大孔吸附树脂分离富集土贝母总皂苷的研究

1、大孔吸附树脂分离富集土贝母总皂苷的研究马挺军 屠鹏飞 3 吕飞杰1北京大学 药学院 北京1中国农业大学 食品科学与营养工程学院 北京1中国农业科学院北京 摘要 目的优化大孔吸附树脂分离纯化土贝母总皂苷的工艺条件 方法 以土贝母总皂苷的吸附量和解 吸率为指标大范围筛选树脂 并通过单因素试验 ! 正交试验及方差分析确定了土贝母总苷分离富集的优选操作条 件 结果 树脂具有较好的吸附性能和解吸效果 优选吸附条件为上样含生药量 # 树脂色谱柱的 径高比 药材 树脂为 吸附完全后 先以水洗脱 除去杂质 再以 乙醇洗脱 可以得到纯度较好的土贝 母总苷 结论 树脂对土贝母总苷的吸附量大 解吸容易 确定的吸附与

2、洗脱条件简单可行 所得产品的色泽 好 ! 纯度高此工艺具有良好的产业化前景 关键词 土贝母土贝母总苷 生产工艺 大孔吸附树脂 中图分类号 1 文献标识码 文章编号 2 2 2 收稿日期 2 2 通讯作者 3屠鹏飞 × 2 1 1 土贝母为葫芦科植物土贝母 µµ2µ ¬ 1 干燥的块茎 有清热解 毒 消肿散结之功效 主治乳痈 瘰疬痰核 疮疡肿 毒 疣赘 蛇虫咬伤 其主要成分为甾醇 ! 三萜皂苷 等 土贝母皂苷主要组分为土贝母苷甲 ! 乙 ! 丙 苷甲含量达 1 具有抗 肿瘤 ! 抗病毒等多种药理活性 为了更好地开发和应用土贝母资源 对土贝母 总苷

3、的提纯工艺进行了研究 结果表明 利用型大孔吸附树脂纯化土贝母总苷具有工艺简单 操 作方便 总苷纯度高等优点 1 药材 !试剂与仪器 土贝母采自山西省绛县 经北京大学药学院屠鹏 飞教授鉴定为葫芦科植物土贝母 1µ的 干燥块茎 紫外分光光度计 ° 2 大孔树脂 2 南开大学化工 厂 ° ° ° 沧州宝恩化工有限公 司 天津农药总厂 土贝母苷甲 对照品 自制 光谱鉴定结构为苷甲 ° 检测纯度 大于 香草醛 ! 冰醋酸 ! 高氯酸和甲醇均为分析 纯 2 方法与结果 211 含量测定21111 标准曲线考察 精密称取土贝母苷甲对照品 1 置 量

4、瓶中 加甲醇超声溶解并定容至刻度 备用 分别吸取对照品溶液 1 11 1 1 1 置 具塞试管中水浴蒸干 然后放入 烘箱中烘 待冷 却后分别加入 的香草醛 2冰醋酸溶液 1 振摇溶解后加入浓硫酸 1 摇匀后置于 水浴中加热然后冰水冷却 再各加入冰醋 酸 冰水冷却 后于 测定吸光度 得到回归方程 1 1 1在 1 1 时 线性关系良好 21112 样品含量 精密量取供试液 放入 具塞试管中 水浴蒸干然后放入 烘箱中烘 待冷却后按标准曲线制备项下的方法测定吸光度 并计算总皂苷的含量 21113 上样溶液制备 称取粉碎的土贝母药材加入 乙醇 加热回流提取 次 每次 减压蒸干得浸膏 上样时加入适量水配

5、制不同含量备用 212 大孔吸附树脂选择21211 静态吸附量考察 分别精密称取预处理过 的大 孔 吸 附 树 脂 ° ° 2 ° 各 置于#量瓶中分别加入 土贝母药材提取溶液 含生药量为 #放置过夜 滤过 分别测 定原液和滤液中土贝母总苷的含量 测定 种树脂的 含水量 计算各干树脂的静态净吸附量 结果见图 图 不同树脂对土贝母总皂苷的静态最大吸附率从图中可以看出 不同类型的大孔吸附树脂对 土贝母总苷的静态吸附效果有较大的差异 种树 脂中吸附效果最好的为 其次为 ° 和 ° 的吸附容量最小 因此 选 择吸附效果较好的 种树脂 ° &#

