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1、ABO血型鉴定（盐水法）1 原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集实验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗B。2 标本采集：2.1标本种类：采集静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将红细胞用8.5%生理盐水配成5%红细胞悬液。2.2标本要求：抗凝要求EDTAK2抗凝管或干燥管均可。标本应无溶血，标签填写内容齐全，无涂改。3标本储存：操作完标本4冰箱保存7天。4标本运输：室温运输。5

2、标本拒收标准：细菌污染、溶血标本标签填写内容不齐全或有涂改、标本量太少不能作检测。6试剂6.1试剂名称：ABO血型定型试剂（人血清）6.2试剂生产厂家：中国医学科学院输血研究所、四川协和生物技术有限责任公司6.3试剂组成试剂1.抗-A血清，效价256，2-8避光保存，有效期为一年，在效期内使用。试剂2.抗-B血清，效价128，2-8避光保存，有效期为一年，在效期内使用.6.4试剂名称：人ABO血型反定型红细胞试剂6.5试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司6.6试剂组成：A1、B及O型试剂红细胞盐水悬液。7仪器7.1离心机：80-2上海手术器械厂7.2电热恒温水箱：上海医疗器械厂7.3显微

3、镜：OLYMPUS(日本)8操作步骤及结果判断：8.1试管法 取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明抗-A、抗-B和抗-A+B，用滴管分别加抗-A、抗-B和抗-A+B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。另取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。观察

4、结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。凝集强度判断标准4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。+/- = 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF = 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。按表1-6-1报告受检者红细胞ABO血型8.2玻片法取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成

5、方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清2滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。另取洁净玻片一张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清2滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如以玻片作试验时，也可用低倍镜观察结果。表1-6-1 ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗- A+B A细胞 B细胞 O细胞 + + A + + +

6、 B + O + + + + + AB 注：+ = 凝集； = 不凝集9操作性能：快速简便，特异性强，重复性好。10超出范围结果处理：10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致假阳性；若有此怀疑，建议在最后滴入悬浮液时将试管立即置入37水浴中，轻轻转动试管混匀，并在30秒内观察结果。10.2红细胞悬液为5%为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。10.3各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。10.4正反定型结果不一致的原因有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种：分型血清效价太低、亲和力不强

7、。如抗-A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。受检者血清中缺乏应有的抗-A及/或抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。老年人血清中抗体水平大幅度下

8、降。10.5正反定型结果不一致的解决办法如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重复试验1次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。初步的检查步骤包括：另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-A1，抗-A+B及抗-H做试验可以得到其它有用的信息。对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑时抗-I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。如果

9、试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4oC放置30min，用显微镜检查核实。如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放射试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：（1） 观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。（2） 用受检者红细胞与自身血清作

10、试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。（3） 检查唾液中是否有A、B物质，如果时分泌型，可检出A物质而无B物质。（4） 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：能被人和许多家兔的血清凝集。能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。不被脐带血清凝集。通常不与自身的血清凝集。如有条件可用外源凝集素加以鉴别。11注意事项11.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。11.2试管、滴管和

11、玻片必须清洁干燥，防止溶血。11.3试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。11.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。11.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4oC为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍再室温（2024oC）内进行试验，37oC可使反应减弱。11.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。11.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。11.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。12.参考文献中华人民

12、共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）.南京：东南大学出版社，1997，P89Rh（D）血型鉴定（盐水法）1 原理： 一般临床上根据红细胞表面D抗原的有无，将Rh血型分为RH阴性和阳性。如果红细胞表面有D抗原，与细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集，为RH阳性，如不发生凝集，表明红细胞表明没有D抗原，为RH阴性。2 标本采集：2.1标本种类：采集静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将红细胞用8.5%生理盐水配成5%红细胞悬液。2.2标本要求：抗凝要求EDTAK2抗凝管或干燥管均可。标本应无溶血，标签填写内容齐全，无涂改。3标本储存：操作完标本4冰箱保

