胃舒散对消炎痛所致大鼠小肠损伤的保护作用(一)

1、胃舒散对消炎痛所致大鼠小肠损伤的保护作用(一)【摘要】目的：研究胃舒散对消炎痛所致大鼠小肠损伤的保护作用及机制。方法：皮下注射消炎痛(10mg/kg)制作大鼠小肠损伤模型。用光镜、扫描电镜和透射电镜观察不同剂量3 0、1 5、胃舒散对小肠损伤的影响，同时检测小肠黏膜髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以及血清 NO含量。结果：消炎痛引起明显的小 肠黏膜损伤，伴有NO、MPO、MDA含量增加及SOD活性下降。胃舒散剂量依赖性地减少小肠黏膜损伤指数，提高了胃组织SOD活性、降低了 MPO、MDA含量，但对血清NO水平无明显影响。结论：氧自由基及NO参与了消炎痛

2、所致小肠黏膜的损伤，胃舒散对此病变有明显保护作用，其机制与抗氧化作用有关。【关键词】小肠损伤消炎痛胃舒散一氧化氮超氧化物歧化酶丙二醛AbstractObjective:TostudytheprotectiveeffectofWeishusa non smalli ntesti nallesi on si nducedbyi ndomethaci nin rats.Methods:Wistarratswereinjectedi ndomethaci n( suspe nsion 10mg/kg)subcuta neously,a ndt hesmallintestinewasexaminedfo

3、rlesions24hourslater.Thedifferentdoses 3 0 、1 5 、ofWeishusa nwereadm ini steredi.g.twice,i ntesti nalmucosalcha ngeswereobservedbyqua ntitativehis tology，sca nnin gelectr onm icroscopya ndtra nsmiss on electro nm icroscopy.Superoxidedismutase(SOD)、myeloperoxidase(MPO)activitiesa ndmalo ndialdehyde(M

4、DA)levelsi nin testi naltissuesa ndn itricoxid e(NO)levelsi nserumweredetermi ned.Results:Severelesi onsin thejej unuman dileumwerecausedbyi n domethaci nan dtheNO、MPOandMDAcontentsweremarkedlyincreasedfPO 05)fWeishusandose_d即end的协卩疋陀朮已出 heintestinallesionsjPO 05,enhancedSODactivities(P0 05)anddecre

5、asedMPOandMDAIevels(P0 05)butnotaffectedNOIevels(P>0 05),Conclusion:OxygenfreeradicakandNOmayplayimportantr olesi nin testi nallesi on si nducedbyi ndometha cin .Weishusa ncan protectthesmalli ntesti nebya ntioxida tionm echa ni sm.KeyWordsin testi nallesi on ;i ndomethaci n;Weishusa n;n itricoxi

6、de;superoxidedismutase;malo ndialdehyde 近年，随着老年人口的增多，非甾体类消炎药(NSAID)在防治冠心病、风湿性骨关节炎等疾病中应用愈来愈广泛，其导致的胃肠疾病亦逐年增多。胃舒散是我院自行研制的中西药复方散剂，多年临床应用显示对胃炎、消化性溃疡及胃肠功能紊乱等有良好的疗效1, 2，但是否对药物引起的小肠损伤有治疗作用尚不清楚。本工程通过检测有关生化指标并借助光镜、电镜、生化技术观察胃舒散的保护作用，旨在探讨消炎痛致小肠损伤的机理并为临床寻找新的治疗方案。1材料与方法1 1动物与药物 Wistar大鼠汕头大学医学院实验动物中心提供。体质量 (220 &#

7、177; 35)g雌雄 各半40只，分笼饲养，自由饮水(过滤除菌的自来水)。胃舒散由我院药剂科生产(批号：粤药制字H03050164)。模型制备及实验分组实验前大鼠禁食、水2h。模型制作：将消炎痛粉溶于质量分数5%碳酸氢钠溶液内，按10mg/mL浓度配成细混悬液，实验时按10mg/kg的剂量1次皮下注射， 24h后断颈处死动物。分组：胃舒散治疗组(在注射消炎痛前30min及注射后8h分别给予不同浓度但容量相同的胃舒散溶液，分2次灌胃)，胃舒散中剂量组，即按成人剂量15倍给药)，胃舒散高剂量组3 0訓kgd)丨和胃舒散低剂量组° 75g/(kg d)。模型对照 组用等量的体积分数的NS

