99mTc-葡庚糖酸盐的直接标记方法(共3页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上实验七 99mTc-葡庚糖酸盐的直接标记方法学生： 学号： 同组： 一、实验目的1. 掌握配体直接标记法的原理和技术。2. 熟悉锝的价态和行为。二、实验原理1. 锝的价态锝属于第七副族，是第二过渡系元素，原子序数为43。中性气态锝原子在基态的电子组态是Kr4d55s2，锝的七个价电子都可以成键，形成-1+7价的化合物。稳定价态为+4和+7价，但其他价态可通过加入配体形成配合物得到。在实际操作中，用生理盐水淋洗99Mo-99mTc发生器可以得到高锝酸根（99mTcO4），它是锝在水溶液中存在的最普遍、最稳定的形式。在无还原剂存在下，99mTcO4在水溶液中能够稳定存在。

2、当有还原剂如Sn2+存在时，99mTcO4会发生还原反应，形成各种低价态的锝化合物或配合物，这是制备各种锝放射性药物的基础。对于锝放射性药物的制备方法，按照反应前后锝价态的变化，原则上可以分成三类：还原方法、还原交换方法和配体交换方法。在探索锝放射性药物的过程中，大多以99mTcO4为起始原料，在配体存在下还原Tc（）制备各种低价态的锝配合物。目前，制备锝药物的还原剂报道很多，如Sn2+、Cu+、Fe2+等金属离子还原剂、钠汞齐等金属还原剂、HX（X=Cl，Br，I）、二氧化硫（SO2）、硼氢化钠（NaBH4）、硼氢化钾（KBH4）、肼（NH2NH2）、羟胺（NH2OH）、连二硫酸钠（Na2S

3、2O4）、次亚磷酸（H3PO2）、巯基化合物（RSH）、抗坏血酸、甲脒亚磺酸（HN=C（SO2H）NH2、）、有机膦和胂等。当99mTcO4还原时，最终的还原产物依赖于还原剂的性质、配体的种类和合成中的条件等。在各种还原剂中，用的最多的是亚锡离子。本次实验采用的锝直接标记法属于还原方法，即葡庚糖酸钠（Na-GH）在SnCl2存在条件下，将99mTcO4淋洗液加入，形成99mTc-GH放射性药物，反应为：2. 影响标记率的因素在实际标记反应中，影响标记率的因素主要有配体用量、反应温度、反应时间、还原剂用量以及反应体系PH值影响等。上述因素均在不同程度上影响实验结果。摸索最佳反应条件的一般方法是，

4、固定其他条件不变，改变某个影响因素，检测标记率的变化。三、仪器与试剂仪器：NaI（Tl）闪烁探测器、毛细管、pH试纸、青霉素小瓶、聚酰胺薄片、试管等试剂：高锝酸钠淋洗液（99mTcO4），葡庚糖酸钠（GH），0.1mol/L NaOH，1mol/LNaOH，0.1mol/L HCl，SnCl2(新配制)，生理盐水，乙腈四、实验步骤1. 99mTc-GH的制备称取相应质量的GH固体放入青霉素小瓶中，加水配制成GH溶液（100mg/mL）。取一定量的GH溶液，向溶液中加入一定量的的SnCl2（5mg/ml）的盐酸溶液（分别为0.05mg, 0.1mg, 0.5mg, 1mg），迅速用氢氧化钠溶液调

5、节pH在58。然后向小瓶中注入0.1 ml高锝酸钠淋洗液，摇匀，室温反应10 min。反应结束后点样，以生理盐水-聚酰胺薄膜体系展开，并用NaI（Tl）闪烁探测器测量放射性计数，从而计算标记率，选取最佳的还原剂用量。通过检测标记率的变化摸索最佳的还原剂用量，固定其他条件不变，摸索最佳的反应pH值(3, 45, 67, 89, 12)。在此基础上，得到制备99mTc-GH的最佳实验条件。五、实验数据处理与结果分析表一 时间为变量时的标记率（GH：0.1mg , pH: 6-7）时间变量2min时间变量5min时间变量15min平行1平行2平行3平行1平行2平行3平行1平行2平行3标记率96.19

6、%95.70%96.12%96.66%97.83%98.82%99.60%96.11%99.95%平均标记率96.00%97.77%98.55%表二 pH为变量时的标记率（GH: 0.1mg , t: 15min）pH 4-51mg15minpH 6-7pH 8-9平行1平行2平行3平行1平行2平行3平行1平行2平行3标记率91.65%87.45%90.33%99.60%96.11%99.95%98.07%97.55%98.02%平均标记率89.81%98.55%97.88%表三 配体GH用量为变量时的标记率（pH: 6-7 , t: 15min）GH 0.1mgGH 0.5mgGH 1mg平

7、行1平行2平行3平行1平行2平行3平行1平行2平行3标记率93.86%91.34%89.37%99.33%99.03%98.62%99.60%96.11%99.95%平均标记率91.52%98.99%98.55%实验结果分析可看出，制备99mTc-GH的最佳实验条件是：最佳反应时间是15min，最佳配体用量是0.5mg，最佳反应pH值是6-7。但是在时间最佳条件的寻找中，没有找到标记率最高时的时间点，如果能测量反应10min时的变量或者再继续监测如15min时的标记率，则能找出最佳反应时间的点。六、问题讨论1. 配体直接标记法的优点和缺点是什么？答：配体直接标记法的优点有：几乎所有蛋白质和大多数多肽均含有能形成配位键的基团，根据其暴露和游离的程度，可能与低价锝直接形成络合物，尤其当含有-SH基的待标记蛋白质浓度高时，可获得放化纯度较高的锝标记化合物。而它的缺点是：影响因