几种中草药中槲皮素含量的HPLC法测定

1、几种中草药中槲皮素含量的HPLC法测定05级化学1班 马旭春 指导教师：杨玲娟摘要：建立了高效液相色谱法测定夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中槲皮素含量的方法。该方法采用Eclipse XDB C18色谱柱(250mm×4.6mm i.d.,5um)，流动相为甲醇-0.2%磷酸(体积比65：35)，检测波长为370nm。结果表明槲皮素在13.4120.6ug/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好，线性方程为Y=22275X+13.387 (r=0.9990)。平均加标回收率为96.0%，RSD为1.5%(n=5)。本法快速、简便、准确，可用于测定夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中槲皮素的含量，为综

2、合利用与开发夏枯草、菊花、枇杷叶、党参提供了重要的实验依据。关键词：高效液相色谱法 槲皮素 夏枯草 菊花 枇杷叶 党参Determination of Quercetin in Kinds of Chinese Medicine by HPLCMa XuchunAbstract : The article established a method of determining the content of quercetin in Prunella vulgaris、Chrysanthemum、Loquat leaves and Dangshen by HPLC. The analysis w

3、as performed on an HPLC Eclipse XDB C18 colunn (250mm×4.6mm i.d.,5um) at the detection wave length of 370nm. The mobile phase was consisted of 0.2% phosphoric acid-methanol (3565) with a flow rate of 1.2000mL/min. The calibration curve was linear in the range of 13.4120.60ug/mL of quercetin (r=

4、0.9990). The average recovery was 96.0 % with RSD=1.5% (n=5). The method is simple, rapid and accurate for the determination of quercetin in Prunella vulgaris、Chrysanthemum、Loquat leaves and Dangshen, which provides an important experimental evidence for comprehensive utilization and development of

5、Prunella vulgaris、Chrysanthemum、Loquat leaves and Dangshen .Key words: HPLC Quercetin Prunella vulgaris Chrysanthemum Loquat leaves Dangshen中草药是现代医学的“绿色药物”，对人体毒副作用小，在动物体内无药物残留、无公害，而且廉价、易得，同时，其经济效益也是非常可观的，尤其是它的国际市场。目前，传统制药已被许多国家认为是一个朝阳产业，而国际上的传统药物主要指中草药，其年销售额已超过150亿美元，并仍在以每年10%的速度增长1。夏枯草、菊花、枇杷叶、党参均为常

6、见中草药，夏枯草为唇形科夏枯草属植物夏枯草的干燥果穗，具有降压、降糖、抗炎、免疫抑制、抗菌、抗艾滋病病毒、抗突变、抗癌等作用。菊花为菊科植物菊花的干燥头状花序，是传统中药，具有抑菌、抗肿瘤等作用。枇杷叶为蔷薇科植物枇杷的干燥叶，是一味常用中药，具有抗炎、镇咳、降血糖、抗病毒等作用。党参系桔梗科植物，其味甘、性平，入脾、肺二经，具有补中益气，生津和胃之功效。研究表明，夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中均含有槲皮素2-5，但未定量。槲皮素是一种天然黄酮类化合物，其化学名为3, 3, 4, 5, 7-五羟基黄酮，多以苷的形式存在于植物的花、叶、果实中，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗血栓、抗病毒、保护心血管等

7、作用6。随着中药现代化的发展，含槲皮素的中草药在中医方面的应用也越来越广泛。已有文献报道测定金银花、银杏叶、鱼腥草、地钱等中草药中的槲皮素含量7，而夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中槲皮素含量的测定均未见报道。笔者通过试验，利用高效液相色谱法测定了夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中槲皮素的含量，为夏枯草、菊花、枇杷叶、党参的质量监控及综合开发利用提供了重要的理论参考和实验依据。1. 实验部分1.1 药品与仪器药品：槲皮素对照品(中国药品生物制品鉴定所)； 夏枯草（市售）；菊花（市售）；枇杷叶（市售）；党参（市售）；磷酸(0.2%)为分析纯；甲醇为色谱纯；水为重蒸水。 仪器：Aglient1100LC（安捷

8、伦公司）；VWD紫外检测器（安捷伦公司）；数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1.2色谱条件色谱柱： Eclipse XDB C18色谱柱(250mm×4.6mm i.d.，5um)；流动相：甲醇-0.2%磷酸(体积比6535)；流速：1.200mL/min；柱温：45；检测波长：370nm；进样量：10uL。1.3对照品溶液的制备准确称取经110干燥至恒重的槲皮素对照品33.5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，准确量取3.00mL该溶液置50mL容量瓶中，定容至刻度配成40.2ug/mL的对照品溶液。以“1.2”色谱条件进样，槲皮素对照品色谱图见图1.3.1

