水产微生物与疾病学实验(20155)

1、水产微生物与疾病学实验水产微生物与疾病学实验主讲教师：林旋主讲教师：林旋 注意自身防护注意自身防护 严防病原微生物的散布严防病原微生物的散布 作好标记，记录作好标记，记录 防火防火 节约节约 清洁清洁 秩序秩序实验须知实验一实验一细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色实验二实验二放线菌、霉菌形态观察放线菌、霉菌形态观察实验三实验三培养基的制备培养基的制备实验四实验四微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化和接种 实验五实验五平板菌落计数法平板菌落计数法 实验六实验六细菌的生化反应试验细菌的生化反应试验 实验七实验七水、环境中微生物的测定水、环境中微生物的测定 实验八实验八T淋巴细胞的检查淋巴细胞的

2、检查 实验九实验九细菌对药物的敏感性实验细菌对药物的敏感性实验 实验十实验十鱼类病理学切片的观察鱼类病理学切片的观察 实验十一实验十一 鱼类原虫病病原的观察鱼类原虫病病原的观察 实验十二实验十二 鱼类蠕虫病病原的观察鱼类蠕虫病病原的观察 实验十三实验十三实验十四实验十四鱼类疾病标本的观察鱼类疾病标本的观察鱼类多抗的制备鱼类多抗的制备目 录实验一实验一 细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色一、实验目的和要求：一、实验目的和要求： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法。学习并初步掌握革兰氏染色法。 2、了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定 中的重要性中的重要性。二、实

3、验内容和原理：二、实验内容和原理： 由于细菌细胞壁的结构和组成不同，用革兰氏由于细菌细胞壁的结构和组成不同，用革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌（染色法可将细菌分为革兰氏阳性菌（G G+ +）和革兰氏）和革兰氏阴性菌（阴性菌（G G）两类。）两类。1 1肽聚糖肽聚糖（peptidoglycan） 是一类复杂的多聚体，是细菌细胞壁中的主要组是一类复杂的多聚体，是细菌细胞壁中的主要组分，为原核细胞所特有，又称为黏肽分，为原核细胞所特有，又称为黏肽（mucopeptide）、糖肽（）、糖肽（glycopeptide）或胞壁）或胞壁质（质（murein）。 革兰氏阳性菌的肽聚糖由聚糖骨架、四肽侧链和

4、革兰氏阳性菌的肽聚糖由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分组成。五肽交联桥三部分组成。 革兰氏阴性菌的肽聚糖仅由聚糖骨架和四肽侧链革兰氏阴性菌的肽聚糖仅由聚糖骨架和四肽侧链两部分组成。两部分组成。 2 2革兰氏阳性菌细胞壁的特殊组分革兰氏阳性菌细胞壁的特殊组分 细胞壁较厚（细胞壁较厚（202080nm80nm），除含有），除含有15155050层肽聚糖结构外，层肽聚糖结构外，大多数还含有大量的大多数还含有大量的磷壁酸磷壁酸，少数是磷壁醛酸，约占细胞，少数是磷壁醛酸，约占细胞壁干重的壁干重的5050。 磷壁酸是结合在革兰氏阳性细菌细胞壁上磷壁酸是结合在革兰氏阳性细菌细胞壁上的一种酸性多糖，主要成

5、分为甘油磷酸或的一种酸性多糖，主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸。核糖醇磷酸。 磷壁酸可分为两类，一类是与肽聚糖分子磷壁酸可分为两类，一类是与肽聚糖分子进行共价结合的，称壁磷壁酸；另一类是进行共价结合的，称壁磷壁酸；另一类是跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联的，称为跨越肽聚糖层并与细胞膜相交联的，称为膜磷壁酸或脂磷壁酸。膜磷壁酸或脂磷壁酸。3 3革兰氏阴性菌细胞壁特殊组分革兰氏阴性菌细胞壁特殊组分 细胞壁较薄（细胞壁较薄（101015nm15nm），但结构较复杂。除含有），但结构较复杂。除含有1 12 2层层的肽聚糖结构外，尚有其特殊组分的肽聚糖结构外，尚有其特殊组分外膜（外膜（outer outer

6、membrancemembrance）和和周质间隙周质间隙。外膜约占细胞壁干重的。外膜约占细胞壁干重的8080。 脂多糖（脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）。）。是位是位于革兰氏阴性细菌细胞壁最外层的一层较厚于革兰氏阴性细菌细胞壁最外层的一层较厚（810nm）的类脂多糖类物质）的类脂多糖类物质。 类脂类脂A A、核心多糖和特异多糖（、核心多糖和特异多糖（O O特异侧链、特异侧链、O O抗原）三部分组成，是革兰氏阴性菌的抗原）三部分组成，是革兰氏阴性菌的内毒素。内毒素。v革兰氏染色原理：革兰氏染色原理：第一步：第一步：初染，初染，结晶紫使菌体着上紫色结晶紫使菌体着上紫色第二步

7、：第二步：媒染，媒染，碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：第三步：乙醇脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的乙醇脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。反应。G G+ +菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫- -碘复合物被阻碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。G G- -菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使