13、存7天。4标本运输：室温运输。5 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本标签填写内容不齐全或有涂改、标本量太少不能作检测。6试剂6.1试剂名称：RhD(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）6.2试剂生产厂家：德国Biotest.AG6.3试剂保存;2-8避光保存，有效期为1年，在效期内用。7仪器7.1离心机：80-2上海手术器械厂7.2电热恒温水箱：上海医疗器械厂7.3显微镜：OLYMPUS(日本)8操作步骤及结果判断8.1玻片法在玻片方格中加1滴抗D试剂。再加2滴2%-5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。用干净玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D试剂。前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。判断标准4 +

14、= 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。+/- = 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF = 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。报告;受检者红细胞Rh（D）血型：阳性或阴性。出现阴性、弱阳性或结果不清楚时，进行试管法试验。8.2试管法在试管中加1滴抗D试剂。再加1滴滴2%-5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。以3200-3

15、400r/min离心15-30秒。轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。结果：凝集这为阳性反应，反之为阴性反应。报告方式同玻片法。9操作性能快速简便，特异性强，重复性好。10超出范围结果处理：10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致假阳性；若有此怀疑，建议在最后滴入悬浮液时将试管立即置入37水浴中，轻轻转动试管混匀，并在30秒内观察结果。10.2红细胞悬液为5%为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。10.3各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11注意事项11.1Rh血型系统的抗体多

16、由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。11.2Rh血型鉴定要严格控制温度与时间，因Rh抗原抗体凝集反应的凝集块比较脆弱，观察反应结果，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。11.3试剂质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。11.4试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。11.5操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。11.6按理IgM抗-D与相应红细胞的反应温度以4oC为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍再室温（2024oC）内进行试验，37oC可使反应减弱。11.7离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性

17、或假阴性结果。11.8观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。11.9判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。12.参考文献中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）.南京：东南大学出版社，1997，P89冰冻血浆解融操作规程1 目的 融化新鲜冰冻血浆，使冰冻血浆从固态装化解为液态状，利于临床输注。2 范围 使用于本院输血科3 职责发血、值班岗位完成4 原理KHR-1型冰冻血浆解冻箱采用加热箱、解冻箱、循环管路、仪器箱等组成的全自动循环冰冻血浆系统，水在加热箱内被加热至设定温度，然后由循环泵送入解冻槽，冰冻血浆袋放在专用的不锈钢解冻架中，水的流体静压力包

18、住血浆袋，与冰冻血浆进行热交换后再循环金加热箱内加热。循环的水流既能加快冰冻血浆与水的热交换，又能使冰冻血浆快速安全的溶解至适合人体输入的温度。由于加热箱与解冻槽的分离，加热管与周围高温不会破坏血浆的有效成分。5 操作5.1使用：按KHR-1型冰冻血浆融化箱使用说明书进行安装按照解冻箱使用说明，连接进水管、排水管电源的连接缺水显示 若显示屏显示“缺水”时，请采用人工加水，当水位达到时，仪器会自动进入预温状态。在解冻模式显示状态下：.1时间设定，一般设定18分钟，通过按“+”或“-”来调整设定时间，在解冻中可调整。.2开始解冻：将冰冻血浆装入袋内，再挂在解冻架上放妥当，并用架上压杆压住，按确定。

19、6保养6.1 清洗：使用自来水自动进水的用户，应经常清洗解冻箱，以确保箱体内部清洁。具体方法：在图2状态下，按动“左右”键使“清洗”反显，再按“确定”，及其进入清洗状态。此时应接好进水管和出水管，仪器清洗过程如下，先排空加热箱中的水，再注入清水，开始循环，然后排空水，清洗完成时，仪器自动返回到初始状态，可根据用户水质的好坏，一般每周清洗1至2次。使用蒸馏水的用户也必须每周清洗换水。6.2 温度效正：定时对水箱温度进行检测，如发现实测温度与显示温度相差0.5度以上，应对解冻箱进行校正。具体方法如下：在关机状态下，按住面板上的“上下”档开机，循环泵随即打开，加热箱内的水上升至解冻槽内，温度窗口显示

