毛细管柱气相色谱法测定银杏叶提取物中银杏萜内酯含量

1、 工作简报毛细管柱气相色谱法测定银杏叶提取物中银杏萜内酯含量刘红梅1, 周庆霞2, 杨文玲1(1. 河北科技大学化学与制药工程学院, 石家庄050018; 2. 石家庄新奥燃气有限公司, 石家庄050810摘要:对银杏叶提取物中银杏萜内酯(包括BB 和GA , G B , GC , G J 的毛细管柱气相色谱分离条件作了试验, 达到银杏萜内酯成分的良好分离。选择了内标物角鲨烷, 理论计算并直接测定了银杏萜内酯的相对质量校正因子。采用内标法测定了各组分的含量。BB 、GA 、G B 、回收率依次为95. 2%,95. 5%,94. 6%,96. 1%。关键词:毛细管气相色谱; 银杏叶; 银杏萜内

2、酯; 中图分类号:O657. 37文献标识码:A (2008G C Determination Leaf Extracts withColumnH mei 1, ZH OU Q ing 2xia 2, YANG Wen 2ling 1(1. ry and Pharmaceutical Engineering , Hebei Universit y of S cience and Technolog y , S hi j iaz 050018, China; 2. S hi j iaz huang X in ao Gas Co. L t d. , S hi j iaz huang 050810,

3、 China Abstract :Chromatographic conditions for separation of terpenes (named in abbreviation as GA , G B , GC , G Jand BB f rom extracts of gingko leaves with capillary column were studied , and the terpenes were satisfactorily separated. Squalane was used as internal standard in the determination.

4、 The relative mass correction factors were calculated theoratically and also determined experimentally. Tests for recovery of BB , GA , G B and GC were made by addition of standards to a sample of known terpene contents and analyzed by the proposed method , values of recovery obtained were 95. 2%, 9

5、5. 5%, 94. 6%and 96. 1%respectively.K eyw ords :Capillary column 2gas chromatography ; G ingko leaves ; Terpenes ; Internal standard银杏萜内酯为银杏叶提取物中苦味成分, 包括银杏内酯A 、B 、C 、J 和白果内酯(简称GA 、G B 、GC 、G J 和BB , 是血小板活化因子的特效拮抗剂,能有效地抗血栓形成, 尤其白果内酯BB 对神经系统疾病、脑病等具有治疗作用。因此, 银杏叶提取物中银杏萜内酯含量是判断其质量标准的依据。目前, 对银杏叶及银杏叶提取物中银杏

6、萜内酯的分析国内外多采用高效液相色谱法(HPL C 125。一般采用示差折光(RI 和紫外检测器。但由于银杏萜内酯在银杏叶和银杏叶提取物及其制剂中的收稿日期:2007205217作者简介:刘红梅(1971- , 女, 河北霸州人, 高级实验师, 主要从事化工产品应用研究与分析。含量极低, 在紫外检测器下银杏萜内酯的吸收较弱,因此用H PL C 进行定量分析方法的准确度、灵敏度、选择性和稳定性均较差。将银杏萜内酯衍生成三甲基硅醚衍生物后用气相色谱测定6, 文献6介绍了银杏叶的前处理程序及银杏萜内酯的气相色谱分离条件但未对其进行定量测定。文献报道也有采用HPL C 2蒸发光散射检测器(ESLD 7

7、、超临界流体色谱8、核磁共振法9进行测定, 但因设备复杂、价格昂贵不易推广。近年国内相继报道了用气相色谱2质谱联用法测定银杏叶中银杏萜内酯10,11, 所建立的方法未能检出银杏叶中银杏内酯G J 10,11和GC 11。本试验用气相色谱法, 选用氢火焰离子化检测器分析银杏叶提取物中银杏萜内酯, 不仅使银杏萜内酯的成分BB 、GA 、G B 、GC 、G J 获得良好分982 刘红梅等:毛细管柱气相色谱法测定银杏叶提取物中银杏萜内酯含量离且分析周期短。选择了合适的内标物测定, 理论计算了银杏萜内酯的相对质量校正因子; 用内标法测定了银杏叶提取物中银杏萜内酯的含量, 方法重现性、准确度良好。2结果

8、与讨论2. 1色谱峰的定性1试验部分1. 1仪器与试剂图1为银杏叶提取物经处理后的气相色谱图。其主要色谱峰BB 、GA 、G B 与GC 的保留时间与银杏萜内酯的标准样品相同。而G J 由于未购得标准样品, 其方法是文献值定性即利用在相同色谱条件下将图1中G J 峰与文献6中G J 峰的保留时间相比较而定, 由此确定图1色谱峰BB 、GA 、G J 、G B 和GC 的保留时间分别为7. 29,18. 6,19. 26,20. 87, 21. 85min 。岛津GC 29A 气相色谱仪:WDL 295色谱工作站; RE 252AAA 旋转蒸发仪。硅胶净化柱(自制 :250177m D G 21

9、硅胶1. 2g 装入内径为0. 6cm 的玻璃管中。标准溶液:准确称取一定量标准品, 用甲醇稀释, 配制成1. 511,2. 225,3. 121,2. 625g L -1的BB 、GA 、G B 、GC 标准溶液。内标溶液:1.000g L -1; 准确称取一定量BB 、GA 、G B 、GC 标准品于10mL 容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 即得角鲨烷, 正己烷介质。试剂均为分析纯。1. 2色谱条件(30m ×0. 32mm ×0. 4 , 氢火焰离子化检测器, 放大器灵敏度1010; 氮气流速2. 65×10-5m 3s -1, 氢气流量1. 17×

10、;10-3m 3s -1, 空气流量7. 5×10-3m 3s -1, 尾吹流量1. 17×10-3m 3s -1; 柱前压为147kPa , 分流比501, 检测器温度为280, 进样器温度为260。升温程序220, 保持时间为2min , 以15min -1升至280, 保持时间为20min 。1. 3试验方法称取银杏叶提取物500mg , 加入无水甲醇3mL , 在40水浴中溶解后用水稀释至30mL 。再分别用乙酸乙酯萃取3次(15,8,6mL 。将3次图1银杏叶提取物中银杏萜内酯气相色谱图Fig. 1Chromatogram of terpene lactones

11、in gingko leaf extract2. 2定量方法称取银杏叶提取物样品500mg , 按试验方法进行处理。用内标法按下式计算银杏萜内酯的质量分数w i :w i =A s×100%m式中f i 待测组分的相对质量校正因子;A i 待测组分的峰面积, V s ; A s 内标物的峰面积, V s ;m s 内标物的质量,mg ; m 样品的质量,mg ;萃取液合并后用旋转蒸发器蒸发至干, 用23mL的丙酮转移至干燥比色管内, 直至丙酮没有颜色为止。转移时若难溶解, 可在50水浴中加热。然后将比色管中的丙酮用热氮气吹干, 再用0. 3mL 无水甲醇溶解, 用微量注射器取0. 1

12、5mL 放到硅胶柱上, 并用氮气吹干甲醇。用12mL 甲苯2丙酮(7+3 溶液淋洗净化柱, 将收集的淋洗液用氮气吹干后, 加入内标溶液70L , 双三甲基硅烷基三氟乙酰胺(BSTFA 250L , 三甲基氯硅烷(TMCS 2. 5L 混合均匀后于120反应45min , 取出于室温下冷却, 移取2L 进入色谱仪分析。2系数, 即无水甲醇样品溶液体积与移上硅胶净化柱的甲醇样品溶液体积之比。2. 2. 1相对质量校正因子的理论计算银杏内酯GA 、G J 、G B 、GC 分子结构中均含有20个碳原子, 由3个内酯环、2个戊烷环组成, 其差异是在2个戊烷环上羟基的数目和位置不同。白果内酯BB 分子结

13、构中含有15个碳原子, 由3个内酯环,1个含羟基的戊烷环组成。将银杏萜内酯化合物衍生反应生成银杏萜内酯的三甲基硅醚衍生物, 根据有机分子中不同原子和不同基团对有效碳数的贡献12, 以角鲨烷(SQ 为内标物, 利用有效碳数近983 刘红梅等:毛细管柱气相色谱法测定银杏叶提取物中银杏萜内酯含量似规律公式12, 计算相对质量校正因子。经计算银杏萜内酯的相对质量校正因子f GA =1. 973, f G B =2. 233, f GC =2. 453, f G J =2. 233, f BB =2. 226。2. 2. 2相对质量校正因子的测定分别移取BB 、GA 、G B 、GC 标准溶液0. 5m