8、灌胃，正常对照组皮下注射NS,亦给等量的0灌胃。注射消炎痛后大鼠禁食不禁水，在第2次灌胃前仍需禁水 2h。光镜检查大鼠处死后剖腹， 沿肠系膜附着的对侧剪开小肠，在回肠中段6cm处取组织，用4C等渗NS冲净肠内容物及黏液，体积分数10%的中性甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，苏木精 _伊红染色，光镜下观察，按NEC法进行小肠损伤评分3。电镜观察扫描电镜：将大鼠小肠组织放入含透明质酸酶和a糜蛋白酶pH56溶液中，在振荡器上持续振荡，去除黏膜面表层黏液，体积分数的戊二醛和体积分数 2%的四氧化锇双重固定，常规乙醇系列脱水，醋酸异戊脂过渡，在HCP_2型临界点枯燥仪日立公司，日本上枯燥，喷金

9、后在 JSM_6360LA扫描电镜JEOL公司，日本下观察。透射电镜：将 小肠在冷的4%的戊二醛_磷酸盐pH? 4中切成小块，预固定 2h, 1%的锇酸后固定1h,环 氧树脂包埋，LKB_2088型超薄切片机LKB公司，瑞典切片，醋酸铀、硝酸铅双重染色后， 在H_800型电镜日立公司，日本下观察。生化指标检测取回肠中段组织，制成匀浆并离心，取上清液进行检测。SOD测定采用改进的亚硝酸盐法，在 DU650型分光光度计Beckman公司，美国上测定，使空白管 OD值 下降50%的SOD量定为酶活力1个亚硝酸盐单位NU/mg。NO测定用NO酶法，设空白管、 标准管和测定管，测定管内参加待测血清，各管

10、混匀放置10min ,35004000r/min离心10min，取上清液0 8tTlL，参加显色剂.，混匀，15min后测其吸光度值，在标准曲线查找相应 NO浓度NU/mL。MPO测定见参考文献4U/g。 MDA测定按硫代巴比 妥酸缩合法，试剂盒由南京聚力生物提供。蛋白质测定采用Lowry法。统计学处理计量资料及损伤指数用±s表示，用统计软件，行单侧 ANOVAE及t检验分析。2结果21光学显微镜观察正常对照组上皮细胞排列整齐，形态根本正常，未见细胞明显损伤，少数炎性细胞浸润，损伤指数。模型对照组小肠黏膜固有层水肿并伴有肠系膜缘炎性细胞浸润，小肠绒毛顶端上皮下可见囊状间隙，呈广泛黏膜

11、炎症并伴纵向溃疡深浅不一、点状、线状，沿小肠壁环周围走向的溃疡少见，尤以中段及远端小肠病变明显，损 伤指数，明显高于正常对照组。胃舒散高、中剂量组小肠黏膜损伤指数分别为和，与模型组比有统计学意义，。胃舒散小剂量组损伤指数为，与模型组比无统计学意义，说明高、中剂量胃舒散对小肠损伤具有保护作用。2 2扫描电镜观察正常对照组小肠黏膜绒毛约150卩mx 50卩玛呈条柱状排列，外表光滑、完整，有片状皱折图1A，封3。模型对照组小肠上皮外表破损明显，有纵向溃疡图1B,封3。胃舒散中、高剂量组小肠黏膜损伤明显减轻，仅见点状溃疡，周边上皮结构完整图1C,封 3。透射电镜观察正常对照组小肠黏膜为单层柱状上皮，其间夹有少量杯状细胞，上皮游离面有丰富的微绒毛， 上皮细胞间除游离端为紧密连接外，多数为中间连接和相嵌连接，胞质丰富，线粒体、粗面内质网较多。模型对照组上皮细胞极性消失，杯状细胞显著增多，黏 膜柱状上皮细胞体积缩小，可见细胞凋亡小体，核有固缩、溶解现象，异染色质边集成半月状。胞质内线粒体断脊、空泡变性，溶解，粗面内质网脱颗粒，血管普遍扩张，毛细血管内 皮细胞出现破裂图2A, 封 3。胃舒散中、高剂量组小肠黏膜上述损伤那么较轻，无核膜断裂 溶解，线粒体断脊，溶解少见 图2B, 封 3。胃舒散对大鼠血液 NO、小肠组