20、即时水温。用量程准确的0-50度分辨率为0.1度的水银温度计测量解冻槽内水温，经观察若显示温度与测量温度不一致，可按温度“+，-”键若干次直至两者温度相同。最后按一次“确定”键确认即完成效正。7 注意事项7.1清洗：注意经常清洗解冻箱，以确保箱体内部到清洁，采用自动进水清洗。7.2温度校正，没半年对水温测试是否与版面温度显示相同。7.3严格执行操作有关程序，保证水温正确。8.参考文献中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）.南京：东南大学出版社，1997，交叉配血（凝聚胺法）1.目的： 在临床用血前将患者血清和血细胞分别与献血员血细胞和血清进行交叉配血试验，以排除各种因素引

21、起的输血反应（如凝集或溶血），保证用血安全。2.适用范围：2.1 所有申请输用全血及红细胞悬液的标本。2.2 申请输用手工血小板的标本。3.职责：输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。4.操作4.1 原理 凝聚胺是带有高价阳离子的多聚季铵盐,溶解后能产生大量正电荷，可以大量中和红细胞表面的负电荷，减弱红细胞之间的排斥力，使红细胞彼此之间的距离缩小，出现正常红细胞可逆性的非特异性凝集：低离子强度溶液降低了红细胞的Zeta电位，进一步增强抗原抗体间的引力，增强了血型抗体凝集红细胞的能力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，在上述条件下，与红细胞紧密结合，出现特异性的凝集，此时加入枸橼酸盐解

22、聚液（悬浮液）以消除凝聚胺的正电荷，由IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不会散开，如血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集解散。4.2. 标本采集4.2.1 标本种类：新抽取的抗凝血4.2.2 标本要求：4.2.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝4.2.2.2 采血量：至少不低于2ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀） 标本采集要求.1 采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。.2 血标本容器要清洁干燥并事先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注入。.3 血标本标签填写必须与申请单上的病人

23、姓名、科别、床号、编号完全一致。.4 采血者要在申请单和标本标签上签名，写清采血时间，及时送检。.5 采血时要防止溶血及多量组织液混入 （多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时）在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。.6非急诊病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写在输血申请单上，以便核对。急诊抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求注明急诊字样由专人核对、贴标签、采取血标本送检。4.3. 标本储存 待测标本在2-8下的保存时间为72小时，已检测标本2-8冰箱保存7天。4.4. 标本运输 室温运输4.5. 标本拒收标准严重溶血、受污染，或者含有凝块的样品。标

24、本床号姓名等与检验单不符。标本上未注明采血者姓名4.6. 试剂4.6.1 试剂名称：凝聚胺介质试剂 4.6.2 试剂生产厂家：珠海贝索生物技术4.6.3 试剂组成：低离子溶液，凝聚胺溶液，悬浮液5.仪器 5.1离心机： 80-2上海手术器械厂6.操作步骤及结果判断6.1取受血者和供血者的血液标本，以3000r/min离心3分钟，分离上层受、供着血清或血浆，并在压积红细胞制成5%受、供着红细胞生理盐水悬液。6.2取2支小试管，标明主侧和次侧，主侧管加患者血清（血浆）2滴，加供着5%红细胞生理盐水悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。6.4以3400r/min离心15秒，然后把上清液倒掉，不要

25、沥干，让试管底残留0.1ml液体。6.5轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重做;如有凝集，则进行下一步。6.6加入悬浮液2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在 30-1min内凝集散开，表示凝聚胺引起的非特异性聚集，配血结果相合;如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。6.7结果判断 如果主侧管和次侧管内红细胞凝集散开，则为凝集胺引起的非特异性，表示配血结果相合，可以输用。 如果主侧管和次侧管或单独一侧管内红细胞凝集不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应，表示配血结果不相合，禁忌输用。7 注意事项7.1

26、若受血者用血量大，需要10个以上献血员时，献血员间也要进行交叉配血。7.2溶血标本不能用于交叉配血，因为配血试管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，是配血结果的严重情况。7.3血清中存在冷集素时，可影响配血结果的判断。此时可在最后加悬浮液时，将试管立即放入37水浴中，轻轻转动试管，并在30秒内观察结果。7.4当悬浮液加入后，应尽快观察结果，以免反应减弱或消失。7.5凝聚胺是一种抗肝素试剂，若患者血液标本中含有肝素，需多加几滴凝聚胺溶液以中和肝素。8.参考文献中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）.南京：东南大学出版社，1997，交叉配血（微柱凝胶法）1.

