HPLC法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷的含量_叶晶晶

1、第 29卷 第 1期 2011年 1月中 华 中 医 药 学 刊CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NEVo. l 29No . 1Jan. 2011206 中 华 中 医 药 学 刊HPLC 法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷的含量叶晶晶(浙江 中医药大学 , 浙江 杭州 310053摘 要 :目的 :建立不同产地桃仁中苦杏仁苷含量的高效液相 测定方法 , 测定不同产地桃仁药材中苦杏仁苷的含量 。 方法 :色谱柱 Hype rsil B D S C 18(250mm 4. 6mm, 5L m, 流动相 为乙

2、腈 -水 (17B 83 。 结果 :苦杏仁 苷在 4. 9480L g /mL 范围内线性关系良好 , r=0. 9996, 平均回收率为 99. 87%, RSD =1. 01%。 含量测定结果表明 , 不同产地 桃仁药材中苦杏仁苷含量存在差异 。 结论 :该方法简便快捷 , 准确灵敏 , 重复性好 , 可用于桃仁药材的质量控制 。 关键词 :桃 仁 ; 苦杏仁苷 ; HPLC 法 ; 含量测定中图分类号 :R284. 1 文献标识码 :A 文章编号 :1673-7717(2011 01-0206-02D eter m i n ati o n of Am ygdal i n P runus

3、 p ersica l (L . Batsch Pr oduced i nD iffer ent A r eas by HPLCYE Ji ng-ji ng(Zhejiang C h i nes e M edica lUnivers it y , H angz hou 310053, Zhejiang , Ch i naA bstrac t :O b jecti ve :To de t e r m ine quan tita tively the conten t of a m ygda lin i n P runus pers ica l fo r m t hree differen t a

4、 reas (Y unnan , Shanx , i Shandong. M et hod:Chro m a t og rap colu mn H ype rsil BD S C 18(250mm 4. 6mm, 5L m w as used ,mobil e pha se w as A ce t onitrile :w a t e r(17:83. R esult :The linea r range of amygda lin w as 4. 94-80L g /m L , r =0. 9996. T he average recove ry o f sa m ple w as 99. 8

5、7%, RSD =1. 01%.The conten ts o f Amygdali n w ere differen t obv i ousl y i n sa mp l e s from d iffe rent areas . Concl usion :This me t hod is si mp l e , separated com plete l y and rep roducibility , and can be used a s quantity contro l standard .K ey w ords :P runu s pers ica (L . Ba tsch ; A

6、m ygda lin ; HPLC ; de ter m inati on 收稿日期 :2010-08-27:(-女 , , 师 , , 研桃仁为蔷薇科植物桃 P runus persica (L . Bats eh 或山桃 P. davidiana (Carr . F ranch . 的干 燥成熟种 子。其味 苦、 甘 ,性平 , 具有活血化瘀、 润肠通便等功效 , 主治经闭、 痛经、 腹部 肿块、 跌打损伤、 肺痈、 肠痈等 症。现 代研究表明 , 其主要 有 效成分为苦杏仁苷 1, 具有抗肿瘤、 抗溃疡、 调节免疫和抗脑 缺血等作用 2-5。本文采用 HPLC 法 , 对不同产地的桃 仁

7、药 材中苦杏仁苷的含量进行测定 , 旨在比较不同产地桃仁药材 的品质差异 , 为筛选优质桃仁种质资源提供参考。1 仪器和试药岛津 LC -10AD 液 相色谱 仪 , LC -10A DV P 泵 , SPD -10A 紫外检测器 , KQ -5200型超 声波 清洗 器 (40k H z , 200W, 昆山超声仪器 有限公司 , AB135-S 电子 分析天平 (梅 特勒 -托利多仪器有限公司 。苦杏仁苷对 照品 (中 国药 品生 物制 品检 定所 产品 , 供 含量测定用 , 批号 :110820-200403 。本 实验桃 仁经 本校 资源鉴 定 教 研 室 俞 冰 副 教 授 鉴 定

