E 和LDL-C呈剂量负依赖性关系。且总V E+A-V E 组降低LDL-C效果最明显。在A I方面,总V E高剂量组和总V E+A-V E组有显著性差异。67中国粮油学报2005年第3期表3 V E 对小鼠血清HCL-C ,LDL-C ,A I

10、变化的影响(n=10,X ?s 组别剂量(m g /kg #dHDL -C (mm o l/L LDL-C(mm o l/L A I阳性对照101.35?0.073.63?0.072b2.80?0.182b低剂量总V E 221.24?0.075.76?0.072b4.82?0.222中剂量总V E 381.27?0.075.53?0.042b4.44?0.202高剂量总V E 481.28?0.045.46?0.072b4.38?0.122a A -V E 对照381.33?0.056.66?0.122a5.05?0.202总V E +A -V E2.3 V E 对小鼠血清抗氧化性能的影响由

11、表4可知,与高血脂对照组相比,各V E 组M DA 和SOD 值均无显著性差异。表4 V E 对小鼠血清M DA,SOD 变化的影响(n =10,X ?s组别剂量(m g /kg #dM DA (nm ol/LSOD总V E +A -V E19+19bb2.4 V E 对小鼠粪重及粪脂测定由表5可知,正常对照组的小鼠粪便湿润、松软,颗粒大,量多,表面光滑。高血脂对照小鼠粪便则干硬,量少,颗粒小且不规则。各V E 样品组的小鼠粪便也呈不同程度的湿润、松软,颗粒大、量多、表面光滑。总V E 剂量组,剂量越大,小鼠粪便越大,量越多,表面越光滑,且越湿润和松软。与高血脂对照组相比,总V E 高剂量组有

12、显著性差异。总V E 浓度与粪湿重值呈负相关性。与高血脂对照组相比,各组粪干重值都升高,总V E 高剂量组有显著性差异,各组粪脂值虽都升高,却均无显著性差异。3 讨论V E 降血脂的作用国外虽已有所报道,但对其机理及哪种V E 异构体起作用未见报道。笔者通过实验发现,对小鼠预防高血脂效果最好的是总V E ,A -V E 对测定的某些指标,如肝脏中TC ,有较好的效果,由此可知,在预防高血脂C -V E 比A -V E 有更好的效果。由小鼠增重幅度知,单独A -V E 有利于小鼠的增重;而总V E 则有利于预防小鼠增重。结合粪干重,粪湿重和粪脂实验数据可知,总V E 组有利于粪便和粪脂的排出。这

13、说明V E 降血脂的机理之一就是降低胆固醇的吸收,增加脂质的排出,其中总V E 中的C -V E 比A -V E 效果好。此外,V E 降血脂的另一机制是通过V E 抗氧化性对LDL 起保护作用,从而对小鼠的高血脂起预防作用,同时由于抗氧化性,可以清除产生的氧自由基,减少脂质过氧化物的生成,降低血清MDA 含量。此外,V E 还作为免疫因子来提高系统的免疫能力,如保护SOD 活性。总V E 和A -V E 混合在血清TC 、肝脏TG 、LDL-C 和A I 降低方面效果要好于单一的V E ,这是由于两者在预防小鼠高血脂中有协同作用。确切如何发挥作用,还有待进一步研究。表5 V E 对小鼠粪重和

14、粪脂变化的影响(n=10,X ?s组别剂量(m g /kg #d粪湿重(g粪干重(g粪脂(g /d高剂量总V E4818.68?0.61a12.45?1.44a1.35?0.02A -V E 对照3814.05?0.9210.63?1.281.02?0.03总V E +A -V E19+19参 考 文 献112 李清朗.解说高血脂之概念篇.药物与人,2003(1:24-25作用.营养学报,2002,24(4:431-432较.中国粮油学报,2002,17(3:38-39142 郑建仙编著.功能性食品(第一卷.北京:中国轻工业出版社,1999E ffects of V E Prepared w

15、ith Supercritical CO 2Extracti on on Preventi ng M ice H yperli pi de m i a68第20卷第3期周泉城等维生素E对小鼠高血脂预防作用研究Zhou Quancheng1W u M oucheng2(Schoo l o fAgricu lture and L i g ht Industry Eng ineeri n g,Shandong U niversity o fTechno logy1,Zibo255049 (Co llege o f Food Sc ience and Technology,H uazhong Agri

16、culturalUn i V ersity2,W uhan430070Abst ract The m echanis m s ofV E prepared w it h supercritical CO2extrac,t A-V E,and V E+A-V E on preven-ti n g experi m ental hyperli p i d e m i a w ere stud i e d.The results sho w t h at the V E can dra m atica lly reduce the b l o od TC, LDL-C,and A I,and tha

17、tV E+A-V E can dra m atica ll y reduce b l o od TC,liver TC,and liver coeffic i e n.t It i n d-i ca tes that V E prepared w ith supercritica lCO2extract and A-V E can reduce b lood li p i d leve,l effic iently i n terfere the for m ati o n of hyperli p i d e m ia.K ey w ords supercritica,l V E,hyper

18、lipide m ia,preven t(上接第60页A1,2,4酸性亚基与硬度、弹性呈正相关,且与硬度是显著正相关;B碱性亚基与硬度、弹性呈不显著正相关; 7S/11S与硬度呈显著负相关,与弹性呈不显著负相关。因此可见,品种差异造成的蛋白组成不同对大豆蛋白凝胶特性方面具有重要的影响。3.4通过凝胶电镜扫描照片可以看出,7S/11S比值越小的品种,制得的凝胶网络越细密。参考文献112 莫文敏,曾庆孝.蛋白质改性研究进展.食品科学, 2000,21(6:6-9122 周兵.大豆蛋白质的结构和性质.大豆新加工技术原理与应用,98-109132 B. D.哈密斯.蛋白质的凝胶电泳实践方法.科学出版社

19、,1994,56-72142 李里特,汪立君.大豆蛋白热变性程度对豆腐品质的影响.中国粮油学报,2002,17(1:21-23The Effect of Soybean Vari ety on Gelli n g Functi on of SPI Sh iY anguo1Cheng Cu ili n2Zhu X i uqi ng3Jiang li anzhou3(H ar b i n Co mm erce Un iversity Food Eng i n eering College,1H arbin150076(H ar b i n I nstitute o fTechnology Food

20、 and Genetic Eng i n eer i n g A cade m y2,H arbin150086(N ational Institute of Soybean Eng i n eeri n g Techno l o gy3,H ar b i n150086Abst ract Thr ough adopting d iscontinuous SDS-PAGE(laury l sod i u m su lfate-po lyacryla m ide ge l e lectropho-resism ethod,the7S/11S of the prote i n s for d ifferent soybean varietiesw ere deter m i n ed.It is found that different va-rieties possess rather d ifferent values of7S11S.Prepari n g the pro tein ge l and adopti n g a rheo m eter to exa m i n e the gel physi c al c