27、目的： 在临床用血前将患者血清和血细胞分别与献血员血细胞和血清进行交叉配血试验，以排除各种因素引起的输血反应（如凝集或溶血），保证用血安全。2.适用范围：2.1 所有申请输用全血及红细胞悬液的标本。2.2 申请输用手工血小板的标本。3.职责：输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。4.原理交叉配血就是将患者血清和血细胞分别与献血员血细胞和血清进行主次测交叉配试验，以排除各种因素引起的输血反应（如凝集或溶血），保证用血安全。微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目

28、的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。5.标本5.1 标本种类：新抽取的抗凝血5.2标本要求：5.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝5.2.2 采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀）5.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟5.3 标本采集要求 采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。 血标本容器要清洁干燥并事先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注入。 血标本标签填写必须与申

29、请单上的病人姓名、科别、床号、编号完全一致。 采血者要在申请单和标本标签上签名，写清采血时间，及时送检。 采血时要防止溶血及多量组织液混入 （多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时）在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。 非急诊病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写在输血申请单上，以便核对。急诊抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求注明急诊字样由专人核对、贴标签、采取血标本送检。5.4 标本储存 待测标本在2-8下的保存时间为72小时，已检测标本2-8冰箱保存7天。5.5 标本运输 室温运输5.6 标本拒收标准严重溶血、受污染，或者含有凝块的样品。标本床

30、号姓名等与检验单不符。标本上未注明采血者姓名6试剂6.1 试剂名称：DiaMed低离子/抗人球蛋白卡 6.2 试剂生产厂家：DiaMed（瑞士达亚美）6.3 试剂说明：每张DiaMed凝胶卡由6个微孔管组成7.仪器 7.1离心机：ID-Centrifuge 12S离心机 7.2 孵育器：ID-Incubator 37SI台式保温箱7.3 生产厂家：DiaMed（瑞士达亚美）8. 操作步骤8.1 预备取DiaMed低离子/抗人球蛋白卡，将有条形码的一边面向实验者；并在此面标记病人标本及献血员的编号。（约定：第1管为主侧，第2管为次侧，以此类推） 8.2加样：先加红细胞.1受血者红细胞：用40uL

31、加样枪取40uL受血者积压红细胞（RBC）加入备好1mL生理盐水的试管中，混匀；制成4%的红细胞悬液；取下吸头，换上10uL加样枪，取10uL此4%的红细胞悬液加入次侧管中。.2献血者红细胞：用40uL加样枪取40uL献血者积压红细胞（RBC）加入备好1mL生理盐水的试管中，混匀；制成4%的红细胞悬液；取下吸头，换上10uL加样枪，取10uL此4%的红细胞悬液加入主侧管中。.再加血清：.1用40uL加样枪取40uL受血者血清加入主侧管；.2用40uL加样枪取40uL献血员血清加入次侧管8.3孵育10分钟；8.4离心5分钟8.5判读结果，记录。9. 结果判断模式如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红

32、细胞未发生凝集，即凝集实验阴性，供受者血液相合；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性，供受者血液不相合。10. 操作性能10.1 凝胶微柱法为国际安全输血检查的推荐方法；10.2 测试结果安全可靠：对不完全抗体不会漏检，在交叉配血过程中不会出现假阴性结果，可预防因IgG类抗体引起的输血反应。结果判断客观性强、准确性高10.3 阴性、阳性、弱阳性的结果判断都有明确的界定，不依操作者与实验室的不同而变化。大多数传统测试法仍然依赖于对液体环境下凝集反应的解释，由于缺乏客观性的反应终点，反应结果的判读准确性因人而易。即使自动化判读机也很难将微弱的血细胞凝集与阴性反应区别开