9、。图1.3.1 槲皮素对照品色谱图Fig.1.3.1 Chromatogram of standard1.4样品溶液的制备准确称取经70干燥2小时后研磨并过60目筛的夏枯草样品1.5193g，菊花样品1.5248g，枇杷叶样品1.5350g，党参样品1.5178g分别置50mL容量瓶中，准确加入甲醇20.0mL，盖上瓶塞，温度为35、功率为500W和频率为40KHz条件下超声萃取40min，取出冷却至室温；将各个样品溶液定量转移至25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。以“1.2”色谱条件进样，样品色谱图如下：图1.4.1 夏枯草样品色谱图Fig

10、.1.4.1 Chromatogram of samples图1.4.2 菊花样品色谱图Fig.1.4.2 Chromatogram of samples图1.4.3 枇杷叶样品色谱图Fig.1.4.3 Chromatogram of samples图1.4.4 党参样品色谱图Fig.1.4.4 Chromatogram of samples2结果与分析2.1线性关系的考察准确称取经110干燥至恒重的槲皮素对照品33.5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度 ，分别准确量取该溶液1.00、3.00、5.00、7.00、9.00mL置50mL容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀，制成系

11、列浓度的溶液。分别精密吸取各溶液10uL，以“1.2”色谱条件进样，记录色谱图。以峰面积(Y)对浓度(X)绘制标准曲线，得线性方程为Y=22275X+13.387（r=0.9990），结果表明槲皮素在13.4120.6ug/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好。2.2精密度试验精密吸取槲皮素对照品溶液10uL，以“1.2”色谱条件重复进样6次测定峰面积，其RSD为1.4% (n=6)，结果表明仪器精密度良好。2.3重现性试验准确称取1.5193g夏枯草样品5份，按“1.4”制备样品溶液，以“1.2”色谱条件进样测定峰面积，其RSD为0.8%(n=5)，结果表明该方法重现性良好。2.4回收率试验采

12、用加标回收法，在已知含量的夏枯草样品溶液中加入适量的槲皮素，结果见表2.4.1。平均回收率为96.0%，其RSD为1.5%(n=5)，结果表明加标回收率良好。表2.4.1 回收率试验结果(n=5)Originalmg/mLAddedmg/mLFoundmg/mLRecovery（）Average Recovery(%)RSD(%)0.01340.01750.030496.396.01.50.03500.047794.80.07000.083097.02.5 样品测定准确称取夏枯草样品1.5193g，菊花样品1.5248g，枇杷叶样品1.5350g，党参样品1.5178g各1份，按“1.4”制备

13、样品溶液，以“1.2”色谱条件进样测定峰面积，计算得槲皮素含量见表2.5.1。表2.5.1 几种中草药中槲皮素含量的HPLC法测定结果样品名称夏枯草菊花枇杷叶党参含量(ug/g)220.95162.8957.9114.303讨论及结果3.1 波长的选择将槲皮素对照品溶液在200500nm范围内进行波长扫描，光谱显示在254nm和370nm处均有最大吸收峰，经考察，在254nm处样品杂质吸收值亦较大，干扰较多，不宜进行测定；而在370nm波长处杂质干扰较少，故选择370nm为测定波长。3.2 流动相的选择实验考察了不同比例的甲醇-磷酸流动相，磷酸比例过高，槲皮素保留时间过长；甲醇比例过高，峰形不

14、对称，出现前伸现象，考虑到峰型以及磷酸对色谱柱的影响，选择0.2%的磷酸，并且甲醇与磷酸的最佳比例为65:35。同时，将流速确定为1.200mL/min。3.3 柱温的选择柱温对样品保留时间影响很大，同时对于分离效果也有影响。柱温过低，保留时间过长；柱温过高，对色谱柱影响很大，出峰过于密集，故柱温选择45。3.4 结果样品测定结果表明，相同质量的夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中夏枯草、菊花中槲皮素的含量较高，因此，我们应当更加重视夏枯草、菊花的开发与利用。本文采用高效液相色谱法测定了夏枯草、菊花、枇杷叶、党参中槲皮素的含量，该方法的仪器精密度、方法重现性均较好，操作快速、简便、准确，为综合利用与开发夏枯草、菊花、枇杷叶、党参提供了重要的理论参考和实验依据。参考文献：1 刘瑞娣，郝国栋.中草药在现代医学保健中的应用J. 当代医学，2008，14（23）：29-30.2 顾晓洁，钱士辉，李友宾，等. 夏枯草的化学成分及药理作用研究进展J.中国野生植物资源，2007，26（2）：5-7.3 张晓媛，段立华，等.菊花化学成分及药理作用的研究J.时珍国医国药，2008，19（7）：1702-1704.4 刘