8、 为 桃 仁 Prunus pers ica (L . Batseh 。乙腈 (色 谱纯 , 天津 四友 精细 化学 品有 限公 司 , 其它试剂均为分析纯。 2 方法和结果2. 1 色 谱条 件及 系统 适应 性试 验 色 谱柱 :Hypersil BD SC 18(250mm 4. 6mm , 5L m ; 流动相 :乙腈 -水 (17B 83; 流 速 :1. 0m L #m i n -1, 检 测波 长 为 210n m; 柱 温 :25e ; 进 样 量 :10L L 。在此色谱条件下 , 测定 对照品 溶液、 供试品 溶液 的色谱图 , 结果见 图 1。理论 塔板 数以 苦杏 仁苷

9、 峰计 均在 3000以上。2. 2 对照品溶液 的制备 精 密称 取苦杏 仁苷 对照 品 4. 0m g , 置 25mL 量瓶中 , 加甲 醇溶液稀释 至刻度 , 定 容 , 混 匀 , 即得苦杏仁苷含量为 0. 16m g /m L 的对照品溶液。 2. 3 供试品溶液的 制备 精 密称 取桃 仁粗 粉 0. 5g, 置索 氏提取器中 , 用乙醚提 取 2h , 弃去 乙醚 , 再用 甲醇 提取 6h , 提取液转移至 50m L 量瓶 中 , 用 50%的甲 醇溶液 稀释 至制 度 , 摇 匀 , 超 声 提 取 15m in , 放 至 室 温 后 , 0. 45L m 微 膜 滤

10、过 6-7, 得供试品溶液。 2. 4标准曲线的 绘制 精密 称取 苦杏 仁苷 对照 品溶 液 , 对半稀释 , 用 50%的 甲醇稀 释至刻 度 , 取 10L L 进 样 , 测定 峰面积。以苦杏仁苷 浓度 为横坐 标 (X , 峰 面积 值 (Y 为 纵坐标 , 得回归方程 Y =6. 9504X +0. 4711, r =0. 9996, 结 果表明苦杏仁苷在 4. 9480L g /mL 范围内 线性关系良好。 2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 10L L , 平行进样 6次 , 按 /2. 10项色谱条件测定苦杏仁苷峰面积 , 结果 RSD 为 0. 72%, 表明仪器的精

11、密度良好。. 6 , 30项方 法制备供 5份 , , 结果第 29卷 第 1期2011年 1月中 华 中 医 药 学 刊CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NEVo. l 29No . 1Jan. 2011 207 中 华 中 医 药 学 刊RSD 为 2127%。图 1苦杏仁苷对照品 (A 和桃仁样品 (B 的 HPL C 色谱图2. 7 稳定性试 验 取 同一 供试 品溶 液 , 依次 在 0、 2、 4、 8、 12、 24h 进 样 10L L , 按上述色谱条件测定峰面 积 , 得 RSD

12、为2. 51%, 表明供试品溶液在 24h 内稳定。 2. 8加样回收试验 精 密称取已知含 量的同一桃 仁粗粉 6份 , 每份约 0. 1g, 分别 加入等 量的 苦杏仁 苷对 照品 溶液 , 按 /2. 30项制备供试品溶液 , 按上述色 谱条件 测定峰 面积 , 计算加 样 回 收 率 , 结 果 平 均 回 收 率 为 99. 87%, RSD 为 1. 01%。 2. 9 样 品的测定 分别精 密称取不同 产地的桃 仁药材各 0. 5g , 按 /2. 30项方法制 备供试 品溶液 , 按 上述色谱 条件测 定峰面积 , 计算苦杏 仁苷的含量 , 结果见表 1。 表 1不同产地桃仁中