33、来。 10.4 灵敏度高、特异性高、重复度好；10.5 客观性好，避免主观判读结果的影响；10.6 检测结果可较长时间保存 10.7 加样时先加红细胞后加血清。目的在于避免血清里的抗体提前被抗人球试剂中和，从而造成假阴性结果。11 注意事项11.1 变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的阴或阳性结果；11.2 因为储运不当的原因，有时会发现微管的顶部存在小水珠或气泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；11.3 如果发现DiaMed卡封口损坏，或者管内胶量不足或干裂，请不要使用；11.4使 用非达亚美2号稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果，所

34、用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度应相符。11.5 纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样充分离心。11.6 严格按照标准操作程序可以检出弱抗原抗体反应，弱凝集。11.7 加样时先加红细胞后加血清。目的在于避免血清里的抗体提前被抗人球试剂中和，从而造成假阴性结果。12 参考文献12.1全国临床检验操作规程（第三版）12.2 黄德明 现代医学检验新技术与操作规程全书12.3 DiaMed 血型配血微量定型系统（DiaMed-ID Micro Typing System）操作技术手册抗体筛查试验（微柱凝胶法）1.目的： 发现有临床意义的不规则抗体,避免因ABO以外的血型不合引起的输血反应,以保证患者

35、用血安全2.适用范围：2.1 输血前检查2.2 产前检查2.3 新生儿溶血症（HDN）3.职责：输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。4.原理 不完全抗体即ABO系统以外其它系统的抗体,也称为免疫抗体.多为IgG,单倍体抗体，长度约24nm ，多经妊娠或输血后免疫产生。在盐水介质中可以与相应红细胞反应，但不能发生凝集，必须通过特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏红细胞发生凝集。 抗体筛查就是利用3瓶抗体筛选细胞与待检（患者）血清反应，如果待检（患者）血清中存在抗体，则应该可以和这3瓶抗体筛选细胞中至少1瓶显示反应。 微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（

36、葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。5标本5.1标本种类：新抽取的抗凝血5.2 标本要求：5.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝5.2.2 采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀）5.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟5.3标本采集要求采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。血标本容器要清洁

37、干燥并事先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注入。血标本标签填写必须与申请单上的病人姓名、科别、床号、编号完全一致。采血者要在申请单和标本标签上签名，写清采血时间，及时送检。采血时要防止溶血及多量组织液混入 （多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时）在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。非急诊病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写在输血申请单上，以便核对。急诊抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求注明急诊字样由专人核对、贴标签、采取血标本送检。标本储存 待测标本在2-8下的保存时间为48小时5.4标本运输 室温保存5.5 标本拒收标准严重溶血

38、、受污染，或者含有凝块的样品。标本床号姓名等与检验单不符。标本上未注明采血者姓名6. 试剂6.1 试剂名称：DiaMed凝胶卡、标准抗体筛查细胞（0.8%）、达亚美2号稀释液（Dil2）6.2 试剂生产厂家：DiaMed（瑞士达亚美）6.3 试剂说明：每张DiaMed凝胶卡由6个微孔管(两人份)组成7.仪器 DiaMed-ID Micro Typing System7.1 离心机：ID-Centrifuge 12 S 7.2 孵育器：ID-Incubator 37 S7.3 生产厂家：DiaMed（瑞士达亚美）8. 操作步骤8.1 、标准抗体筛查细胞（0.8%），2号稀释液室温平衡。准备样本，

