血管内皮生长因子及微血管密度在肝癌中的表达

1、    血管内皮生长因子及微血管密度在肝癌中的表达        摘要 目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在肝癌微血管形成中的作用以及与原发性肝 癌生物学行为的关系。方法：选择32例原发性肝癌手术标本，采用免疫组织化学方法测定血管内皮生长因子及因子的蛋白表达。结果：血管内皮生长因子在原发性肝癌中的阳性表达率为65.63；原发性肝癌中肿瘤微血管密度（MVD）为30.96±12.32，其中血管内皮生长因 子表达阴性者MVD为19.12±7.34，血管内皮生

2、长因子表达阳性者MVD为42.36±15.54，二者 相比有显著差异（P<0.01).结论:血管内皮生长因子能促进肿瘤中微血管形成,血管形成在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用.关键词 肝癌 血管内皮生长因子 微血管密度 The Expression of Vascular Endothelial Growth Factorand Microvessel Density in Primary Liver CancerXu Hongyu Bi Li Yang Yiulin et alThe First Affiliated Hospital of Harbin Medical

3、 University, HarbinAbstract Objective: To evaluate the function of expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvessel density (MVD) and to study the relationship between VEGF and the clinic characteristics of cancer. Methods: The expression of VEGF and factor in 32 patients with

4、 primary liver cancer were studied retrospectively by using immunohistochemical staining. Results: The expression of VEGF was 65.63 in primary liver cancer patients which was significantly higher than that in normal individuals （P<0.01).The microvessel density was 30.96±12.32 in primary live

5、r cancer patients.The MVD in VEGF positive group was 42.36±15.54 and was higher than that of VEGF negative group  （P<0.01).Conclusion:VDGF plays an important role in the growth and metastasis of prinary liver cancers.Key Words Primary liver cancer Vascular endothelial growth factor Micr

6、ovessel density ?大量的研究证明，实体瘤的生长和转移有赖于新生血管形成1。在无新生血管形成阶段，肿瘤亦无转移现象发生。血管内皮生长因子是一个重要的血管新生诱导剂。有文献报道，胃癌、脑肿瘤的新生血管化程度与肿瘤侵袭性及其预后有相关性，是一个独立的预后因素24。在这些研究中，常用因子相关抗原染色来显示微血管。原发性肝癌具有短时间 内即可发生肝内门脉广泛转移的特点，自然病程仅为36个月，是严重威胁人民生命的一种 恶性肿瘤。我们采用免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子及因子在原发性肝癌中的表 达，以探讨血管内皮生长因子及微血管密度与原发性肝癌的肿瘤生物学行为的相关性。1 材料与方法1.

7、1 原发性肝癌标本32例标本均为本院19941998年间外科手术切除标本，经病理检查证实为肝细胞癌。其中男27例，女5例；年龄在3562岁之间，平均年龄43.76岁，术前未经过任何化疗和放疗，每例标本均带有癌旁组织。标本经福尔马林固定 ，常规脱水包埋，5m连续切片，分别用于常规HE染色和不同的免疫组织化学及原位杂交染 色。1.2 染色方法免疫组织化学染色：采用ABC法。ABC试剂盒、血管内皮生长因子抗体、因子抗体及各 阳性对照片均购自武汉博士德生物工程有限公司。染色步骤按产品说明书进行。阴性对照设 PBS替代一抗的空白对照和正常兔血清（1:50）替代一抗的替代对照。1.3 观察指标1.3.1

8、光学显微镜下观察VEGF的表达位于细胞浆或细胞膜上,以每一组织切片中大于10 肿瘤细胞浆或细胞膜染色定为VEGF表达阳性。1.3.2 微血管染色及定量方法采用Weidner报道的方法进行。先在40倍光镜下扫视整个切 片，寻找高血管密度区，即“热点”，再在200倍视野下计数染成棕色的血管数目，结果用 单个200倍视野下最多的血管数目来表示6。1.4 统计学分析相关数据分别用t检验、2检验或等级资料秩和检验进行统计学分析。2 结果2. 1血管内皮生长因子、微血管密度在原发性肝癌及癌旁组织中的表达VEGF主要表达在细胞浆或细胞膜，32例肝癌标本中，21例表达为阳性，表达率为65.63 ，其中同一切片