14、L , 置于比色管中, 用氮气将溶剂吹干, 加入内标溶液70L , 再用氮气将溶剂吹干后, 加入BSTFA 250L 、TMCS 2. 5L 混合均匀后于120下反应45min , 取出于室温下冷却, 移取2L 进入色谱仪分析, 分别测出BB 、GA 、G B 、GC 的峰面积A i 以及内标物SQ 峰面积A s , 并根据标准品及内标物的加 12入量m i 、m s , 利用公式f i =图2银杏叶提取物中银杏萜内酯气相色谱图Fig. 2Terpenes in gingko leaf extract wit h internal standard表3方法精密度测定结果(n =7T ab. 3

15、Precision of the method计算银杏萜内m s A i酯相对质量校正因子, 结果见表1。内标物SQ 的相对质量校正因子f SQ =1. 000。表1银杏萜内酯相对质量校正因子T ab. 1R elative m ass correction factors of the terpenes银杏萜内酯名称Terpene G G B GC平均值Average valuew /0. 0. 1670. 4300. 266/50. 01260. 004720. 008220. 00561RSD /%4. 41. 72. 81. 92. 1银杏萜内酯名称Name of t he terpe

16、nesBB GA G B GC校正因子测定值Det m d values of1. 2. 1592. 1961739912. 2092. 4181. 8472. 2672. 3392. 2081. 9412. 2122. 318/%1. 063. 251. 673. 49表4回收试验T ab. 4R ecovery test银杏萜内酯名称names BB样品中银杏萜标准加入量内酯质量Am t ofContent of terpeneTerpene std sin samplesm /mg 1. 3961. 4151. 463GA3. 7563. 7503. 748G B2. 5112. 500

17、2. 521m /mg测得总量Total am tfound m /mg 2. 1082. 7885. 8244. 8035. 88610. 1893. 9715. 47411. 4062. 6613. 9598. 956回收率Recovery /%94. 295. 396. 294. 196. 096. 593. 595. 394. 995. 696. 995. 82. 3样品的测定按试验方法对不同批号的银杏叶提取物进行测定, 结果见表2。色谱图见图2(图2中峰号IS 为内标物SQ 色谱峰, 保留时间为9. 82min 。表2银杏萜内酯测定结果(n =3T ab. 2R esults of

18、detn. of terpenes lactones in gingko0. 7561. 5114. 5331. 1132. 2256. 6751. 5613. 1219. 3631. 3132. 6257. 875银杏萜内酯测定值样品批号No. ofsampleBBS0243T05250. 2830. 183GA 0. 7500. 540Content of terpenesw /%G J 0. 1330. 108G B 0. 5000. 333GC 0. 2830. 092总计GC 1. 4061. 4151. 4121. 951. 262. 4精密度测定2. 6结论(1 从精密度和回收率

19、试验结果看出, 本方法称取7份批号为S0105的银杏叶提取物, 每份500mg , 按试验方法进行测定, 标准偏差结果见表3。2. 5回收率测定称取已知银杏萜内酯含量的银杏叶提取物500mg , 分别加入BB 、GA 、G B 、GC 标准品溶液进对银杏叶中银杏萜内酯测定的重复性良好、准确度较高, 因此可作为银杏萜内酯的常规分析方法。(2 银杏萜内酯的相对质量校正因子理论计算值和实测值良好符合, 在气相色谱分析中当缺少标准品又无文献值可查时, 用有效碳数近似规律公式计算相对质量校正因子是一种可行方法, 为用内标行回收试验, 回收率结果见表4。984 刘红梅等:毛细管柱气相色谱法测定银杏叶提取物

20、中银杏萜内酯含量法定量分析提供了方便。(3 银杏萜内酯的三甲基硅醚衍生物在FID 上燃烧产物之一二氧化硅为白色不导电粉末。长期使用会沉积在电极和喷嘴上造成检测器灵敏度下降, 因此应定期对电极进行清洗。参考文献:1Pieta P G , Mauri P L. Analysis of terpenes f rom gink 2go biloba L extracts by reversed phase high 2perform 2ance liquid chromatography J .Chromatographia , 1990,29:2512253.2Valrie Flesch , Mon

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