8、其结构收菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高缩，其脂含量高, ,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫- -碘复碘复合物溶出细胞壁，细胞退成无色。合物溶出细胞壁，细胞退成无色。第四步：第四步：番红或沙黄复染番红或沙黄复染G G+菌：菌：仍保留紫色（实为紫加红色）。仍保留紫色（实为紫加红色）。G G- -菌：菌：细胞染上复染液的颜色，因此呈红色。细胞染上复染液的颜色，因此呈红色。 三、器材及试剂三、器材及试剂菌种菌种:大肠杆菌及金黄色葡萄球菌大肠杆菌及金黄色葡萄球菌24h24h平板培养物。平板培养物。染色剂：革兰氏染色液（草酸氨结晶紫、碘液、染色剂

9、：革兰氏染色液（草酸氨结晶紫、碘液、95%95%乙醇、蕃红）、蒸馏水、香柏油、二甲苯。乙醇、蕃红）、蒸馏水、香柏油、二甲苯。载玻片、盖玻片、接种环、吸水纸、酒精灯等。载玻片、盖玻片、接种环、吸水纸、酒精灯等。1涂片：取一小滴蒸馏水至载玻片中央，用涂片：取一小滴蒸馏水至载玻片中央，用接种环挑取小量菌落于水滴中，涂匀。接种环挑取小量菌落于水滴中，涂匀。2干燥：室温自然干燥干燥：室温自然干燥3固定：火焰固定，注意固定的温度与方法。固定：火焰固定，注意固定的温度与方法。（菌膜朝上，通过火焰（菌膜朝上，通过火焰23次，以不烫手为宜）次，以不烫手为宜）四、实验步骤四、实验步骤4染色：染色：（1）结晶紫初染

10、）结晶紫初染1-2min，水洗，吸干；，水洗，吸干；（2）碘液媒染）碘液媒染1min，水洗，吸干；，水洗，吸干；（3）95%乙醇脱色乙醇脱色25S，立即水洗，吸干；，立即水洗，吸干；（4）蕃红复染）蕃红复染2min，水洗。，水洗。5镜检：吸水纸吸干水分，干燥后，用油镜观察。镜检：吸水纸吸干水分，干燥后，用油镜观察。 G+为为蓝紫色蓝紫色，G-菌为菌为红色红色蕃红蕃红蕃红蕃红蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水结晶紫结晶紫金葡金葡菌菌金葡金葡菌菌金葡金葡菌菌乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌大肠杆菌大肠杆菌五、实验结果与分析五、实验结果与分析 画出大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的形态

11、，画出大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的形态，并标明革兰氏染色结果。并标明革兰氏染色结果。 对实验过程中出现的问题进行分析，写出对实验过程中出现的问题进行分析，写出脱色时间过长及太短会出现什么结果。脱色时间过长及太短会出现什么结果。实验二实验二 放线菌、霉菌形态观察放线菌、霉菌形态观察一、实验目的和要求：一、实验目的和要求：1 1、观察放线菌的形态特征。、观察放线菌的形态特征。2 2、观察霉菌的形态特征，包括菌丝和孢子。、观察霉菌的形态特征，包括菌丝和孢子。二、实验内容和原理二、实验内容和原理：1 1、内容：、内容：观察微生物标本（观察微生物标本（放线菌、匍枝根霉、放线菌、匍枝根霉、青霉、曲霉的菌丝和

12、孢子、无隔菌丝、有隔菌丝）。青霉、曲霉的菌丝和孢子、无隔菌丝、有隔菌丝）。2、原理：、原理： 放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝分为基内菌丝(营养菌丝营养菌丝)、气生菌丝和孢子丝三、气生菌丝和孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。生孢子。 霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。霉菌营养体的基本

13、形态单位是菌丝，包官。霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。括有隔菌丝和无隔菌丝。 无性孢子无性孢子：节孢子、分生孢子、孢囊孢子、：节孢子、分生孢子、孢囊孢子、厚垣孢子。厚垣孢子。有性孢子有性孢子：子囊孢子、卵孢子、接合孢子、：子囊孢子、卵孢子、接合孢子、担孢子。担孢子。三、实验材料：三、实验材料：标本：放线菌、匍枝根霉、青霉、曲霉的菌标本：放线菌、匍枝根霉、青霉、曲霉的菌丝和孢子、无隔菌丝、有隔菌丝。丝和孢子、无隔菌丝、有隔菌丝。 四、实验结果与分析四、实验结果与分析 观察到的各种标本绘图，并注明各部分名称。观察到的各种标本绘图，并注明各部分名称。 无隔菌丝：细胞核无隔菌丝

14、：细胞核 有隔菌丝：细胞核有隔菌丝：细胞核 根霉：孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗根霉：孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗 曲霉：分生孢子、分生孢子梗、顶囊曲霉：分生孢子、分生孢子梗、顶囊 青霉：分生孢子、分生孢子梗青霉：分生孢子、分生孢子梗实验三实验三 培养基的制备培养基的制备 一、实验目的和要求：一、实验目的和要求： 1、明确培养基的配制原理。明确培养基的配制原理。 2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。基的一般方法和步骤。 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围，了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围，并掌握其具体操作方法。并掌握其具体操作方法。

15、 二、实验内容和原理二、实验内容和原理 内容：内容： 配制营养肉汤培养基配制营养肉汤培养基 配制营养琼脂培养基配制营养琼脂培养基 玻璃器皿的包扎和灭菌玻璃器皿的包扎和灭菌 原理：原理： 1 1、培养基、培养基是是用人工方法配制而成的，专供微生物用人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖的混合营养物制品。生长繁殖的混合营养物制品。 2、培养基的制备原则：、培养基的制备原则： 有供微生物生长发育的各种营养物质及足够的有供微生物生长发育的各种营养物质及足够的水分；水分； 有合适的酸碱度；有合适的酸碱度； 绝对无菌；绝对无菌； 均质透明。均质透明。细细 菌菌牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaCl琼脂琼脂碳源碳