9、中的癌旁正常肝细胞的表达率为100(表1)。表1VEGF、MVD在肝癌组织及癌旁组织中的表达例（）分类例数VEGFMVD癌旁组织3232(100)35.14±10.49肝癌组织3221(65.63)30.69±12.322.2 血管内皮生长因子及微血管密度与肿瘤临床病理资料 见表2。表232例原发性肝癌病例的临床病理资料例（）分类VEGFP值阴性阳性例数1121肿瘤直径5cm6(54.55)2(9.52)<0.05>5cm5(45.45)19(90.48)肿瘤包膜有7(63.64)10(47.62)>0.05无4(36.36)11(52.38)肿瘤分化高分

10、化7(63.64)9(42.86)>0.05低分化4(36.36)12(57.14)门脉癌栓有2(18.18)15(71.43)<0.01无9(81.82)6(28.57)MVD19.12±7.3442.36±15.54<0.013 讨论 原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到31/10万，早期诊断率低，而且肝癌患 者术前难以确定有无微小转移。因此，术后复发和转移成为目前临床急需解决的问题。大量 研究证明肿瘤生长必需依赖血管生成，且无血管生成时，肿瘤亦无转移现象发生。血管内皮 生长因子是强大的促血管生长因子，字能增加血管通透能力，促进内皮细胞增殖，对

11、肿瘤的浸润和转移有重要影响。己有学者证明，血管内皮生长因子是反映胃癌、乳腺癌及脑肿瘤患者预后的因子1-3。本研究结果正常肝组织中血管内皮生长因子表达为阴性，肝癌组织中的表达为65.63%,癌旁组织中的表达为100%,此结果与学者陶厚权报道胃癌中血管内皮生长因子的表达结果相似2.而癌旁组织的高表达与肝癌短时间内即可发生肝内广泛转移的现象相符合.目前多数学者认采用对血管内皮细胞抗原的免疫组织化学技术进行肿瘤血管定量的方法即MVD法,此方法准确可靠,MVD被认为是能反映肿瘤血管生成的一个指标,且有可能成为预测肿瘤转移、复发和预后的一项指标5，6。本研究采用此方法测得肝癌组织的MVD为30.96

12、77;其中血管内皮生长因子表达阳性者MVD为42.36±15.54,血管内皮生长因子表达阴性者MVD为19.12±7.34.而且我们还观察到在微血管化密度较高的区域,新生血管化程度活跃,血管内皮生长因子的表达也高,反映血管内皮生长因子的表达与新生血管化部位具有一致性,怀陶厚权等在胃癌中研究结果相似2.本研究结果还显示血管内皮生长因子的表达与肿瘤的分期呈正相关。由此推测，血管内皮生长。因子是肝细胞癌中一种重要的促进肿瘤血管生长的因子，客观存在能促进肿瘤血管的形成，丰富血管网的建立，为肿瘤生长提供了充足的养分。因此肝细胞癌的生长和转移均委迅速，自然病程权为36个月.因此，我们认

13、为血管内皮生长因子对于原发性肝癌的生长和转移起到重要的作用。临床 上应进一步制备相应的抑制剂，抑制血管内皮生长因子的表达，阻断血管内皮生长因子对血 管的影响，从而达到抑制肝癌的生长和转移的目的，以延长肝癌患者的生存期。(范锡凤 校对)本文课题受黑龙江省自然科学基金资助作者单位:徐洪雨 哈尔滨医科大学附属一院消化内科 检验科（哈尔滨市150001）毕莉 哈尔滨医科大学附属一院消化内科 检验科（哈尔滨市150001）杨幼林 哈尔滨医科大学附属一院消化内科 病理科（哈尔滨市150001）关希丽 哈尔滨医科大学附属一院消化内科 病理科（哈尔滨市150001）参考文献1张海滨，田野苹，叶天星.血管内皮生

14、长因子与实体肿瘤.国外医学生理病理科学与临床分册，1998;18（2）：1172陶厚权，林言浅，王瑞年，等.血管内皮生长因子表达在胃癌浸润转移中的作用.中华消化杂志，1998;18（5）：2873陶厚权，王瑞年.血管内皮生长因子与脑肿瘤.国外医学神经病学神经外科学分册,1996;23（2）：1464Kiyoshi Maeda,Yong suk Chung,Yoshinari Ogawa, et al. Prognostic Value of Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Gastric Carcinoma. Cancer,1996;77(5):858 5夏景林，杨秉辉，叶胜龙.原发性肝癌肿