食药用真菌第4章食用菌的菌种制作与保藏

1、食药用真菌第4章食用菌的菌种制作与保藏u 菌种类型：菌种类型： 按培养基的形态分：（按培养基的形态分：（1 1）固体菌种）固体菌种 （2 2）液体菌种）液体菌种 按菌种的来源、繁殖代数分：按菌种的来源、繁殖代数分： 母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种） 1. 1. 母种母种 母种系指由孢子、子实体组织、菇（耳）木或基质菌丝分离纯化，母种系指由孢子、子实体组织、菇（耳）木或基质菌丝分离纯化，并在试管培养基上繁殖的菌丝体、芽孢及其培养基质。母种经出菇试并在试管培养基上繁殖的菌丝体、芽孢及其培养基质。母种经出菇试验后可用于生产称为一级种。验

2、后可用于生产称为一级种。2. 2. 原种原种 原种系指由母种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体。亦原种系指由母种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体。亦称二级种。称二级种。 3. 3. 栽培种栽培种 栽培种系指由原种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体。栽培种系指由原种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体。亦称三级种。通常以菌种瓶或菌种袋为容器。亦称三级种。通常以菌种瓶或菌种袋为容器。u菌种生产流程菌种生产流程 菌种分离（菌种分离（孢子、子实体、菇木等）孢子、子实体、菇木等）培养基制备培养基制备高压灭菌高压灭菌接种接种母种母种出菇试验出菇试验一级种一级种 培养基制备培养基制备

3、高压灭菌高压灭菌 接种接种 （常压灭菌）原种（二级种）（常压灭菌）原种（二级种） 培养基制备培养基制备高压灭菌高压灭菌 接种接种 （常压灭菌）（常压灭菌） 栽培种（三级种）栽培种（三级种） 大规模生产或工厂化生产大规模生产或工厂化生产 一）孢子分离法一）孢子分离法 1 1）种菇的选择标准：菌株性状优良、发育健壮）种菇的选择标准：菌株性状优良、发育健壮、无病虫害、熟度适当。、无病虫害、熟度适当。 2 2）种菇的表面消毒：草菇、蘑菇可用）种菇的表面消毒：草菇、蘑菇可用0.1%0.1%升汞升汞溶液浸泡溶液浸泡2-min2-min进行表面消毒，香菇、平菇用进行表面消毒，香菇、平菇用75%75%酒精酒精

4、进行表面消毒。进行表面消毒。二、菌种分离方法（1）多孢分离法整菇播种法（孢子收集器）钩悬法贴附法褶上抹取孢子法孢子印分离法空中孢子捕捉法3 3）方法）方法: :孢子PDA孢子分离图（2）单孢分离法二）组织分离法子实体分离：选择优秀的子实体75%酒精表面消毒掰开菇体菌柄和菌盖处切取组织接入斜面。1. 菌核分离法：同子实体分离。菌核有猪苓、茯苓、雷丸等。连续稀释法3. 菌索分离法：蜜环菌菌索75%酒精表面消毒去掉黑色外皮层（菌鞘）切下白色菌髓接入斜面。三）基内菌丝分离法菇木（耳木）分离法：选择菇木清洗表面锯下一段干燥中间挖取一小块（无菌操作） 接入斜面（见图）。代料基质分离法：同菇木分离。二）组织

5、分离法（续）菇木、耳木分离法 四）土中菌丝分离法 采集菇体下与菇根相连的菌丝束采集菇体下与菇根相连的菌丝束无菌水冲洗干无菌水冲洗干净净无菌纱布吸干无菌纱布吸干切下菌丝束切下菌丝束 接入斜面（接入斜面（培养基含有抗生素）培养基含有抗生素）出菇鉴定。出菇鉴定。 本方法适用于野外分离野生菇类。宏观检查：用肉眼或放大镜检查菌丝体的颜色、粗细、宏观检查：用肉眼或放大镜检查菌丝体的颜色、粗细、生长速度和致密度，有无爬壁现象、菌丝老化是否分泌生长速度和致密度，有无爬壁现象、菌丝老化是否分泌色素、菌丝在试管斜面上是否能形成原基。色素、菌丝在试管斜面上是否能形成原基。微观检查：利用显微镜对菌丝形态特征进行观察，

6、如菌微观检查：利用显微镜对菌丝形态特征进行观察，如菌丝粗细是否均匀、有无锁壮联合、菌丝的分支情况。丝粗细是否均匀、有无锁壮联合、菌丝的分支情况。四、菌种的检验 四、菌种保藏方法及复壮技术一）菌种保藏方法原理： 菌种保藏的基本手段是采用低温、冷冻、干燥、减少供氧量等方法，终止菌丝生长，降低菌丝的代谢强度，使菌丝处于休眠状态。主要保存方法有： 方法：菌丝长满斜面（方法：菌丝长满斜面（PDAPDA）硫酸纸包扎试管口存于）硫酸纸包扎试管口存于44冰箱冰箱保存时间：保存时间：180-360180-360天，适合于短期保存。天，适合于短期保存。缺点：缺点：1 1）培养基容易失水；）培养基容易失水；2 2）

7、棉塞易长霉菌；）棉塞易长霉菌； 3 3）转接次数多，菌株易产生变异。）转接次数多，菌株易产生变异。解决方法：解决方法：1 1）增加琼脂的含量及加大培养基的用量；）增加琼脂的含量及加大培养基的用量； 2 2）以无菌胶塞代替棉塞或将棉塞齐管口处剪平之后）以无菌胶塞代替棉塞或将棉塞齐管口处剪平之后再用石蜡封口。再用石蜡封口。1. 斜面低温保藏法2. 木屑保藏法方法：木屑培养基（方法：木屑培养基（78%78%木屑、木屑、20%20%麦麸、麦麸、1%1%糖、糖、1%1%石膏。）石膏。）装入试管的装入试管的2/3 2/3 高压灭菌高压灭菌接种接种菌丝长满菌丝长满 存于存于 44冰箱。冰箱。保存时间：保存时

8、间：1-21-2年。年。适合于木腐菌的保藏。适合于木腐菌的保藏。3. 液体石蜡保藏法 方法：无水液体石蜡（化学纯）方法：无水液体石蜡（化学纯）高压灭菌高压灭菌冷却冷却注入斜面至高出斜面注入斜面至高出斜面1cm1cm处处置于置于4-154-15保存。保存。 保存时间：保存时间：3-53-5年。转接时无须倒掉石蜡，直接挖出一年。转接时无须倒掉石蜡，直接挖出一块，开始时菌丝生长缓满，转接块，开始时菌丝生长缓满，转接1-21-2次后就能恢复正常。次后就能恢复正常。 原理：石蜡能抑制生物代谢、推迟细胞衰老、隔绝氧原理：石蜡能抑制生物代谢、推迟细胞衰老、隔绝氧气交流、防止培养基水分蒸发。气交流、防止培养基水分蒸发。4. 菌丝球保藏法方法：液体培养基方法：液体培养基接种接种摇菌摇菌菌丝球形成菌丝球形成菌球接菌球接入无菌生理盐水试管中入无菌生理盐水试管中塞紧胶塞塞紧胶塞常温下保存。常温下保存。保存期：保存期：1 1年以上。年以上