含动物药矿物药的中药制剂分析

1、含动物药、矿物药的中药制剂分析 1 含动物药的中药制剂分析概述概述牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n天然牛黄天然牛黄n人工牛黄人工牛黄：由贝斯素、胆酸、猪去氧胆酸、胆红素、胆固醇、无机盐等配制而成n人工培育牛黄人工培育牛黄1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n牛黄的化学成分牛黄的化学成分w胆色素：胆色素：胆红素等w胆汁酸类：胆汁酸类：胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸等w脂类脂类w蛋白质、肽、氨基酸类蛋白质、肽、氨基酸类w无机元素无机元素1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n胆汁酸的性质和化学反应胆汁酸的性质和化学反应w多以肽（甘氨胆酸、牛磺胆酸

2、）的形式存在多以肽（甘氨胆酸、牛磺胆酸）的形式存在w溶解性溶解性成盐易溶于水游离可溶于乙酸、丙酮、碱液，易 溶于乙醇、乙醚COOHHHHOHHHOOH胆酸胆酸1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n胆汁酸的性质和化学反应胆汁酸的性质和化学反应w颜色反应颜色反应nPettenkofer反应（反应（冰水冷却冰水冷却） -紫色紫色nGregory Pascoe反应（反应（65水浴水浴30 min）- 蓝色蓝色nHammarsten反应反应:20铬酸铬酸胆酸紫色胆酸紫色鹅去氧胆酸不显色鹅去氧胆酸不显色温热温热1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n胆红素的性质及

3、化学反应胆红素的性质及化学反应w溶解性：溶解性：溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳、碱液，微溶于乙醇、乙醚，成盐后易溶于水w不稳定性，易被氧化不稳定性，易被氧化NHONHCOOHCH2NHCOOHNHO胆红素胆红素1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析n胆红素的性质及化学反应胆红素的性质及化学反应w化学反应化学反应nGmelinGmelin反应（反应（浓硝酸氧化反应浓硝酸氧化反应）nVan den BerghVan den Bergh反应（反应（重氮化反应重氮化反应）蓝紫色(强酸性)红色(pH2-5)绿色(pH5.5)NHONHCOOHCH2NHCOOHNHO1 含动物药的中药制

4、剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析w定性鉴别定性鉴别n理化鉴别理化鉴别n氯仿试验：氯仿试验：硫酸/过氧化氢绿色n醋酸试验：醋酸试验：糠醛/硫酸蓝紫色n水合氯醛试验：水合氯醛试验：色素溶解，呈金黄色速效感冒速效感冒( (伤风伤风) ) 胶囊中人工牛黄鉴别胶囊中人工牛黄鉴别取本品取本品10 粒，加粒，加50ml 氯仿溶解后，加氯仿溶解后，加0.5 %活性炭（约活性炭（约0.20.4g）充分振摇后，再加硫酸与过氧化氢溶液（）充分振摇后，再加硫酸与过氧化氢溶液（30%）各）各2滴，振摇，即显绿色。滴，振摇，即显绿色。 1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析w定性鉴别定性鉴别n薄

5、层鉴别薄层鉴别胆酸、去氧胆酸胆酸、去氧胆酸胆红素胆红素提取溶媒提取溶媒三氯甲烷、乙醇、甲醇三氯甲烷、乙醇混合液吸附剂吸附剂硅胶G硅胶G展开剂展开剂异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸显色剂显色剂硫酸乙醇溶液、磷钼酸乙醇溶液1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析w含量测定含量测定n胆酸的测定胆酸的测定n酸碱滴定法酸碱滴定法总胆酸总胆酸n比色法比色法去氧胆酸去氧胆酸n薄层扫描法薄层扫描法nHPLC 使用ELSD检测器或进行柱前衍生1 含动物药的中药制剂分析牛黄及其制剂分析牛黄及其制剂分析w含量测定含量测定n胆红素的测定胆红素的测定n分光

6、光度法（重氮化反应）分光光度法（重氮化反应）nHPLC1 含动物药的中药制剂分析麝香及其制剂分析麝香及其制剂分析w化学成分及性质化学成分及性质n大环化合物大环化合物n甾族化合物甾族化合物n胆固醇、酯、蜡胆固醇、酯、蜡n蛋白质、肽、氨基酸蛋白质、肽、氨基酸n无机盐无机盐n其他成分其他成分O麝香酮麝香酮1 含动物药的中药制剂分析麝香及其制剂分析麝香及其制剂分析w定性鉴别定性鉴别n理化鉴别理化鉴别麝香粉末麝香粉末nGCGCn紫外光谱法紫外光谱法乙醇提取液220nm,270nm乙醚提取液231nm,265nm正己烷提取液220nm,265nmn薄层色谱法薄层色谱法麝香保心丸中麝香的气相色谱鉴别麝香保心

7、丸中麝香的气相色谱鉴别取本品取本品2g，研碎，加乙醚，研碎，加乙醚5ml，振摇，超声处理，振摇，超声处理5分钟，离心，分钟，离心，取上清夜，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醚制成取上清夜，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醚制成每每1ml含含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(附附录录VI E)试验，以聚乙二醇试验，以聚乙二醇(PRG)-20M和甲基硅橡胶为混合固和甲基硅橡胶为混合固定相，涂布浓度分别为定相，涂布浓度分别为1.64%和和1.32%，柱长为，柱长为2m，柱温为，柱温为180 。分别取对照品溶液与供试品溶液适量，注入气相色谱

8、。分别取对照品溶液与供试品溶液适量，注入气相色谱仪。供试品色谱中应呈现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰。仪。供试品色谱中应呈现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰。梅花点舌丸中麝香的薄层鉴别梅花点舌丸中麝香的薄层鉴别取本品取本品3g，研细，加乙醚，研细，加乙醚10ml，密塞，振摇，密塞，振摇10分钟，滤过，分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醇制成每滤液作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醇制成每1ml含含5mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。薄层条件：薄层条件： 硅胶硅胶G，石油醚，石油醚-二氯甲烷二氯甲烷(2:3)，二硝基苯肼试液，二硝基苯肼试液1 含动物药

9、的中药制剂分析麝香及其制剂分析麝香及其制剂分析w含量测定含量测定nGC固定液固定液苯基（苯基（50%）甲基硅酮）甲基硅酮n薄层色谱法薄层色谱法nHPLC1 含动物药的中药制剂分析蟾酥及其制剂分析蟾酥及其制剂分析w化学成分化学成分n蟾蜍甾二烯蟾蜍甾二烯n游离型游离型-蟾毒配基n结合型结合型蟾蜍毒素等n强心甾烯蟾毒类强心甾烯蟾毒类n吲哚碱类吲哚碱类OHOHOO蟾毒配基蟾毒配基1 含动物药的中药制剂分析蟾酥及其制剂分析蟾酥及其制剂分析w定性鉴别定性鉴别n显色反应显色反应n+ +对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛/ /硫酸硫酸蓝紫色n+ +醋酐醋酐/ /硫酸硫酸蓝紫色蓝绿色n氯仿提取液氯仿提取液+ +硫

10、酸硫酸界面鲜黄色，氯仿层淡红色n+ +酒石酸液酒石酸液/ /二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛蓝色n氯仿提取液氯仿提取液+ +白糖白糖/ /硫酸硫酸界面红色1 含动物药的中药制剂分析蟾酥及其制剂分析蟾酥及其制剂分析w定性鉴别定性鉴别n薄层色谱法薄层色谱法n其他方法：纸色谱、紫外光谱、红外光其他方法：纸色谱、紫外光谱、红外光谱等谱等提取剂提取剂吸附剂吸附剂展开剂展开剂显色剂显色剂蟾蜍毒素类蟾蜍毒素类氯仿硅胶G丙酮-氯仿-环己烷三氯化锑氯仿溶液或10%硫酸乙醇试液蟾蜍碱类蟾蜍碱类甲醇硅胶G氯仿-甲醇-氨水邻苯二醛1 含动物药的中药制剂分析蟾酥及其制剂分析蟾酥及其制剂分析w含量测定含量测定n分光光度法分光

11、光度法n差示光度法差示光度法n薄层扫描法薄层扫描法nHPLCHPLCnGCGC梅花点舌丸中三个蟾毒内酯的含量测定梅花点舌丸中三个蟾毒内酯的含量测定-HPLC-HPLC主要色谱条件：主要色谱条件：C18柱，乙腈柱，乙腈-水（水（1:1），检测波长），检测波长297nm，流速流速1ml/min对照品：脂蟾毒配基、脂蟾毒配基、蟾毒灵对照品：脂蟾毒配基、脂蟾毒配基、蟾毒灵供试品溶液：氯仿超声提取，中性氧化铝小柱纯化供试品溶液：氯仿超声提取，中性氧化铝小柱纯化1 含动物药的中药制剂分析斑蝥及其制剂分析斑蝥及其制剂分析w化学成分化学成分n斑蝥素、脂肪、树脂、甲酸、色素、斑蝥素、脂肪、树脂、甲酸、色素、挥发

12、油、甲壳质、无机元素挥发油、甲壳质、无机元素w定性鉴别定性鉴别n理化鉴别理化鉴别n纸色谱纸色谱n薄层色谱薄层色谱斑蝥素斑蝥素OOOO斑蝥素薄层色谱鉴别斑蝥素薄层色谱鉴别供试品溶液：供试品溶液：+氯仿提取，挥干，残渣用石油醚洗涤后，加氯仿氯仿提取，挥干，残渣用石油醚洗涤后，加氯仿溶解。溶解。对照品：斑蝥素对照品：斑蝥素薄层色谱条件：硅胶薄层色谱条件：硅胶G，氯仿，氯仿-丙酮（丙酮（98:2），），1%溴甲酚绿乙醇溴甲酚绿乙醇溶液溶液1 含动物药的中药制剂分析斑蝥及其制剂分析斑蝥及其制剂分析w含量测定含量测定n薄层色谱薄层色谱nGCGCn酸碱滴定酸碱滴定2 含矿物药中药制剂的分析 概述概述 矿物药

13、（天然矿物、生物化石、人类加工品、化学制品）无机类药材 分类分类n含砷、汞、铅、铜、铁、钙、硅、硫、氯以及其他矿物药2 含矿物药中药制剂的分析 矿物药的分析n样品的分解和溶解w 溶解法（湿法）-水、稀酸、浓酸、混合酸等处理w 熔融法（干法）-碱性熔剂、酸性熔剂、氧化性熔剂、还原性熔剂n 分析方法w容量分析法、重量分析法w热分析法w可见分光光度法w原子吸收光谱法（AAS）2 含矿物药中药制剂的分析 含砷矿物药及其制剂分析n含砷矿物药：雄黄、雌黄、砒石、砒霜n分解w硝酸、硫酸等酸性溶剂分解w过氧化钠、碳酸钠熔融分解w硫酸过氧化氢、硫酸硝酸钾 分解时，应防止砷化合物挥发而损失。雄黄雄黄雌黄雌黄2 含

14、矿物药中药制剂的分析 含砷矿物药及其制剂分析n定性鉴别w 硫的鉴别As2S2+2KClO3+3HNO3 2KAsO3+2H2SO4+Cl2+NO2H2SO4+BaCl2 BaSO4(白色沉淀)+2HClw砷的鉴别2As2S2+7O2 2As2O3+4SO2 As2S3+9O2 As2O3+6SO2As2O3+3H2O H3AsO3H3AsO3+H2S As2S3(黄色絮状沉淀)+H2O2 含矿物药中药制剂的分析 含砷矿物药及其制剂分析n含量测定w碘量法n直接碘量法n硫酸分解直接碘量法H3AsO3+I2 蓝色n碱熔分解直接碘量法n间接碘量法n硫酸过氧化氢分解间接碘量法w分光光度法（Ag-DDC法

15、）pH=8淀粉2 含矿物药中药制剂的分析 含砷矿物药及其制剂分析n含量测定牛黄解毒片中雄黄含量测定牛黄解毒片中雄黄含量测定取本品取本品20片，研细，称取片，研细，称取2片量片量(含雄黄约含雄黄约0.1g)，精密称定，精密称定，置锥形瓶中，加硫酸钾置锥形瓶中，加硫酸钾1g、硫酸铵、硫酸铵2g与样品混匀。加硫酸与样品混匀。加硫酸15ml，直火加热至溶液呈淡黄色，冷却，缓缓加水，直火加热至溶液呈淡黄色，冷却，缓缓加水50ml，加热微沸加热微沸35分钟，放冷，加酚酞指示液分钟，放冷，加酚酞指示液2 滴，用滴，用40氢氧氢氧化钠溶液中和至显微红色，放冷，用化钠溶液中和至显微红色，放冷，用0.25mol/

16、L硫酸溶液中硫酸溶液中和至褪色，加碳酸氢钠和至褪色，加碳酸氢钠5g，摇匀后，用碘滴定液，摇匀后，用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml,滴定至溶液显紫蓝色。滴定至溶液显紫蓝色。2 含矿物药中药制剂的分析 含汞矿物药及其制剂分析n含砷矿物药：水银、朱砂、升药、轻粉等等n分解w硝酸分解法w王水或逆王水分解法w硫酸硝酸钾法 分解时，应防止汞的挥发损失 低温加热，加回流冷凝管2 含矿物药中药制剂的分析 含汞矿物药及其制剂分析n定性鉴别w亚汞盐nNH4-/OH- 黑色nKI黄绿色 灰绿色 灰黑色w汞盐nOH- HgO(黄色)nKI 猩红色 溶于过

17、量KI OH- 红棕色nCu2 含矿物药中药制剂的分析 含汞矿物药及其制剂分析n含量测定w硫氰酸盐法Hg2+2SCN- Hg(SCN)2(白色)Fe3+SCN- FeSCN2+ (淡棕红色) 测定温度不宜超过25 加高锰酸钾氧化，以消除NO、HNO2的影响HNO3万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定取重量差异项下的本品，剪碎，取取重量差异项下的本品，剪碎，取5g，精密称定，置，精密称定，置 250ml凯氏烧瓶中，加硫酸凯氏烧瓶中，加硫酸30ml与硝酸钾与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，加热俟溶液至近无色，放冷，转入放冷，转入250ml 锥形瓶中，用水锥形瓶中，用水50m

