内毒素肺损伤时肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化

1、内毒素肺损伤时肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化中性粒细胞活化在急性肺损伤中的作用受到广泛重视，但淋巴 细胞 与肺损伤的关系则报道较少。本文应用内毒素肺损伤和化学发光技术，观察肺淋巴液中的淋 巴细胞的活性，以探讨淋巴细胞在肺损伤中的可能作用。 方法(一)绵羊肺淋巴瘘的制备和肺损伤模型复制：健康无孕雌性绵羊17只。按Staub法造瘘成功的13只分为内毒素组(endotoxin,ET)10只和对 照(VC)组3只。34 d后，ET组予以大肠杆菌内毒素(O55:B5,Sigma)1.5 g/kg体重加生理 盐液0.1L，恒速静滴20 min；VC组以生理盐液0.1L静滴，速度同上。于给ET前和后0.5

2、、 1 、 2、 4和6 h观测指标变化。(二)生理指标的观测：用生理记录仪测肺动脉压；用ABL-3型血气分析仪行血气分析。每30 min收集淋 巴液1次 。离心后，淋巴细胞部分用作化学发光测定，上清部分用作蛋白含量测定。计算淋巴/血浆 蛋白比值和肺淋巴蛋白清除率。(三)淋巴细胞化学发光测定：淋巴细胞调成细胞107个/mL。先取1 mL 37下温育20 min ，加入鲁米诺(10-3m ol/L) 50L后再温育10 min。用生物化学发光仪(SHG-1型)测定6s50次的基础值后，加 入Con A溶液(1 mg/mL)0.1 mL,再测6s50次。计算诱发前(基础)和诱发后化学发光的峰值 及

3、5 min的总强度，并以countsmin-1/104细胞表示。(四)数据处理：数据以s表示。两均数差异显著性用t检验判定。给ET前 、后的差异 用F分析，方差不齐者用F 分析。肺淋巴蛋白清除率与淋巴细胞化学发光的关系 用直线相关分析。结果(一)呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化：如表1，给ET 30 min后，ET组呼吸频率和肺动脉压达最高值，PaO2于1 h达最低点，而 肺淋巴蛋白清除率到4 h和6 h达最大值。表1呼吸频率、血氧分压、肺动脉压和肺淋巴蛋白清除率的变化Tab 1 The changes of respiration rate,artery oxygen p

4、artial pressu re,pulmonaryartery pressureand the clearance of pulmonary lymph protein(s)GroupET(n=10)VC(n= 3)Pre-ETPost-ET(h)1246RRET20.736.8958.1816.4543.0912.4733.647.7930.73 6.28?VC19.531.1617.331.1518.002.0018.671.1618.002.0 0PaO2ET12.471.308.442.210.321.16? 10.921.4110.832.07VC12.511.2912.110.8

5、012.060.6712.310.8412.100.5 2PpaET18.000.8931.825.6227.274.76?23 .153.5819.642.16VC18.330.5818.002.0017.671.5318.330.5818.330.5 8CLpET1.560.515.151.139.372.5210.972.610.413.06VC1.460.471.260.201.470.471.480.361.520.44ET=Endotoxin group;VC=Vehicle controlgroup;RR=Respiration rate;Ppa=Pulmonary art er

6、y pressure; CLp=Clearance of lymph protein*P0.05, *P0.01,vs pre-ET; P0.05, P0.01,vs VC(二)淋巴细胞化学发光的变化及与肺淋巴蛋白清除率的关系：淋巴细胞基础发光峰值和发光总强度在给ET 4后2 h显著增强(P0.01)，6 h达最高点 ， 见表2。在给ET和6 h，淋巴细胞发光总强度与肺淋巴蛋白清除率显著相关(r=0.7458和0 .8436,P0.05)。表2肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化Tab 2 The changes of chemiluminescence of lymphocytes in the

7、 lun g lymph (103counts*min-1/104 cells,s)GroupET(n=10)VC(n= 3)Pre-ETPost-ET(h)1246Peak value of BCET0.5580.1830.7230.0231.008 0.319*1.1450.369*1.2900.401*VC0.5650.0690.5730.1290.5880.1270.6130.1410.6330.143Total value of BCET11.6483.46814.6295.08420.41 57.580*23.9608.795*24.8568.005*VC12.1811.30912

8、.3290.82112.4010.41112.5430.61712.501 0.556Peak value of ConA-ICET2.2730.9383.4320.9394.6411. 041*5.2021.308?*5.5691.309?*VC2.2210.3122.3160.3292.3500.3192.4320.3222.4950.323Total value of ConA-ICET26.91910.28451.32624.427*69.53020.196?*69.74814.588?*74.93017.956?*VC26.3356.44526.5586.93427.4896.970

9、27.8346 .07528.0255.731ET=Endotoxin group;VC=Vehicle control group;BC=Basic chemiluminescence;ConA-IC =ConA-induced chemiluminescence*P0.05;*P0.01,vs pre-ET;P0.05, P0. 01,vs VC 讨论淋巴细胞与肺损伤的关系，目前尚不清楚。Duke和Meyrick等发现内毒素肺损伤后肺 组织中淋巴细胞聚集增多并处于活化状态。本实验用化学发光技术检测淋巴细胞显示，给ET 后2 h开始，肺淋巴液中的淋巴细胞均处于活化状态，并在ConA的刺激下，这些细胞发生呼 吸爆发的能力也显著增强。许多文献报道内毒素肺损伤分为两期。期(02 h)以肺动脉压升高为主要特征，期(2 6 h)以肺淋巴蛋白清除率增加为主要特征。本实验在给ET 2 h后才出现发光显著增强，说 明期的呼吸、肺动脉压和血氧变化