16、源氮源氮源磷酸盐磷酸盐维生素维生素支持物支持物无机盐无机盐能源能源培养基中各成分的主要作用培养基中各成分的主要作用 3 3、培养基的类型、培养基的类型（1 1）化学组成）化学组成 合成培养基；天然培养基；半合成培养基合成培养基；天然培养基；半合成培养基（2 2）物理状态）物理状态 固体；液体；半固体；脱水固体；液体；半固体；脱水（3 3）特定用途）特定用途 基础培养基；加富培养基；基础培养基；加富培养基； 选择培养基；鉴别培养基；厌氧培养基选择培养基；鉴别培养基；厌氧培养基常用培养基种类常用培养基种类厌氧培养基厌氧培养基基础培养基基础培养基增菌培养基增菌培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别

17、培养基4、灭菌实验原理、灭菌实验原理 高压蒸汽灭菌法是在密闭的加压容器内高压蒸汽灭菌法是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于升高，从而获得高于100100度的蒸汽温度，度的蒸汽温度，导致菌体蛋白质凝固变性导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的而达到灭菌的目的目的。 高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三：三：一湿热灭菌时菌体蛋白容易变性，二一湿热灭菌时菌体蛋白容易变性，二湿热穿透力强，三蒸气变成水时可放出大湿热穿透力强，三蒸气变

18、成水时可放出大量热增强杀菌效果量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好，因此，它是效果最好的灭菌方法。的灭菌方法。 适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在金属用具。一般培养基在121121灭菌灭菌2020分钟分钟即可。即可。n手提式高压蒸汽灭菌器示意图手提式高压蒸汽灭菌器示意图 加水加水 盖上锅盖盖上锅盖 打开放气打开放气 阀阀 加热煮沸加热煮沸 蒸气驱蒸气驱尽锅内原有的空气尽锅内原有的空气 关闭放关闭放气阀气阀 继续加热，使锅内继续加热，使锅内蒸气压逐渐上升，随之温度也蒸气压逐渐上升，随之温度也上升至上升至100100以上。以上。三、器材与

19、试剂三、器材与试剂 三角瓶、培养皿、烧杯、试管、量筒、玻棒、天三角瓶、培养皿、烧杯、试管、量筒、玻棒、天平、牛角匙、滴管、电炉、高压蒸汽灭菌锅、称平、牛角匙、滴管、电炉、高压蒸汽灭菌锅、称量纸、量纸、pH试纸、硅胶塞、记号笔、棉绳等。试纸、硅胶塞、记号笔、棉绳等。 牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂粉、琼脂粉、2mol/L NaOH、 2mol/L HCl配制牛肉膏蛋白胨培养基（基础培养基）配制牛肉膏蛋白胨培养基（基础培养基）1准确称量：准确称量：按下面配方准确称量各组分：按下面配方准确称量各组分：牛肉膏牛肉膏 3.0g；蛋白胨；蛋白胨 10.0g；NaCl 5.0g；水；水100

20、0ml；pH7.07.2。将各组份置于搪瓷杯中。将各组份置于搪瓷杯中。 2溶化：溶化：将上述搪瓷杯在电炉上加热，同时将上述搪瓷杯在电炉上加热，同时 用玻棒搅拌，使各成分溶解，如果有水分损用玻棒搅拌，使各成分溶解，如果有水分损 失，应补充至所需水量。失，应补充至所需水量。若配制固体培养基，若配制固体培养基， 应按应按1.5%-2%（W/V）加入琼脂。）加入琼脂。3调调pH：用用2mol/L NaOH调节调节pH，使用使用pH试试纸测定。纸测定。四、实验步骤四、实验步骤4分装：分装：装入三角瓶或试管中。液体分装高度以装入三角瓶或试管中。液体分装高度以试管高度的试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量

21、为管高的左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。宜。 5加塞：加塞：在三角瓶或试管的瓶口上塞上硅胶塞。在三角瓶或试管的瓶口上塞上硅胶塞。6包扎：包扎：加塞后，在硅胶塞外包一层牛皮纸（报加塞后，在硅胶塞外包一层牛皮纸（报纸），用棉绳扎好。在包装纸上标明培养基名称，纸），用棉绳扎好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。制备组别和姓名、日期等。 7灭菌：灭菌：将上述培养基以将上述培养基以121(0.105Mpa)，高，

22、高压蒸气灭菌压蒸气灭菌20min 。培养基经灭菌后，如需要作。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 8倒平板：倒平板：将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到却到4550，立刻倒平板。，立刻倒平板。 9灭菌后的培养基空白培养灭菌后的培养基空白培养 ：灭菌后的培养基灭菌后的培养基放于放于37培养箱中培养，经培养箱中培养，经24h培养无

23、菌生长，可培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。深层琼脂后，空白培养。 培培 养养 基基 制制 备备 流流 程程 头三组配头三组配800ml固体培养基，分装在四个三固体培养基，分装在四个三角瓶中。第四组配角瓶中。第四组配300ml液体。液体。 第四组配第四组配300ml液体液体 头三组头三组800ml固体固体分装分装30支试管，支试管，每支每支5ml三组分装三组分装30支试支试管，每支管，每支4ml ，剩余的分装在四剩余的分装在

24、四个三角瓶个三角瓶一、二组分装在一、二组分装在四个三角瓶四个三角瓶剩余的装入一个剩余的装入一个三角瓶三角瓶 每组各自练习包培养皿每组各自练习包培养皿 液体和固体要标明，液体和固体要标明，5支包一包支包一包五、实验结果与分析五、实验结果与分析 写出牛肉膏蛋白胨培养基的配方。写出牛肉膏蛋白胨培养基的配方。 描述高压蒸汽灭菌的操作方法及注意事描述高压蒸汽灭菌的操作方法及注意事项。项。 实验四实验四 微生物的分离、纯化与接种微生物的分离、纯化与接种 一、实验的目的和要求：一、实验的目的和要求：1 1、掌握平板划线法分离培养及纯化的基本操作技术、掌握平板划线法分离培养及纯化的基本操作技术2 2、学习掌握

25、微生物的几种接种技术、学习掌握微生物的几种接种技术3 3、建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节、建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节二、实验内容和原理二、实验内容和原理1、实验内容实验内容平板划线分离法平板划线分离法斜面接种法斜面接种法液体接种法液体接种法2、原理、原理 从混杂的细菌群体中获得只含有一种或某一株细菌的过程从混杂的细菌群体中获得只含有一种或某一株细菌的过程称为细菌的分离与纯培养。平板划线法是最常用的方法之称为细菌的分离与纯培养。平板划线法是最常用的方法之一，通过沾有样本的接种环在平板上划线，将样本一，通过沾有样本的接种环在平板上划线，将样本“稀稀释释”，培养后使之形成

26、单个菌落，从而达到分离的目的。，培养后使之形成单个菌落，从而达到分离的目的。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就

27、不可靠，影响下一步工作的进行。引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 三、器材及试剂三、器材及试剂:菌种：大肠杆菌斜面、平板培养物菌种：大肠杆菌斜面、平板培养物培养基：牛肉膏蛋白胨平板及斜面培养基：牛肉膏蛋白胨平板及斜面、营养肉汤。、营养肉汤。接种环、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱等。接种环、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱等。四、实验步骤四、实验步骤:1、平板划线分离法：、平板划线分离法：在酒精灯火焰旁无菌挑取一在酒精灯火焰旁无菌挑取一环斜面培养物，在平板上划线，划线完毕后，将环斜面培养物，在平板上划线，划线完毕后，将培养皿倒置于培养皿倒置于37恒温培养箱中恒温培养箱中培养培养1

28、824h。长出单个菌落后，挑取单菌落接种至斜面上，置长出单个菌落后，挑取单菌落接种至斜面上，置37恒温培养。若有其他杂菌混杂，就要再一次恒温培养。若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。进行分离、纯化，直到获得纯培养。1234 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。以鉴定或保存菌种。 斜面接种法采用双管移植法。斜面接种法采用双管移植法。2.2.斜面接种法斜面接种法双管移植法双管移植法 n多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验。用接种环菌接种液体培养基

29、进行生化试验。用接种环从斜面上沾取少许菌苔，将接种环在液体内从斜面上沾取少许菌苔，将接种环在液体内振摇几次即可。振摇几次即可。3.3.液体接种法液体接种法五、实验结果与分析五、实验结果与分析 分别记录并描绘分别记录并描绘平板划线、斜面和液体平板划线、斜面和液体接接种的微生物生长情况和培养特征。种的微生物生长情况和培养特征。 在液体培养基中，混浊生长，形成荚膜，在液体培养基中，混浊生长，形成荚膜，管底有粘性沉淀。管底有粘性沉淀。在固体平板上，形成凸起、光滑、湿润、在固体平板上，形成凸起、光滑、湿润、乳白色和边缘整齐的菌落，带有特殊的乳白色和边缘整齐的菌落，带有特殊的粪臭味。粪臭味。实验五实验五

30、平板菌落计数法平板菌落计数法 组别、同组学生姓名：组别、同组学生姓名：一、实验目的和要求：一、实验目的和要求： 学习平板菌落计数的基本原理和方法学习平板菌落计数的基本原理和方法二、实验内容和原理：二、实验内容和原理：内容：测定大肠杆菌液体培养物的浓度。内容：测定大肠杆菌液体培养物的浓度。原理：原理：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的细菌充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到的细菌充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上培养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落，平板上培养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落，即一个单

31、菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。根据稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。三、器材及试剂三、器材及试剂: :待检样本：大肠杆菌肉汤培养物。待检样本：大肠杆菌肉汤培养物。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。其他：其他：1ml1ml移液枪；无菌玻璃涂布棒；盛有移液枪；无菌玻璃涂布棒；盛有4.5ml4.5ml无菌水的试管；试管架；振荡器；恒温培养箱等。无菌水的试管；试管架；振荡器；恒温培养箱等。四、实验步骤四、实验步骤:1 1编号：编号：取无菌平板取无菌平板9

32、 9套，分别标明套，分别标明1010-5-5、1010-6-6、1010-7-7（参照各组稀释度）各（参照各组稀释度）各3 3套。分别取套。分别取7 7支盛有支盛有4.5ml4.5ml无菌水无菌水的试管，依次标明的试管，依次标明1010-1-1、1010-2-2、 10 10-7-7，稀释度的选择应根据样本中细菌的估计值确定。稀释度的选择应根据样本中细菌的估计值确定。第一组第一组-4-4、-5-5、-6-6；第二组第二组-5-5、-6-6、-7-7；第三组第三组-6-6、-7-7、-8-8。2 2稀释：稀释：用用1ml1ml移液枪取移液枪取0.5ml0.5ml待测样本至待测样本至1010-1-

33、1，此即为，此即为1010倍稀释，混匀，移液枪换一个枪头，从倍稀释，混匀，移液枪换一个枪头，从1010-1-1试管中吸取试管中吸取0.5ml0.5ml加入加入1010-2-2管中，即为管中，即为10102 2（100100）倍稀释）倍稀释，其余依次，其余依次类推，最终稀释度为类推，最终稀释度为1010n n倍。倍。3. 3. 平板接种培养（涂抹平板接种法）平板接种培养（涂抹平板接种法） 涂抹平板计数法是先将培养基熔化后趁热倒入无菌涂抹平板计数法是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平皿中，待凝固后编号，然后用移液枪吸取平皿中，待凝固后编号，然后用移液枪吸取0.1ml菌液，菌液，对号接种在不同稀释度编号

34、的琼脂平板上（每个稀释度对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个稀释度设三个重复）。设三个重复）。 用无菌玻璃涂布棒将菌液在平板上涂抹均匀，由低用无菌玻璃涂布棒将菌液在平板上涂抹均匀，由低浓度向高浓度涂抹（高稀释度向低稀释度），可不更换浓度向高浓度涂抹（高稀释度向低稀释度），可不更换涂布棒。涂布棒。 将涂抹好的平板平放于桌上将涂抹好的平板平放于桌上20min，使菌液渗透入培，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，养基内，然后将平板倒转，37培养培养24h，至长出菌落后，至长出菌落后即可计数。即可计数。菌落总数测定流程图菌落总数测定流程图4. 4. 菌落计数方法菌落计数方法 作平板菌落计数时，

35、可用肉眼观察，必要时用放大镜作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于数。如果不能立即计数，应将平板放置于04，但不要，但不要超过超过24h。 培养培养24h后，算出同一稀释度后，算出同一稀释度3个平板上的菌落平均数，个平板上的菌落平均数，并按下列公式计算：并按下列公式计算：每毫升样本中菌落形成单位数（每毫升样本中菌落形成单位数（cfu）=同一稀释度同一稀释

36、度3次重次重复的平均菌落数复的平均菌落数稀释倍数稀释倍数10（个（个/ml） 一般选择每个平板上长有一般选择每个平板上长有30300个菌落的稀释度计个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。算每毫升的含菌量较为合适。 五、实验结果与分析五、实验结果与分析 将实验测出的样品数据以报表方式报告结果将实验测出的样品数据以报表方式报告结果并写出计算过程。并写出计算过程。 分析实验过程中出现的问题。分析实验过程中出现的问题。 将培养后菌落计数的结果填入下表：将培养后菌落计数的结果填入下表：实验六实验六 细菌的生化反应试验细菌的生化反应试验目的意义：目的意义： 了解糖发酵试验、了解糖发酵试验、IMViC试

37、验及硫化氢试验的原试验及硫化氢试验的原理、方法及在细菌鉴定中的作用。理、方法及在细菌鉴定中的作用。基本原理：基本原理： 不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。器材及试剂器材及试剂:菌种：大肠杆菌、沙门氏菌及产气肠杆菌斜面菌种：大肠杆菌、沙门氏菌及产气肠杆菌斜面培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基 试管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水试管、蛋白胨

38、水培养基、葡萄糖蛋白胨水 培养基、柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培培养基、柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培养养 基等。基等。甲基红指示剂、甲基红指示剂、40%KOH、5% -萘酚、乙醚、吲萘酚、乙醚、吲哚试剂等哚试剂等试管架、酒精灯、接种环等试管架、酒精灯、接种环等实验步骤实验步骤:（一）糖发酵试验：（一）糖发酵试验：1、用记号笔在各试管中表明发酵培养基名称和所接、用记号笔在各试管中表明发酵培养基名称和所接 种的细菌。种的细菌。2、取葡萄糖发酵培养基管、取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、支，分别接种大肠杆菌、 沙门氏菌，第三支不接种，作为对照。另取沙门氏菌，第三支不接种，作为对照。另取3支支

39、 乳糖发酵培养基，作同样的操作。乳糖发酵培养基，作同样的操作。3、37 ，24-48h。4、观察颜色变化及有无气体产生。、观察颜色变化及有无气体产生。5、结果：将结果填入下表，、结果：将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；表示产酸或产气；“+”表示产酸不产气表示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。表示不产酸不产气。糖类发酵大肠杆菌沙门氏菌对 照葡萄糖发酵 乳糖发酵 （二）（二）IMViC试验试验:(吲哚、甲基红、伏吲哚、甲基红、伏-普、柠普、柠檬酸盐）檬酸盐）1、接种和培养：、接种和培养： 用接种针将大肠杆菌与产气肠杆菌分用接种针将大肠杆菌与产气肠杆菌分别接种于别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚

40、试验），支蛋白胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏伏-普试验），普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，支柠檬酸盐斜面培养基，置置37 培养培养2d。2、结果观察：、结果观察：（1）吲哚试验：于培养）吲哚试验：于培养2d后的蛋白胨水后的蛋白胨水培养其内加培养其内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐加入分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。红色环状物为阳性反应。（2）甲基红试验：于培养）甲基红试验：于培养

41、2d后，将后，将1支葡萄糖蛋白支葡萄糖蛋白胨水培养物内加甲基红试剂胨水培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者滴，培养基变为红色者为阳性，变黄色者为阴性。为阳性，变黄色者为阴性。（3）伏）伏-普试验：于培养普试验：于培养2d后，将后，将1支葡萄糖蛋白胨支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入水培养物内加入5-10滴滴40%KOH，然后加入等量的，然后加入等量的5% -萘酚，用力振荡，再放入萘酚，用力振荡，再放入3737温箱中保温温箱中保温5-5-1010分，以加快反应速度。若培养物呈红色者为分，以加快反应速度。若培养物呈红色者为V-PV-P试验阳性。试验阳性。（2）柠檬酸盐试验：培养）柠檬酸盐试验：培养

42、48h后观察柠檬酸盐斜面后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，绿色为阴性。绿色为阴性。菌 名IMViC试验吲哚试验甲基红试验伏-普试验柠檬酸试验大肠杆菌产气肠菌对 照（三）硫化氢试验：（三）硫化氢试验：1、接种和培养：、接种和培养： 将大肠杆菌与产气肠杆菌分别穿刺接种将大肠杆菌与产气肠杆菌分别穿刺接种2支醋酸支醋酸铅培养基，铅培养基，37 培养培养48h。2、结果观察：、结果观察： 培养培养48h后，有黑色硫化铅的产生的为阳性。后，有黑色硫化铅的产生的为阳性。比较不同场所和不同条件下细菌的数量和类型。比较不同场所和不同条件下细

43、菌的数量和类型。观察不同类群微生物的菌落形态特征。观察不同类群微生物的菌落形态特征。 体会无菌操作的重要性。体会无菌操作的重要性。掌握水和环境中微生物的测定方法。掌握水和环境中微生物的测定方法。检测污染水域微生物的类型和数量。检测污染水域微生物的类型和数量。 实验七实验七 水、环境中微生物的测定水、环境中微生物的测定一、实验目的一、实验目的应用平板菌落计数技术测定污染水的细菌应用平板菌落计数技术测定污染水的细菌总数。由于细菌种类繁多，不可能找到一总数。由于细菌种类繁多，不可能找到一种培养基在一种条件下，使所有的细菌均种培养基在一种条件下，使所有的细菌均能生长繁殖。因此，计算出来的细菌总数能生长

44、繁殖。因此，计算出来的细菌总数仅是一种近似值。仅是一种近似值。利用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基可以大利用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基可以大致测定不同环境中存在的微生物。致测定不同环境中存在的微生物。二、实验原理二、实验原理样品的采取样品的采取 自来水自来水 取自自来水管道。取自自来水管道。 橙汁橙汁 购于超市。购于超市。 口腔、人民币、门把手和实验环境中的微生物。口腔、人民币、门把手和实验环境中的微生物。 观音湖水观音湖水 距水面距水面10-15 cm10-15 cm的深层水样。的深层水样。培养基培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 。仪器或其他用具仪器或其他用具 灭菌培养皿，无菌

45、枪头，涂棒等。灭菌培养皿，无菌枪头，涂棒等。三、实验器材三、实验器材 无菌操作采用无菌操作采用1010-1-1， 1010-2-2 ， 1010-3-3稀释液涂布牛肉膏稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板蛋白胨平板; ;每个稀释度每个稀释度2 2个重复。个重复。N-乙酰葡糖胺四、实验步骤四、实验步骤1.1.观音观音湖水中微生物的测定湖水中微生物的测定每个培养皿每个培养皿加加0.1ml 0.1ml 稀稀释液释液(LTA)2.2.口腔、人民币和门把手口腔、人民币和门把手微生物的测定微生物的测定 用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表面挑取微生物，然后放入装有面挑取微生物

46、，然后放入装有0.5 ml0.5 ml无菌水的无菌水的EPEP管中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋管中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中，涂布均匀。白胨平板中，涂布均匀。3.3.实验室空气中实验室空气中微生物的测定微生物的测定 将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台1010，2020，3030，4040，5050，60 min60 min后，盖上皿盖，倒置培养。后，盖上皿盖，倒置培养。4.4.自来水自来水、橙汁、橙汁中中微生物的测定微生物的测定 取取1 ml1 ml涂布牛肉膏蛋白胨平板。涂布牛肉膏蛋白胨平板。用无菌用无菌三角瓶收集。三角

47、瓶收集。五、实验结果五、实验结果计算每计算每mlml观音湖水中含有微生物的数量。观音湖水中含有微生物的数量。你所测定的环境中微生物的数量和种类；你所测定的环境中微生物的数量和种类；并试着分别记录每种细菌的大小、形态、并试着分别记录每种细菌的大小、形态、干湿、透明度、颜色以及边缘等特征。干湿、透明度、颜色以及边缘等特征。观测实验结果时间？观测实验结果时间？ 名名 称称 观观 音音 湖湖 水水 自来水自来水（个（个/mL）口口 腔腔（个（个/cm2人民币人民币（个（个/cm2）门把手门把手（个（个/cm2） 空空 气气（分钟）（分钟） （个）（个）10-110-210-3总数总数 数数 量量 形形

48、 态态实验八实验八 T T淋巴细胞的检查淋巴细胞的检查一、实验目的和要求一、实验目的和要求1.1.掌握掌握T T淋巴细胞淋巴细胞E E花环试验的原理、正常值，了花环试验的原理、正常值，了解其方法和用途。解其方法和用途。2.2.熟悉光镜下熟悉光镜下E E花环的形态和计数方法。花环的形态和计数方法。 免疫系统免疫系统免疫细胞免疫细胞免疫器官：胸腺、肾脏、脾脏免疫器官：胸腺、肾脏、脾脏免疫分子：抗原、抗体免疫分子：抗原、抗体其他免疫细胞：肥大细胞、粒细胞等其他免疫细胞：肥大细胞、粒细胞等抗原递呈细胞：单核吞噬细胞等抗原递呈细胞：单核吞噬细胞等淋巴淋巴细胞细胞T细胞细胞B细胞细胞NK细胞细胞K细胞细胞

49、免疫活性细胞免疫活性细胞二、实验二、实验内容和内容和原理原理 淋巴细胞经瑞氏染色液染色后呈淋巴细胞经瑞氏染色液染色后呈蓝色蓝色。T T细胞表细胞表面具有能与绵羊红细胞（面具有能与绵羊红细胞（SRBCSRBC）表面糖肽结合的受）表面糖肽结合的受体，称为体，称为E E受体（受体（CD2CD2）。当。当T T细胞与细胞与SRBCSRBC混合后，混合后，SRBCSRBC便粘附于便粘附于T T细胞表面，呈现花环状。通过花环形细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查成检查T T细胞的方法，称为细胞的方法，称为E E花环形成试验花环形成试验。根据花。根据花环形成的多少，可测知环形成的多少，可测知T T细胞的数

50、目，从而间接了解细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的发生，考核药机体细胞免疫功能状态，判断疾病的发生，考核药物疗效等。物疗效等。 三、实验材料三、实验材料 E E花环切片、显微镜花环切片、显微镜四、实验结果与分析四、实验结果与分析 油镜检查：淋巴细胞呈蓝色，油镜检查：淋巴细胞呈蓝色，SRBCSRBC呈红色围绕淋呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有巴细胞形成花环，凡表面粘附有3 3个或个或3 3个以上个以上SRBCSRBC者者为为花环形成细胞（即花环形成细胞（即E E阳性细胞）阳性细胞）。 计数计数200200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并个淋巴细胞，算出花环形成百分

51、率，并推测其推测其T T淋巴细胞百分率。淋巴细胞百分率。花环形成百分率花环形成百分率% =% = E E花环花环淋巴细胞淋巴细胞绵羊红细胞绵羊红细胞T淋巴细胞淋巴细胞实验九实验九 细菌对药物敏感性的实验细菌对药物敏感性的实验（药敏片扩散法）（药敏片扩散法）一、实验目的和要求1.掌握药敏片扩散法进行药敏实验的一般方法掌握药敏片扩散法进行药敏实验的一般方法2.体会药敏实验在临床用药上的指导意义体会药敏实验在临床用药上的指导意义二、实验内容和原理 药敏片是含有抗生素的滤纸片，将其置于涂满待药敏片是含有抗生素的滤纸片，将其置于涂满待测菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内扩测菌的固体培养基上，抗菌药

52、物通过向培养基内扩散，抑制细菌生长，从而出现抑菌环。根据抑菌环散，抑制细菌生长，从而出现抑菌环。根据抑菌环的大小可以判定细胞对此药物的敏感度。的大小可以判定细胞对此药物的敏感度。三、器材及试剂1.1.活材料：活材料：培养培养24h24h的大肠杆菌平板培养物。的大肠杆菌平板培养物。2.2.培养基和试剂：培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、药牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、药敏片（丁胺卡那霉素、四环素、复方新诺明、庆敏片（丁胺卡那霉素、四环素、复方新诺明、庆大霉素）。大霉素）。3.3.器材：器材：无菌平皿、无菌水、移液枪、无菌涂布无菌平皿、无菌水、移液枪、无菌涂布棒、镊子、酒精灯、生化培养箱、直尺。棒、

53、镊子、酒精灯、生化培养箱、直尺。 制平板制平板制备菌悬液制备菌悬液接种接种加药片加药片培养培养1.1.制平板：制平板：取无菌平皿，将已溶化并冷却至取无菌平皿，将已溶化并冷却至5050o oC C左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使之冷凝成平板。平皿中，使之冷凝成平板。2.2.制备菌悬液：制备菌悬液：取无菌水，用接种环取菌种取无菌水，用接种环取菌种1-21-2环接入无菌水中，充分摇匀，制成菌悬液环接入无菌水中，充分摇匀，制成菌悬液。3.3.接种：接种：用移液枪吸取已制好的菌悬液用移液枪吸取已制好的菌悬液0.2ml0.2ml接种接种于平

54、板上，用无菌涂布棒涂匀，晾干一段时间。于平板上，用无菌涂布棒涂匀，晾干一段时间。 4.4.加药片：加药片：镊子用酒精棉球擦拭后灼烧灭菌镊子用酒精棉球擦拭后灼烧灭菌, ,将药将药敏纸片分别平铺于含菌平板上，注意纸片放好后不敏纸片分别平铺于含菌平板上，注意纸片放好后不要移动，每皿平板贴四片药敏纸片。要移动，每皿平板贴四片药敏纸片。5.5.培养：培养：将平皿置于将平皿置于3737下培养下培养24h24h后观察结果，后观察结果，观察有无抑菌圈及测量其直径，并判定其对药物的观察有无抑菌圈及测量其直径，并判定其对药物的敏感性。敏感性。6.6.结果判定：结果判定：观察有无抑菌圈及测量其直径，按观察有无抑菌圈

55、及测量其直径，按下表判定对药物的敏感性。下表判定对药物的敏感性。 抗菌药物纸片含药量（ug）抑菌环直径（mm）耐药(R)中度敏感(M)敏感(S)丁胺卡那霉素301415-1617头孢唑啉3014 15-1718先锋霉素I75 1521 复方新诺明 23.75/1.25 10 11-1516 四环素3011 12-1415 氯霉素3012 13-1718 红霉素1513 13-1518 庆大霉素1012 13-1415 1.1.滤纸片滤纸片 2.2.有菌区有菌区 3.3.抑菌区抑菌区五、实验结果与分析抗菌药物抗菌药物纸片含药量（纸片含药量（ugug）抑菌环直径（抑菌环直径（mmmm）敏感性敏感性

56、丁胺卡那霉素丁胺卡那霉素3030复方新诺明复方新诺明23.75/1.2523.75/1.25四环素四环素3030庆大霉素庆大霉素1010抗菌药物抗菌药物纸片含药量纸片含药量（g g）抑菌环直径（抑菌环直径（mmmm）敏感性敏感性丁胺卡那霉素丁胺卡那霉素3030复方新诺明复方新诺明23.75/1.2523.75/1.25四环素四环素3030庆大霉素庆大霉素1010实验十实验十 鱼类病理学切片的观察鱼类病理学切片的观察一、实验目的和要求一、实验目的和要求通过观察鱼类以及其他动物的病理学切片，掌握常通过观察鱼类以及其他动物的病理学切片，掌握常见疾病的病理变化。见疾病的病理变化。二、实验内容：二、实验

57、内容：1.1.肝细胞脂肪变性、肉芽组织切片的显微观察肝细胞脂肪变性、肉芽组织切片的显微观察 2.2.烂鳃病病理学切片的显微观察烂鳃病病理学切片的显微观察3.3.肠炎病病理学切片的显微观察肠炎病病理学切片的显微观察肝细胞脂肪变性肝细胞脂肪变性脂滴脂滴肝脂肪变性肝脂肪变性变性的细胞体积增大，胞质内出现大小变性的细胞体积增大，胞质内出现大小不等的脂滴，大的脂肪滴可充满整个细不等的脂滴，大的脂肪滴可充满整个细胞，并将细胞核挤到一边，状似脂肪细胞，并将细胞核挤到一边，状似脂肪细胞。胞。 肉芽组织肉芽组织肉芽组织肉芽组织 肉芽组织凸起的颗粒主要由成纤维细胞肉芽组织凸起的颗粒主要由成纤维细胞和新生的毛细血管

58、所组成，其间常有多少不和新生的毛细血管所组成，其间常有多少不等的中性粒细胞和巨嗜细胞浸润。毛细血管等的中性粒细胞和巨嗜细胞浸润。毛细血管多垂直向创面生长，并有瓣状弯曲，互相吻多垂直向创面生长，并有瓣状弯曲，互相吻合。合。 （一）概念肉芽组织（granulation tissue）是新生的富含毛细血管的幼稚阶段的纤维结缔组织。（二）肉芽组织的成分及形态特点肉芽组织是由纤维母细胞、毛细血管及一定数量的炎性细胞等有形成分组成的。其形态特点如下。1肉眼观察 肉芽组织的表面呈细颗粒状，鲜红色，柔软湿润，触之易出血而无痛觉，形似嫩肉故名。2镜下观察 基本结构为：大量新生的毛细血管，平行排列，均与表面相垂直

59、，并在近表面处互相吻合形成弓状突起，肉眼呈鲜红色细颗粒状。新增生的纤维母细胞散在分布于毛细血管网络之间，很少有胶原纤维形成。多少不等的炎性细胞浸润于肉芽组织之中。肉芽组织内常含一定量的水肿液，但不含神经纤维，故无疼痛。 3成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。 鳃丝鳃丝鳃小片鳃小片烂鳃病烂鳃病 正常鳃瓣的水平切面上，鳃丝排列整齐，正常鳃瓣的水平切面上，鳃丝排列整齐，鳃小片约以鳃小片约以45度角交互平行排列在鳃丝软骨的度角交互平行排列在鳃丝软骨的两侧。严重时肿大变性的上皮细胞坏死脱落，两侧。严重时肿大变性的上皮细胞坏死脱落，毛细血管裸露，同时呼吸上皮

60、细胞也发生增毛细血管裸露，同时呼吸上皮细胞也发生增生，使相邻鳃小片融合；鳃丝呈棍棒状；鳃丝生，使相邻鳃小片融合；鳃丝呈棍棒状；鳃丝软骨呈光秃秃的，甚至烂去一段。软骨呈光秃秃的，甚至烂去一段。 固有层固有层肠腔肠腔上皮细胞上皮细胞细菌性肠炎病细菌性肠炎病 固有层内毛细血管显著充血、出血，肠黏固有层内毛细血管显著充血、出血，肠黏膜上皮变性、脱落，严重者黏膜上皮解体，裸膜上皮变性、脱落，严重者黏膜上皮解体，裸露出严重充血、出血的固有层，肠腔内有大量露出严重充血、出血的固有层，肠腔内有大量炎性分泌物。用革兰氏染色的切片，可见在炎炎性分泌物。用革兰氏染色的切片，可见在炎性分泌物中有多量革兰氏染色阴性的短