13、苦杏仁苷的含量测定结果 (n =3产地 苦杏仁苷含量 (%RSD (% 云南 0. 791. 12河北 11. 060. 96河北 20. 821. 36河北 30. 880. 61安徽 1. 281. 97山东 10. 691. 62山东 20. 631. 11陕西 11. 380. 86陕西 21. 651. 333 讨 论(1 本实验研 究结果 表明 , 不 同产 地桃 仁药 材中 苦杏 仁苷的含量具有一定差 异 , 陕西产 桃仁药材 中苦杏 仁苷含 量普遍较高 , 为山东产桃仁的 2倍多 , 而同一产地的药材则 在含量差异上较小 , 这可能与其生长环境和栽培技术有关。(2 苦杏仁苷的含

14、量测定方 法有多 种 , 如 薄层扫 描法、 扫描法测定苦杏仁苷含量 , 操 作繁琐、 对较差 ; 采用硝酸银滴定法间接测定苦杏仁苷含量 , 样品前处理条件较为困 难 , 且滴 定条 件影 响因 素较 多 , 重 复性 较 差 ; 而分光光度法等 , 同样存 在中药 多组分 干扰等 问题 , 适 用性亦差 8-10。而高效液相色谱法具有 适应范 围广、 分离 效能高、 重复性良好等优点 , 是目前含量测定的主要方法之 一 , 已经在中药研究 中得 到了广 泛的 应用。本实 验根 据苦 杏仁苷的 结构特点及性 质 , 结合 HPLC 法 对苦杏 仁苷 的研 究基础 , 采用 HPLC 法测定不同

15、产地桃仁中 苦杏仁苷含 量 , 为开发利 用桃仁、 苦杏仁苷及评价桃仁质量、 临床合理用药 提供科学依据。 参考文献1 邢国秀 , 李楠 , 杨美燕 , 等 . 天然苦 杏仁苷的 研究进展 J .中成药 , 2003, 25(12:1007-1009.2 连彦军 , 陈道达 , 黄韬 , 等 . B -葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导Lo V o 细胞凋亡及活性对 B ax 与 bcl 22基因表 达和 C aspas e -23的影响 J .肿瘤防治杂志 , 2005, 12(6:413-416. 3 蔡莹 , 李运 曼 , 钟 流 , 等 . 苦 杏仁 苷对 实 验性 胃 溃疡 的 作用J .

16、中国药科大学学报 , 2003, 34(3:254-256.4 方伟蓉 , 李运曼 , 钟林霖 , 等 . 苦杏仁 苷对佐剂 性炎症影 响的实验研究 J .中国临床药 理学与治 疗学 , 2004, 9(3:289-293.5 杨小平 , 张春梅 , 冯霞 . 苦杏仁苷口服制剂临床疗效初探 J .中药材 , 2006, 29(6:636-637.6 国家药典委员会 . 中华 人民共和 国药典 #1部 S.北 京 :化学工业出版社 , 2005:196.7 吴巧凤 , 文欣欣 , 余陈欢 , 等 . 桃核承 气汤中桃 仁单煎与 桃仁甘草合煎的苦杏仁苷含 量变化研 究 J .浙 江中医药 大学学

17、报 , 2009, 33(5:738-740.7 李吉来 , 于留荣 . 苦杏仁 和桃仁中 苦杏仁苷 的薄层扫 描测定J . 中药材 , 1992, 15(1:31.8 C air n s T , Froberg J , Gonzal es S , et a. l An al ytical Che m istry ofAmygdalin J .Anal ytica lChe m istry , 1978, 50(2:317. 9 杨玲 玲 , 常 军民 , 姚军 . HPLC 测定 天山 花楸 中 的苦 杏 仁苷J . 华西药学杂志 , 2007, 22(5:589-590.两种与皮肤基细胞癌相关的遗传变异被发现冰岛 研究人员日前宣布 , 他们新发现两种遗传变异 , 体 内同时存在这两种变异的人患皮肤基细胞癌的风险比常人 要高出近 3倍。冰岛 /遗传解码 0公司的研究人 员在新一 期英国 5自然 遗