葛根素在肠缺血再灌注肝损伤中的抗氧化作用

1、葛根素在肠缺血再灌注肝损伤中的抗氧化作用摘要目的:观察葛根素注射液在小鼠肠缺血再灌注肝损伤中的抗氧化作用。方法：制作小鼠肠缺血再灌注肝损伤模型；小鼠缺血时间20 min，再灌流1 h后制备血清，取肝脏组织观察病理学改变，余制成肝匀浆，测定SOD活性和MDA含量。结果：不同剂量的葛根素注射液可减轻小鼠肠缺血再灌注肝损伤的病理学损害，并使肝脏SOD活性和MDA含量几乎恢复正常。结论：葛根素注射液对小鼠肠缺血再灌注肝损伤具有保护作用，其肝保护作用机理与其抗氧化作用有关。关键词葛根素注射液;肠缺血再灌注;肝损伤;抗氧化作用中号R285.5文献标识码:A文章编号:1006-8783(2000)03-02

2、08-03 缺血再灌注损伤产生的机理目前认为主要与氧自由基大量生成，导致组织器官脂质过氧化有关1。肠缺血再灌注可引起肝损伤，甚至可引发多系统器官功能不全综合征2。葛根素注射液(puerarin injection)即4,7-二羟-8-D葡萄糖异黄酮，为血管扩张药，具有抗氧化和抗自由基作用，有研究表明，对缺血再灌注损伤心、脑损伤有保护作用36。本文在小鼠肠系膜上动脉缺血再灌注所致肝损伤模型上，观察了葛根素注射液的肝保护作用，为扩展其临床新用途提供实验依据。1材料和方法1.1药品及试剂葛根素注射液为广东燕塘生物化学药业有限公司产品，批号：980918。硫代巴比妥酸(thiobarbital,TBA

3、)为美国Sigma产品。1.2动物及处理雄性昆明种小鼠，体重1822 g，由湖北省防疫站动物中心提供。小鼠40只，分4组：假手术对照组；模型对照组；小剂量葛根素组，100 mg/kg；大剂量葛根素组：200 mg/kg，给药1次/d，假手术组和模型对照组则给予等容量生理盐水，连续7 d。末日经腹正中线切开，分离肠系膜上动脉，肠缺血再灌注方法参考文献7。除假手术组外，各组均用无损伤动脉夹夹闭其根部导致缺血，缺血时间为20 min。再灌流时间为1 h。断头处死动物，剖腹摘取肝脏，10%甲醛固定肝右叶；余肝组织制成5 mL/g肝匀浆。1.3观察指标及测定方法连苯三酚法测定超氧化物歧化酶(supero

4、xide dismutase,SOD)活性。TBA分光光度法测定肝脏丙二醛(maldialdehyde，MDA)含量。酚试剂法测定肝蛋白含量。组织学检查，即取甲醛固定的组织，石蜡包埋，切片后HE染色,光镜下观察。判断肝损伤程度按坏死灶数目分级。分级标准为：0级，无坏死灶；级，坏死灶为15个；级，坏死灶为610个；级，坏死灶多于10个。2实验结果2.1对肝脏组织学改变的影响肝损伤病理学分级见方法学部分。病理检查结果表明，肠缺血再灌注肝损伤模型组小鼠的肝脏坏死灶数目明显多于假手术组(P0.01)。葛根素注射液100和200 mg/kg对缺血再灌注肝损伤小鼠的病理学改变均有明显的减轻作用，尤其大剂量

5、组作用显著，各例几乎完全恢复正常。见表1。表1葛根素注射液对缺血再灌注肝损伤小鼠肝脏病理学改变的影响(n=10)(例数)分组0假手术对照组10000模型对照组0028葛根素组(100 mg/kg)8002葛根素组(200 mg/kg)10000光镜下可见假手术组肝小叶正常，肝细胞索清晰，围绕中央静脉呈放射状排列。肝细胞呈多边形，胞质嗜酸性，为细粒状，胞核圆而大，核膜清晰，可见12个核仁(1)。肠缺血再灌注肝损伤模型组肝小叶正常结构存在，肝细胞水肿，胞浆疏松化，部分肝细胞核固缩、变小、浓染。见多处小灶性坏死，坏死区肝细胞消失呈空网状，见细胞碎片及中性粒细胞浸润。枯否氏细胞轻度增生，门管区少许炎性

