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文档简介

1、DNADNA的根本单位:的根本单位:含含N碱基碱基磷酸基磷酸基脱氧核糖脱氧核糖脱氧核苷酸脱氧核苷酸温故知新温故知新鸟嘌呤脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸A腺嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸GCTATGC磷酸二酯键磷酸二酯键脱氧核苷酸的衔接方式:脱氧核苷酸的衔接方式:DNARNA全称全称根本单位根本单位分布分布五碳糖五碳糖碱基碱基构造构造脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷酸脱氧核糖核苷酸核糖核酸核糖核酸核糖核苷酸核糖核苷酸细胞核细胞核.线粒体线粒体.叶绿体叶绿体细胞质细胞质脱氧核糖脱氧核糖核糖核糖A,G,C ,TA,G ,C,U双链

2、双链单链单链DNA 和和RNA的比较的比较【课堂反响】【课堂反响】下面是下面是DNADNA的分子构造方式图,说出图中的分子构造方式图,说出图中1 11010的称的称号。号。 12345678109GTCA1. 胞嘧啶胞嘧啶2. 腺嘌呤腺嘌呤3. 鸟嘌呤鸟嘌呤4. 胸腺嘧啶胸腺嘧啶5. 脱氧核糖脱氧核糖6. 磷酸磷酸7. 胸腺嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸8. 碱基对碱基对9. 氢键氢键10. 一条脱氧核苷酸链的片段一条脱氧核苷酸链的片段基因工程的原理基因工程的原理操作环境操作环境操作对象操作对象操作程度操作程度根本过程根本过程结果结果基因重组基因重组重组重组DNADNA导导入入构构成成分子手

3、术刀分子手术刀限制性内切酶限制性内切酶思索思索 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNA能够进入另能够进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例?的实例? 现今存在的生物为什么没有在长期的进化现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源过程中被外源DNA的入侵而灭绝,仍能坚的入侵而灭绝,仍能坚持一种稳定形状?持一种稳定形状? 怎样才干使外来的怎样才干使外来的DNA失效从而维护本身?失效从而维护本身?黏性末端黏性末端平末端平末端 大肠杆菌的一种限制酶大肠杆菌的一种限制酶EcoR)EcoR)能识别能识别GAATTCGAATTC序列,序列,并在

4、并在G G和和A A之间切开构成黏性末之间切开构成黏性末端。端。 Sma Sma能识别能识别CCCGGGCCCGGG序列,并序列,并在在C C和和G G之间切割构成平末端之间切割构成平末端 。 限制酶切割限制酶切割DNA后构后构成的末端成的末端黏性末端、黏性末端、平末端是如何构成的?平末端是如何构成的?重播重播思索基因的针线基因的针线DNADNA衔接酶衔接酶切断的切断的DNA片段要与受体细胞的片段要与受体细胞的DNA衔接,他觉得可以用什么酶?衔接,他觉得可以用什么酶?DNA聚合酶和聚合酶和DNA衔接酶有何衔接酶有何一样点和不同点?一样点和不同点?DNA衔接酶衔接酶DNA聚合酶聚合酶衔接DNA链

5、双链单链衔接部位在两DNA片段之间构成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3末端的羟基上,构成磷酸二酯键 限制酶切割后有两种不同的结果,限制酶切割后有两种不同的结果,一种产生黏性末端,一种产生平末端。一种产生黏性末端,一种产生平末端。那么恢复它们的衔接时,所用那么恢复它们的衔接时,所用DNA衔衔接酶能否可以不加选择?接酶能否可以不加选择?E.coliDNAE.coliDNA衔接酶:衔接黏性末端衔接酶:衔接黏性末端T4DNAT4DNA衔接酶:衔接黏性末端和平末端衔接酶:衔接黏性末端和平末端基因的针线:基因的针线:DNADNA衔接酶衔接酶G A A T T CC T T A A GG A

6、A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G同种限制酶同种限制酶切割切割基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进展表达,首先得将这个基因在乙生物体内进展表达,首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去!能将外源基因送入送到乙生物的细胞内去!能将外源基因送入细胞的工具就是载体。细胞的工具就是载体。基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体假设目的基因导入受体细胞后不能复制假设目的基因导

7、入受体细胞后不能复制将怎样?将怎样?作为载体没有切割位点将怎样?作为载体没有切割位点将怎样?目的基因能否进入受体细胞,他如何觉目的基因能否进入受体细胞,他如何觉察?察?假设载体对受体细胞有害将怎样?假设载体对受体细胞有害将怎样?作为载体的必要条件作为载体的必要条件 能自我复制能自我复制 有切割位点有切割位点 能与目的基因结合能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达;能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达; 有遗传标志基因有遗传标志基因 对受体细胞无害对受体细胞无害 比较容易得到比较容易得到 种类:质粒、噬菌体和动植物病毒种类:质粒、噬菌体和动植物病毒3 3、基因的运输工具、基因的运输工具运载体运载体能复制并带着插能复制并带着插入的目的基因一入的目的基因一同复制同复制有切割位点有切割位点有标志基因的存有标志基因的存在,未来可用含在,未来可用含青霉素的培育基青霉素的培育基鉴别。鉴别。在基因工程中,切割运载体和在基因工程中,切割运载体和含有目的基因的含有目的基因的DNA片段,需片段,需运用运用 同种限制酶同种限制酶 B. 两种限制酶两种限制酶同种衔接酶同种衔接酶 D. 两种衔接酶两种衔接酶 T磷磷酸酸二二酯酯键键1234512345 A限制性内切酶1.特点:特异性,即识别特定核苷酸 序列,

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