39、标记达亚美卡。8.2 三管中分别加入抗体筛查、细胞50ul8.3 三管中均加入25ul待检样本血浆或血清8.4 37孵育15分钟8.5 离心10分钟，判断结果，记录。9. 结果判断模式1+至4+为抗体筛查阳性结果（抗人球法），表示样本含ABO系统以外抗体，需要进一步做抗体鉴定（-）为阴性结果。10. 临床意义：10.1 在交叉配血试验前或输血前，提前进行抗体筛选和鉴定检测，可发现具有临床意义的不规则抗体，提醒临床医生需提前备血，以防紧急用血时找不到相容的献血员； 10.2 抗筛可以缩短交叉配血时间，快速获得相容的供血10.3 通过抗体筛选/鉴定试验，可以提高不相容性检出率（0.01%）。也就是

40、说在1万例交叉配血试验中，如果没有抗体筛选/鉴定检测，可能会有一例漏检。而如果常规作抗体筛选/鉴定和交叉配血，则可避免漏检，达到100%的准确性。 11. 操作性能11.1 凝胶微柱法为国际安全输血检查的推荐方法；11.2 结果判断客观性强、准确性高,阴性、阳性、弱阳性的结果判断都有明确的界定，不依操作者与实验室的不同而变化。大多数传统测试法仍然依赖于对液体环境下凝集反应的解释，由于缺乏客观性的反应终点，反应结果的判读准确性因人而易。即使自动化判读机也很难将微弱的血细胞凝集与阴性反应区别开来。 11.3 灵敏度高、特异性高、重复度好；11.4 客观性好，避免主观判读结果的影响；11.5 检测结

41、果可较长时间保存 11.6 加样时先加红细胞后加血清。目的在于避免血清里的抗体提前被抗人球试剂中和，从而造成假阴性结果。12. 注意事项12.1 变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的阴或阳性结果；12.2 因为储运不当的原因，有时会发现微管的顶部存在小水珠或气泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；12.3 如果发现DiaMed卡封口损坏，或者管内胶量不足或干裂，请不要使用；12.4使用非达亚美2号稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果，所用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度应相符。12.5 纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样充分离心。12.6

42、 严格按照标准操作程序可以检出弱抗原抗体反应，弱凝集。12.7 加样时先加红细胞后加血清。目的在于避免血清里的抗体提前被抗人球试剂中和，从而造成假阴性结果。13. 参考文献13.1全国临床检验操作规程（第三版）13.2 黄德明 现代医学检验新技术与操作规程全书13.3 DiaMed 血型配血微量定型系统（DiaMed-ID Micro Typing System）操作技术手册抗血清效价测定1.目的 抗体效价测定是一种半定量检测抗体浓度的方法。把效价视为抗体的含量，在临床输血检验中用于鉴定标准血清效价的测定，以检测抗血清试剂的质量。2.检测试剂：2.1试剂试剂名称：ABO血型定型试剂（人血清）试

43、剂生产厂家：中国医学科学院输血研究所、四川协和生物技术有限责任公司试剂组成试剂1.抗-A血清，效价256，2-8避光保存，有效期为一年，在效期内使用。试剂2.抗-B血清，效价128，2-8避光保存，有效期为一年，在效期内使用.2.2试剂试剂名称：人ABO血型反定型红细胞试剂试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司试剂组成：A1、B及O型试剂红细胞盐水悬液。3.原理 将被检抗血清用生理盐水作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝聚强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现肉眼明显可见凝聚的最高血清稀释倍数来表示抗体的效价。4.操作步骤4.1取10支小试管，用加样器每管中加生理盐水0.2ml，在

44、第一管中加入0.2ml被检血清抗-A或抗-B血清，混匀后吸取0.2ml加入第二管，以此类推，至第10管，最后弃去0.2ml。1-10管的稀释度分别为1：1，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32， 1：64，1：128，1：256，1：512。同样操作，再配制以上浓度10支小试管，已作对照操作。4.2将标准红细胞A或B及O细胞用生理盐水稀释为2%浓度。4.3于每管中加入2%A或2%B型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。4.4对照试验：于另外10支试管中每管加入2%O红细胞悬液0.1ml。4.5室温孵育15分钟。4.6以3000r/min离心1分钟，以出现（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的

45、倒数为该抗血清的效价。5结果判断5.1一般盐水凝集试验可立即观察，或置室温1小时观察结果。5.2若出现低稀释凝集强度比高稀释凝集强度要强，说明有前带现象发生。5.3对1份血清重复测定，结果可能不一样，如果只有一个稀释度的差别，是正常误差范围。5.5抗-A血清效价应该>128,抗-B血清效价应>64。6注意事项6.1稀释操作时要准确，避免稀释不匀出现“跳管”现象。6.2稀释液的容量越小，可能产生的误差越大。如果可能，可以增大稀释稀释容量。7 参考文献7.1陕西省医疗机构临床输血技术与质量管理手册7.2全国临床检验操作规程室内质量控制1目的 制度本制度，为了选择适当的实验方法和步骤，连

46、续评价本实验室检测工作的可靠性程度，监测和控制本实验室检测工作的精密度，提高常规工作中批内、批间样本检测的一致性，以确定测定结果是否可靠，以保证输血的安全可靠性。2 范围 适用于本院输血科工作人员室内质量控制。3 职责 输血科工作人员需按本制度常规进行室内质控操作。4具体程序4.1试剂质控BO血型试剂质控.1检测项目：抗A抗B血清试剂要进行抗体效价、特异性、亲和力的测定，ABO红细胞悬液要进行特异性检测。以及外观，有效期的检查。.2检测频次：每新一批次，同批次新开瓶，每日开始试验时采用相互验证的方法检测ABO细胞和抗A、B血清的凝集强度，特异性。.3操作：详见“抗血清效价测定SOP”。.4结果

47、分析：特异性：抗A只能和A细胞发生凝集，抗B只能凝集B细胞，凝集强度4+;O细胞无凝集。效价：抗A血清效价256,抗B血清效价>128.亲和力：凝集开始时间<15s,3min凝集块>1mm2,外观合格，并在有效期内才合格，否则失控。抗D血清质控.1检测项目：效价，阴性质控，阳性质控，有效期，外观.2质控品：来源：本实验室检测出的O型Rh阳性红细胞和O型Rh阴性红细胞：制备：洗涤两种红细胞并制备成40%的红细胞悬液；保存：2-8储存。.3检测频次：每新一批次，同批次新开瓶时检测效价；每日开始试验时按常规操作检测阴阳质控。.4结果分析：抗D血清效价64，阳性质控出现红细胞凝集4+

48、，阴性质控红细胞不出现凝集，在有效期内，外观合格，否则视为失控。凝聚胺试剂质控.1检测项目：有效期，外观，IgG类抗体阴性、阳性质控，IgM类抗体质控。.2质控品：IgG类抗体阳性质控品：标化后的IgG抗D与O型RhD阳性红细胞；IgG类抗体阴性质控品：AB型血清（经确认无不规则抗体）与O型RhD阳性红细胞。IgM类抗体质控品:3个ABO血型互不相同的EDTA抗凝血全血标本，其中一个作为受者，另外2个作为供者。.3检测频次：每新一批次，同批次新开瓶，每日开始试验时。.4：IgG类抗体阳性质控：标化后的IgG抗D与O型RhD阳性红细胞进行合血；IgG类抗体阴性质控：AB型血清（经确认无不规则抗体

49、）与O型RhD阳性红细胞进行合血。IgM类抗体质控:3个ABO血型互不相同的EDTA抗凝血全血标本，其中一个作为受者，另外2个作为供者，进行交叉配血试验。详细操作见凝聚胺法交叉配血SOP。.5结果分析：IgG类抗体阳性质控出现相应的凝集强度，IgG类抗体阴性质控不出现凝集， IgM类抗体质控反应结果与预期一致。在有效期内，外观合格。符合以上视为在空，否则为失控。4.2过程质控BO、RhD血型鉴定质控.1质控品来源：本实验室内检测出的A型Rh阴性EDTA抗凝血全血标本及B型Rh阳性EDTA抗凝血全血标本。（质控品采用微柱凝胶法和玻片法两种方法进行定标。阳性结果均为4+）。.2操作：每日开始试验前

