关于腰痛宁胶囊的毒理学的分析策略

1、关于腰痛宁胶囊的毒理学的分析策略    内容摘要：摘要以SD大鼠为受试对象，使用Bliss法测定口服腰痛宁胶囊的LD50 ;采用4个剂量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，连续180d，观察给药90，180d时大鼠的生.摘要以SD大鼠为受试对象，使用Bliss法测定口服腰痛宁胶囊的LD50 ;采用4个剂量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，连续180d，观察给药90，180d时大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、组织病理变化及停药30d时上述指标的变化。大鼠口服腰痛宁胶囊的急性毒性和长期毒性作用。长期大剂量

2、服用腰痛宁胶囊，对肾功能有一定影响并且恢复较慢，建议肾功能不好的患者慎用。通过对腰痛宁胶囊180d用药过程中各项指标反应的观察，未见性别差异。综合分析认为，腰痛宁胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的。  关键字：  腰痛宁胶囊    急性毒性    马钱子    士的宁    大鼠    长期毒性 腰痛宁胶囊为常用中成药，是国家中药保护品种。具有消肿止痛、疏散寒邪、通经活络的作用，在治疗腰椎间盘凸起、腰椎增生、坐骨神经痛、腰肌纤维

3、炎、慢性风湿性关节炎等疾病时具有独特的疗效 1 。因处方中含有马钱子等毒性中药，为给临床用药提供安全的实验依据，本文对腰痛宁胶囊进行了毒理学研究。  1 材料和方法  1.1 实验材料 SD大鼠120150g，180220g由河北省实验动物中央提供，合格证号:第04036。 腰痛宁胶囊，由承德中药团体提供，批号:20000920。实验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液灌胃使用。  1.2 实验方法 1.2.1 大鼠LD50 的测定  选用SD大鼠，经由预实验发现雌、雄大鼠口服腰痛宁胶囊的急性毒性反应差异很大，因此将雌、雄大鼠分别分组实验。将雌性SD大鼠分11

4、50.00，977.50，830.90，706.20，600.30，510.03及433.707个组，组间剂量比为10.85;将雄性SD大鼠分成8290.00，6800.00，5580.00和4570.00mg/kg4组，组间剂量比为10.82，每组10只，体重180220g;禁食不禁水12h，根据预先设计的剂量，按体重灌胃给药1次，给药体积为20ml/kg，给药后观察即刻及逐日动物存活情况及一般表现，连续2周。记实动物死亡数，死亡动物立刻尸检，如发现有肉眼可见的病理改变时，做病理检查。用DAS软件，按Bliss法计算LD50 。 1.2.2 SD大鼠的长期毒性实验  将大鼠按性别和

5、体重随机分成5组，空缺对照组和A、B、C、D腰痛宁胶囊组，A组（300mg/kg）和B组（150mg/kg）每组40只大鼠，C组（75mg/kg）和D组（37.5mg/kg）每组30只大鼠，雌雄各半，给药体积为l ml/100g体重，各组均灌胃给药，每周灌胃6d，对照组灌胃等体积蒸馏水，连续给药180d，给药前及给药期间每周称动物体重1次，并按均匀体重调整给药剂量。实验期间天天观察大鼠一般状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况。每周称体重、摄食量1次，了解对动物体重和进食的影响。给药90d，于末次给药后24h，空缺对照组、A组和B组各抽取大鼠10只（雌、雄各5只）、给药180d，于末次给药后24h

6、空缺对照组和各给药组各抽取14只大鼠（雌、雄各7只）、停药后30d各组抽取6只大鼠（雌、雄各3只），用乌拉坦麻醉，从腹主动脉取血，检查血液学和血液生化学指标。血液学检查项目为:血色素（Hb）、血小板（PLT）、红细胞计数（RBC）、网织红细胞计数、白细胞计数（WBC）、白细胞分类（DC）、凝血时间。血液生化学检查项目为:天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（T-BIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（T-CHO）。取血后，将各组动物正法，立刻剖取动物脑、心、肝、脾、肺、肾、胸

7、腺、甲状腺、肾上腺、子宫卵巢、睾丸、前列腺称重，根据体重计算器官重量系数。并取心、肝、肾、脾、肺、脑、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、前列腺等脏器进行肉眼观察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作组织切片，H-E染色，光镜下检查组织病理学变化。  2 实验结果 2.1 大鼠的急性毒性  SD大鼠口服腰痛宁胶囊后几分钟内泛起激惹现象，随后呼吸急促，流涎，全身抽搐，四肢强直，惊厥，雌性大鼠在灌胃后5145min之间死亡，均匀死亡时间为（38.28±43.47）min，LD50 为803.85mg/kg，95%置信限为726.05889.99mg/kg。雄性大鼠

8、在灌胃后5135min内死亡，均匀死亡时间为（52.45±37.36）min，LD50 为6158.95mg/kg，95%置信限为5669.256690.94mg/kg。死亡大鼠立刻尸检，未发现肉眼可见显著病理改变，结果见表1。表1 雌性SD大鼠经口急性毒性实验。2.2 SD大鼠的长期毒性实验 2.2.1 腰痛宁胶囊对大鼠一般情况的影响 在腰痛宁胶囊连续给药期间，给药开始3周内，各给药组大鼠泛起激惹反应，神经高度紧张，只要有小的刺激，即可产生竖立反应。3周后此现象消失。各给药组与对照组比较动物的流动、体重、摄食量、大便和毛发光泽等相似，未发现异常情况。A组给药第一周死亡3只大鼠，给药

9、全程共死亡8只大鼠（死亡率20%），B组给药第1，2周大鼠各死亡1只，全程共死亡6只（死亡率15%），C组死亡1只（死亡率3.3%），D组死亡2只（死亡率6.6%），空缺对照组死亡0只，肉眼尸检未见脏器异常。  表2 雄性SD大鼠经口急性毒性实验（略） 2.2.2 腰痛宁胶囊对大鼠体重增长的影响 实验结果见表36。表3 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略）表4 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略） 表5 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略）表6 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略） 从表2表5可见，腰痛宁胶囊4个剂量对大鼠连续给药不同时间的体重，与空缺对照组比较，其差异无统计学意义（P值均>0

10、.05）。表明，腰痛宁胶囊连续用药180d，对大鼠的生长发育（体重增长）无毒性影响。 2.2.3 腰痛宁胶囊连续给药对大鼠血象的影响 实验结果见表7，表8。表7 腰痛宁胶囊连续给药3个月对大鼠血象的影响（略）表8 腰痛宁胶囊连续给药6个月对大鼠血象的影响（略） 2.2.4腰痛宁胶囊对大鼠重要器官组织病理形态的影响  腰痛宁胶囊连续给药90d、180d和恢复期各杀取大鼠10，14和6只，雌雄各半，将各给药剂量组和空缺对照组大鼠的心、肝、肾、脾、肺、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脑、前列腺在相同部位取材，用10%甲醛溶液固定。切片，HE染色，进行病理学检查。检查结论如下:

11、给药90d时，A组5只大鼠肝细胞脂肪变性;2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润。B组3只大鼠肝细胞脂肪变性，1只大鼠肾浊肿，其余各脏器未见显著异常改变。给药180d时，A组、B组和D组各脏器均正常，未见显著病理改变;C组2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性，其余脏器未见显著病理改变，恢复期时大鼠体重、摄食量、流动、外周血象、重要器官脏器系数均正常，生化指标检查，各给药组同空缺对照组比较肌酐升高，P值均<0.001。病理学检查，空缺对照组和各给药剂量组大鼠各脏器未发现病理改变。  3 讨论 3.1  本实验选用

12、SD大鼠对腰痛宁胶囊进行了急性毒性实验，测定了口服该药的LD50 值。实验发现，大鼠急性毒性表现非常显著的性别差异，雄性大鼠口服腰痛宁胶囊的LD50 比雌性高7.66倍。大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近3 ，临床使用中应留意该药急性毒性的性别差异。腰痛宁胶囊是由马钱子、土鳖虫、全蝎、川牛膝等十几味中药组成的复方制剂。其中马钱子中的有效成分之一士的宁既是腰痛宁胶囊的有效成分，也是其有毒成分4 。据文献5 报道，士的宁对大鼠的急性毒性有显著的性别差异，雄性大鼠的LD50 大于雌性大鼠。大鼠口服腰痛宁胶囊表现出的性别差异有可能是所含士的宁所致，进一步的根占有待研究。一般来讲，动物毒性的性别差异机

13、理可能是性激素影响药物代谢转化的结果。至于腰痛宁胶囊对大鼠泛起的这种现象的原因和机理也有待于进一步探讨。 3.2  SD大鼠口服腰痛宁胶囊的长期毒性试验中，以300，150，75，37.5mg/kg4个剂量（分别为临床成人用量的10，5，2.5，1.25倍），对大鼠灌胃给药，与灌胃蒸馏水的空缺对照组比较，开始给药前3周各给药组大鼠产生激惹现象，以后激惹现象逐渐消失，泛起适应耐受增强作用。长期大剂量服用腰痛宁胶囊，对动物的一般状况、体重、摄食量、流动、外周血象、主要脏器的重量系数检查无非常显著影响，对肾功能有一定的影响并且恢复较慢，但对肾脏组织结构无显著改变。建议肾功能不好的患者慎用。通过对腰痛宁胶囊180d用药过程中各项指标的观察，未发现长期毒性实验观察指标有性别差异的毒性表现，综