6、176; 进行进一步考察 21212 大孔吸附树脂洗脱度考察 称取预处理过的 种大孔树脂 ° ° 各干重 装柱 分别取 土贝母水提液 每毫 升 生药 上样 然后分别依次用去离子水乙醇各 洗脱收集洗脱液 测定总皂苷的含量 计算不 同含量乙醇的洗脱量 结果见图 图 不同大孔树脂对土贝母总苷的解吸曲线 可以看出 种大孔树脂吸附土贝母总苷后均 能由不同含量的乙醇解吸出总皂苷 在 乙醇含量区间内 随着乙醇含量的增大 洗脱量也随 之增大 且 乙醇洗脱效果最好 此外 可以看 出 树脂的洗脱量整体上均超过其他 种树 脂 综合以上试验 表明 种树脂中 大孔树 脂对土贝母总苷吸附量最大 解吸率

7、最高 其最佳 的洗脱溶剂为 乙醇 因此以 大孔树脂为 吸附填料进行进一步的考察 21213 最大动态吸附量考察 精密称取树 脂 干重 装柱 柱体积约 徐徐注入含量为每毫升 生药的土贝母水提溶液 上柱流速调节为 # 收集流出液 每份 × 检 识直至出现苷甲斑点 以流出液体积为横坐标 总 皂苷含量为纵坐标 作图 即得 树脂对土贝母总苷的动态吸附曲线图 结果见图图 树脂对土贝母总苷的动态吸附曲线从上图可以看出 树脂对土贝母总苷具有 良好的动态吸附性能 泄漏时间较长 才开始 出现泄漏 并较长时间保持低浓度泄漏 直到流出 液达到 时 流出液中总皂苷的含量才达到1 #左右 当流出液的体积到达 时

8、已达到吸附平衡 此时大孔吸附树脂的饱和动态 吸附量约为每克干树脂 总皂苷 相当于 1生药 与静态吸附特征基本一致 213 大孔树脂吸附条件的优化为考察上样时样品溶液的浓度 ! 树脂柱的径高 比和生药与树脂的比例 个条件对 树脂吸附 土贝母总苷的影响采用表 的正交设计分别装柱 ! 上样 并计算各柱子对应的树脂的吸附量 实验结果 及方差分析分别见表 表正交试验因素水平水平 上样含量#树脂色谱柱 径高比药材 树脂 表 正交试验结果1动态吸附量1 1 1 1 1 1 1 11#表 正交试验方差分析方差来源 离均差平方和 自由度 均方 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 误差 1 1注 11由表

9、 可知 因素 无显著性差异 说明了上 样含量在 # 内对 吸附土贝母 总苷的效率无显著性影响 水平 对应的动态吸附 率相对高些 因此选择 # 的样品含量上 样 因素 和因素 均有显著性差异 说明在正交 设计的 个水平内 因素的变化对总皂苷的吸附 率有较大的影响 根据试验数据并结合实际生产考 虑 最后确定最佳吸附条件为 即上样含量 为 # 色谱柱的径高比确定为 药材 树脂比例为 214乙醇含量对洗脱效果的影响取 大孔吸附树脂依法上柱 按上 述实验确定的吸附条件进行吸附 吸附完全后 以梯 度乙醇洗脱 收集洗脱液 浓缩至干后称重并测定总 皂苷的含量 计算杂质累积洗脱率和总皂苷累积洗 脱率 以乙醇含量

10、为横坐标 以洗脱率为纵坐标作 图 结果见图 从图 可以看出 吸附后用水洗脱可以除去 图 乙醇含量对洗脱效果的影响的杂质成份 乙醇可以除去 以上的杂 质 但是有少量的皂苷损失 在要求终产品的纯度较 高时 可以忽略不计 因此 吸附后可以用水或者 乙醇洗脱除杂 随着醇浓度的增加 总皂 苷的洗脱率也得以提高 当乙醇含量达到 时 以上的总皂苷都被洗脱下来 此后再增加乙醇 浓度解吸率虽有提高 但变化不明显 而且乙醇浓 度过高 生产成本增加 而且存在安全隐患 因此采 用 乙醇为最终的洗脱浓度 3讨论树脂对土贝母总皂苷的吸附量大 解吸容 易 大孔树脂的饱和动态吸附量约为每克干树脂 总皂苷 与静态吸附特征相符 确定的吸附与洗 脱条件简单易行 可作为土贝母总皂苷的纯化方法 参考文献 中国药典 1一部 1 1 1 于立坚 马润娣 于廷曦 1土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用 1中国新药杂志 1µµµµµµ× 2 × ° 2