薄层色谱法(TLC)

1、薄层色谱法薄层色谱法(TLC(TLC) )班级：药物化学班级：药物化学姓名：姓名：XXX日期：日期：2016.10.22课程：现代分离技术课程：现代分离技术一、定义一、定义：薄层色谱：常用TLC表示，又称薄层层析，属于固液吸附色谱。原理是利用混合物中各组分吸附或溶解性能的不同，达到分离的效果。另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。二二、特点特点及应用原则及应用原则：1、薄层色谱的特点： 灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。2、展开剂体系的选择： 一般展开剂体系选择如下：根据分离样品性质、薄层色谱板性

2、质选择一个二元溶剂体系，通过调节溶剂比例以寻求适合Rf值。三、仪器与材料三、仪器与材料1 1、薄层板、薄层板2 2、点样器、点样器3 3、展开容器、展开容器4 4、显色设备、显色设备5 5、色谱检视装置、色谱检视装置1、薄层板、薄层板1.1薄层板分类自制薄层板普通薄层板和高效薄层板硅胶GF254、氧化铝、纤维素、聚酰胺薄层板和C18键合相、氨基键合相、腈基键合相、二醇基键合相薄层板(固定相类型分类)1.1.1自制薄层板: 须能保证色谱质量；对薄层板需特别处理和化学改性可用；节约成本。玻璃板要求：表面光洁、平整，厚1-2mm，洁净。规格：10cm10cm、10 cm15cm、10 cm20cm、

3、20 cm20cm1.1.21.1.2薄层板的自制方法薄层板的自制方法：1、初步溶解CMC钠盐（0.5%-0.8%）2、恒温再次溶解3、离心或抽滤（取上清液）4、溶解硅胶（1:3）注：超声溶解。5、涂布6、晾干活化2 2、固定相、固定相： 最常用固定相： 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254； 氧化铝； 硅澡土； 纤维素等。 吸附剂：直径10-40m 黏合剂：0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠、10%-15%煅石膏、淀粉、有机高分子聚合物、特殊要求可用缓冲液、稀碱液等。3 3、点样器、点样器 毛细管毛细管 微量注射器微量注射器 半自动及全自动点样器半自动及全自动点样器4 4、展开、展开

4、容器容器 专用平底或双槽展开缸、盖能密闭 特殊水平展开缸5 5、显、显色设备色设备 喷雾显色：玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，用压缩气体可使试剂呈均匀细雾状喷出 浸渍显色 蒸气熏蒸显色显色剂的要求：显色剂的要求：至少可以把微克级的被分离物质显示出来；能给出一个确定的显示区域；显示区域有一定的稳定 性。显色剂可以分成两大类：显色剂可以分成两大类： 一类是检查一般有机化合物的通用显色剂； 另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。 常用通用显色剂常用通用显色剂显色剂显色剂呈现颜色呈现颜色硫酸-水；硫酸-乙醇不同有机化合物显不同颜色0.5碘的氯仿溶液 显黄棕色中性0.05高锰酸钾溶液 显黄色碱性

5、高锰酸钾试剂 显黄色铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2molL盐酸溶液，则蓝色加深。5磷钼酸乙醇溶液 还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。专属性专属性显色剂显色剂显色剂显色剂适用化合物适用化合物硝酸银过氧化氢卤代烃类荧光素溴不饱和烃四氯邻苯二甲酸酐芳香烃甲醛硫酸多环芳烃3，5一二硝基苯酰氯醇类品红亚硫酸醛基化合物硝普钠铁氰化物肪族含氮化物四、操作方法：四、操作方法：点样点样 形状：圆点状、窄细条状 点样位置：距底边1-1.5cm、圆点直径不大于0.3cm、条带宽0.5-1.0cm 样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放

6、入干燥器里晾干。展开展开 以直立展开为多 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点0.5cm为宜； 展开距离：8-15cm 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟展开系统的饱和展开系统的饱和 一般使用的是一般使用的是双槽双槽的展开缸，一槽用来放的展开缸，一槽用来放展开剂展开剂，另一槽可加入，另一槽可加入氨水或硫酸氨水或硫酸。把待。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在止边

7、沿效应，饱和时间在半个小时半个小时左右。左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量响不大，当然动作应该尽量轻、快轻、快 五、注意事项五、注意事项 用涂布器制板的要点：玻璃板要用涂布器制板的要点：玻璃板要清洁清洁；调浆要；调浆要均均匀匀；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。 自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损、无污染。无气泡、无破损、无污染。 薄层厚薄对薄层厚薄对R Rf f值影响：硅胶值影响：硅胶G G板当厚低于板当厚低于150m150m时，时， R Rf f值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚2