氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法ppt课件

1、氨基酸的分别鉴定氨基酸的分别鉴定滤纸层析法滤纸层析法 经过氨基酸的分别：1.学习纸层析法的根本原理；2.掌握滤纸层析的操作方法。目目 的的一.滤纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水被滤纸纤维结合作为固定相，以有机溶剂为流动相，样品点在滤纸上进展展层，氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，故样品随流动相挪动的速率不同，从而被分开，构成距原点间隔不等的层析点。原原 理理原理原理二二.氨基酸被分别后在纸层析图谱上的位氨基酸被分别后在纸层析图谱上的位置是用置是用Rf值值(比移比移)来表示的来表示的 Rf = 原点到层析中心的间隔原点到层析中心的间隔 / 原点原点到溶剂前沿的间隔到溶剂前

2、沿的间隔 (在一定的条件下某种物质的在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。值是常数。Rf值的大小与物质的构造、性质、溶值的大小与物质的构造、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等要素有关。本实验利用纸层析法分等要素有关。本实验利用纸层析法分别氨基酸。别氨基酸。)显色原理显色原理 无色物质的纸层析图谱可用光谱法无色物质的纸层析图谱可用光谱法紫外光照射或显色法鉴定。氨基紫外光照射或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。剂。器器 材材1、玻璃钟罩、玻璃钟罩

3、 2、毛细管、毛细管 3、喷雾器、喷雾器 4、培育皿、培育皿 5、层析滤纸、层析滤纸(新华一号新华一号)6、烘箱、烘箱 7、铅笔直尺、铅笔直尺8、裁纸刀、裁纸刀 9、一次性手套、一次性手套 10、分液漏斗、分液漏斗 11、吹风机、吹风机12、移液管等常规仪器、移液管等常规仪器1、物质的量为0.008摩尔/升的赖氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸溶液及它们的混合液(各组份物质的量均为0.008摩尔/升)。2、扩展剂 正丁醇：甲酸：水=70:17:8体积比3、显色剂 2.5茚三酮丙酮溶液。试试 剂剂1、预备滤纸 取层析滤纸(15*17cm，距下端2 cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间

4、隔相等间隔作一记号，一共做五个记号点样用。2、点样 用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号上，自然风干或冷风后再点一次样，每点在纸上分散的直径，最大不超越5 mm。操操 作作单向上行层析法单向上行层析法操作操作3、展层、展层 用订书机将滤纸订成筒状，纸的两边不能用订书机将滤纸订成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸竖直立于培育皿中有铅笔线的一接触。将滤纸竖直立于培育皿中有铅笔线的一端朝下，用玻璃钟罩盖住，用层析柱与漏斗从端朝下，用玻璃钟罩盖住，用层析柱与漏斗从钟罩上口处加展开剂至培育皿高度钟罩上口处加展开剂至培育皿高度2/3处，盖上上处，盖上上口盖子，待溶剂前沿上升至距顶端约口盖子，待溶剂前沿上升至距顶端约1cm时取出时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，自然枯燥或用滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，自然枯燥或用吹风机冷风吹干。吹风机冷风吹干。4、显色、显色 用喷雾器均匀喷上用喷雾器均匀喷上2.5茚三酮丙酮溶液，茚三酮丙酮溶液，然后置烘箱中烘烤然后置烘箱中烘烤5分钟分钟(65)即可显出各层析斑即可显出各层析斑点。点。5、计算各种氨基酸的、计算各种氨基酸的Rf值。值。1、整个实验为什么要戴手套进展，且滤纸要妥善保管？2、为防止实验结果出现“拖尾景象，实验操作中应留意哪些环节？3、为