50、，按ABO、RH血型鉴定SOP常规操作。.3结果分析：每次检测出血型结果必须是一致并与质控品原来血型一致，凝集强度正鉴定无误差，否则为失控。交叉配血试验质控（微柱凝胶法）.1质控品来源：IgM组：成都市血液中心的三个献血员的红细胞悬液合血辫子，其中三个标本的ABO血型互不相同并其中一个作为受者另外两个作为供者。IgG组阳性质控品：卫生部室间质评活动中选择1个含有不规则抗体（IgG）的质控标本作为受者，一个含有与该受者不规则抗体反应的抗原并且与该手指ABO同型的质控标本作为供者；IgG组阴性质控品：卫生部室间质评活动中选择1个含有不规则抗体（IgG）的质控标本作为受者，一个不含有与该受者不规则抗

51、体反应的抗原并且与该手者ABO同型的质控标本作为供者。.2操作：每次开始试验前，按微柱凝胶法交叉配血SOP常规操作。.3结果分析：IgM类抗体质控反应结果与预期一致，IgG组阳性质控主侧凝集，次侧不凝。IgG组阴性质控品：主侧次侧均不出现凝集。否则为失控。不规则抗体筛查（微柱凝胶法）.1质控品:卫生部室间质评活动中选择1个含有已知类型不规则抗体的血清标本及一个不含有不规则抗体的血清标本。.2按不规则抗体筛查SOP常规操作.3结果分析：阳性质控出现相应的强度的凝集，阴性质控不出现凝集，否则为失控。4.3质控结果失控后的处理重复检测，排除人为误差更换质控品，以查明质控品是否过期或变质；更换质控品以

52、后仍不在控，可以进行仪器维护后再测失控项目，可排除仪器问题引起的失控。经上述处理以后仍然失控，应停止相关失控检测项目（可使用替代检测方法），立即与试剂或仪器厂家沟通，寻求技术上的支持。5相关文件 临床输血质量管理输血相容性检测室内质量控制管理6记录 室内质控记录表血型鉴定（微柱凝胶法DiMed）1.目的：为了进一步提高ABO和RH血型鉴定的检测水平，以最大程度保障临床输血的安全性。2.适用范围：适用于目前输血科所有血型检测标本。3.职责：输血科主任负责对该标准化操作规程监督执行。4 原理ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以及血清中相应的抗体来决定的，将人分

53、为四种血型：A型、B型、AB型和O型。红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。Rh 血型系统有5 种抗血清，即抗C 、抗C 、抗D 、抗E 、抗e，可以检出18 种不同的型别，但由于临床实验室很难得到这5 种抗血清，况且在Rh抗原中，抗原性最强，出现频率最高，临床上影响最大的是D 抗原，所以临床上一般只作D 抗原的鉴定，受检者红细胞能与抗D 血清凝集者为Rh 阳性，不凝集者为阴性。微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓

54、度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。5标本5.1标本种类：新抽取的抗凝血5.2标本要求：5.2.1 抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸橼酸钠（浓度32g/L）抗凝5.2.2 采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意与抗凝剂混匀）5.2.3 离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟5.3 标本采集要求 采血时，一定要认真核对病室、床号和病人姓名，无误后再抽血。 血标本容器要清洁干燥并事

55、先贴好标签，加血标本前要认真核对、无误后再将血液注入。 血标本标签填写必须与申请单上的病人姓名、科别、床号、编号完全一致。 采血者要在申请单和标本标签上签名，写清采血时间，及时送检。 采血时要防止溶血及多量组织液混入 （多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时）在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。5.4. 标本储存 待测标本在2-8下的保存时间为72小时，已检测标本2-8冰箱保存7天。5.5. 标本运输 室温保存5.6. 标本拒收标准严重溶血、受污染，或者含有凝块的样品。标本床号姓名等与检验单不符。标本上未注明采血者姓名6 试剂6.1 试剂名称：DiaMed凝胶卡、A1.B标准反定细胞（0.8%）、达亚美2号稀释液（Dil2）6.2