18、l分次洗涤烧瓶，洗液分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加并入溶液中，加 1高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液液2ml，用硫氰酸铵滴定液，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml 的硫氰的硫氰酸铵滴定液酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于相当于11.63mg的硫化汞（的硫化汞（HgS）。）。 本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞(HgS)计，小丸应为计，小丸应为69 90mg；大丸应为；大丸应为138 1

19、80mg。 2 含矿物药中药制剂的分析 含汞矿物药及其制剂分析n含量测定w分光光度法Hg2+双硫腙 橙色配合物CCl4萃取后，492nm比色w原子吸收分光光度法（AAS）2 含矿物药中药制剂的分析双硫腙法测定中药制剂中可溶性汞含量双硫腙法测定中药制剂中可溶性汞含量双硫腙四氯化碳贮备液（双硫腙四氯化碳贮备液（双硫腙用氨水提纯）双硫腙试液双硫腙试液 T492nm=60%汞标准贮备液汞标准贮备液（100ug/ml） 、汞标准溶液、汞标准溶液（1.0ug/ml）样品的消化样品的消化 取1-3g样品，粉碎后，直接置于200ml量瓶中，加入8ml HNO3，放置过夜，在温度为220-270的砂浴上预分解1

20、0分钟，取出，放置1分钟，加入H2SO4 25ml和HClO4 2ml，再置砂浴上继续分解20分钟，取下，趁热加入5%KMnO4溶液1ml，紫色若维持1分钟以上，则表示到达消化终点。若紫色立即褪去，说明样品尚未分解完全，则再加HClO4 2ml，继续分解20分钟，重复这一操作，直至分解完全为止，冷却后加入10%盐酸羟胺溶液数滴脱色，用蒸馏水定容至200ml后待测。同样操作做一空白试验。标准曲线制备标准曲线制备 取分液漏斗6个，各加入0.5mol/l硫酸100ml，精密吸取汞标准溶液0、1、2、3、4、5ml，分别加入分液漏斗中，再各加入20%盐酸羟胺溶液2.5ml，36%醋酸5ml，4%EDT

21、A 2.5ml，再添加0.5mol/l硫酸使体积为140ml，准确加入双硫腙试液10ml，用力振摇约2分钟，静置分层，过滤有机相至2cm比色皿中，在492nm波长处，以零号管为参比，测定吸光度，并绘制标准曲线。 样品分析样品分析 取消化液30ml于分液漏斗中，加20%盐酸羟胺溶液2 含矿物药中药制剂的分析中成药散剂内朱砂的含汞量测定中成药散剂内朱砂的含汞量测定原子吸收法原子吸收法原子吸收分光光度计的工作条件原子吸收分光光度计的工作条件 波长：波长：2537埃；汞空心阴极灯，汞标准贮备液汞标准贮备液（1mg/ml）、汞标准液汞标准液（4ug/ml）标准曲线制备标准曲线制备 精密吸精密吸取汞标准溶

22、液0、1、2、3、4、5ml，分别置100ml量瓶中，用0.5mol/l硫酸稀释至刻度，摇匀，依次将上述稀释液置于汞还原汽化装置的反应瓶内，加入还原剂5.0ml，迅速将硅橡胶塞塞紧并剧烈搅拌，使反应60sec，压脚踏开关并同时将二通活塞转向测量方式进气，经30sec后松开脚踏开关，记录峰高吸收谱图后，将二通活塞转向清洗，倒掉反应瓶内的废液即可。 同时需做空白试验。 样品处理样品处理 取样品适量（约相当于含汞10mg），置三角烧瓶中，加入消化剂（硝酸-硫酸=1:1）10ml，直火加热至溶解后，放冷，加5%高锰酸钾溶液至粉红色，再滴加10%盐酸羟胺溶液至红色消失，转移至100ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀。样品分析样品分析国外开具的“问题中药黑名单” 来源：中国经营报 美国： 禁止出售的中成药有：附子理中丸、安宫牛黄丸、安神补脑丸、抗癌灵、解 毒消炎丸、白内障滴眼剂、北京紫雪、安宫降压丸、牛黄清心丸、定心丸、内障 明眼丸、中国救心丹、中国尿通、追风透骨丸、朱砂粉、朱砂安神丸、复方五味 子片、复方附子丸、复方丹参片、复方抗痿灵、大活络丸、糖尿灵、佩夫人止咳 露、毛冬青胶囊、六神丸、利肝片、毛冬青、降糖灵、近视眼药水、连翘败毒片、 风痛宁片、五塔标行军散、冠心苏合、海藻丸、健脑片、风湿片、猴枣散、黄连 素片、回春丹、降压平片、降压片