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文档简介

1、1 PBS 的配方及功能：NaCI 8.0g , KCI 0.2g, NazHPCT 12H0 3.48g , KH2PQ 0.2g加蒸馏水至 1000ml。pH= 6.48 + lgn(Na 2HPQ4)/n(KHPQ4)红细胞裂解液作用：用红细胞裂解液直接与血液或脾细胞悬液混合， 或用于重悬离心收集的血细胞， 可以选择性裂解其中的红细胞， 而不 破坏白细胞。 随后低速离心去除红细胞裂解碎片和血小板，收集白细胞，回收率可达 90%以上。富集的白细胞的生物学活性不受影响，可 用于各种后续的细胞实验。从富集的白细胞中提取DNA RNA和蛋白质时，可免除红细胞成分如血红素等的不利影响。 适于裂解人

2、全血、 小鼠全血或脾细胞悬液中的红细胞。规格：红细胞裂解液 120 ml储存：常温运输， 4ºC 24 个月用法：与全血混合直接裂解红细胞1. 采取 0.35 ml 人或小鼠全血，加入 1.5 ml 离心管2. 加 1 ml 红细胞裂解液，颠倒混合，室温放置 10 min 。3. 1500g 离心 5分钟，弃上清。细胞沉淀应为白色。如果裂解不完 全，用1 ml裂解液重悬细胞沉淀，放置10 min。1500g离心5分钟, 弃上清。4. 用1.5 ml PBS或生理盐水重悬细胞，1500g离心5分钟，弃上清。 重复洗涤 2 次。重悬细胞沉淀后裂解红细胞1. 采取1 ml人全血或小

3、鼠全血，枸橼酸钠或 EDTA或肝素抗凝。或 用1个小鼠脾脏制备的细胞悬液，1500g离心10分钟收集所有细胞。 弃上清。2. 加3 ml 裂解液重悬细胞 （约100200万个细胞 ）。颠倒混合，室 温放置 10 min 。3. 1500g 离心 5 分钟，弃上清。细胞沉淀应为白色。如果裂解不完全，应重复步骤 2-34. 用1.5 ml PBS或生理盐水重悬细胞，1500g离心5分钟，弃上清。 重复洗涤 2 次。说明：1. 每 3 ml 裂解液可充分裂解约 1 ml 的全血中的红细胞，可按此比 例扩大或缩小规模。加入过多少的裂解液可能导致红细胞不全裂解。2. 裂解人和小鼠红细胞效果佳，裂解其他动物红细胞时效率略低但 仍可裂解。3. 尽量使用4ºC储存小于1周的血液。红细胞裂解液，PBS(7.4 )。红细胞裂解液的配方是139.6mmol/LNH4CL 16.96mmol/L Tris ，用 1mol/L HCL 调 PH至 7.2 禾口 PBS的配己方是0. Olmol/L PBSnaclNA2HPO4.12H20NAH2PO4. 2H20浓度mol/I0. 20. 2体积/迅8119分子量358.14156. 01L/ml0. 0010. 0012

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