6、细胞浸润(2、3)。葛根素保护组肝小叶正常结构存在，肝细胞索整齐，肝细胞未见明显水肿(4)。2.2对肝脏SOD活性和MDA含量的影响肠缺血再灌注降低肝脏SOD活性，增加MDA含量，该作用随缺血时间递增(P0.05，P0.01)。葛根素注射液100和200 mg/kg对肠缺血再灌注肝损伤小鼠肝脏SOD活性和MDA含量的改变有明显的改善作用，可使SOD活性和MDA含量几乎完全恢复至正常。见表2。 表2葛根素注射液对缺血再灌注肝损伤小鼠肝脏SOD和MDA的影响(n=10，s)分 组SOD/(u.mg-1)MDA/(mol.g-1)假手术对照组4.800.8910.101.42模型组(10 min)3

7、.960.53*15.925.50*模型组(20 min)2.860.82*19.959.23*葛根素组100 mg/kg4.440.83#11.414.36#200 mg/kg6.113.80#8.853.83#t检验：与假手术组比：*P0.05，*P0.01；与肝损伤模型组比,#P0.05，#P0.01 3讨论葛根素注射液为血管扩张药，对冠状动脉和脑血管有扩张作用，能降低心肌耗氧量，并有活血化淤、改善微循环之功效。临床上用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞和急性脑梗塞。药效学研究表明，葛根素注射液在0.152.5 g/L之间均可清除羟自由基(*OH)，2.5 g/L时清除率达100%，并呈量效

8、关系3。该药对动物脑、心肌缺血再灌注损伤具保护作用4,5。体外实验表明，葛根异黄酮0.011.0 g/L可明显抑制小鼠肝、肾组织及大白兔脑组织匀浆在振荡温育条件下引起的脂质过氧化物(LPO)含量升高，并呈剂量效应关系。在葛根异黄酮1.0 g/L时，小鼠肝、肾及兔脑组织匀浆中LPO生成抑制率分别达79.7%，84.7%和86.6%。体内实验也表明，兔经液氮冷冻致脑损伤水肿后，其血清及脑组织中的SOD活性明显降低，LPO含量明显升高。葛根异黄酮不同剂量静脉注射能明显降低脑水肿动物血、脑组织中LPO含量，显著提高动物血、脑组织中SOD活性6。研究还表明，葛根总黄酮和葛根素对大鼠急性和反复性脑缺血均有

9、保护作用4，8。本研究中，葛根素注射液能有效地改善小鼠肠系膜上动脉缺血再灌注所致的肝脏SOD活性和MDA含量，提示葛根素注射液的抗氧化作用是其肝保护机理。这与葛根素化学结构上含有多个羟基，由此具有较强的抗氧自由基和抗氧化作用有关。此外，也可能与其血管扩张和活血化淤作用有关9，这有待深入研究。(本文附见封三)1假手术组:肝小叶结构正常，肝细胞索整齐，肝窦未见扩张(HE200)2肠缺血再灌注模型组：部分肝细胞肿胀，胞浆疏松化(细胞水肿)，少数肝细胞核固缩(HE200)3肠缺血再灌注模型组：肝细胞增生，核大，见核分裂(HE200)4葛根素注射液保护组：肝细胞排列整齐，未见细胞水肿及坏死(HE400)

10、张转（湖北医科大学第二附属医院药剂科，湖北 武汉430071）汪晖（湖北医科大学药理教研室）王志勇（湖北医科大学第二附属医院药剂科，湖北 武汉430071）乐江（湖北医科大学药理教研室）参考文献1 McCord JM.Oxygen-derived free radicals in postischemic tissue injuryJ. N Engl J Med,1985,312:159.2 Antosson JB,Fiddish-Green RG.The role of the gut in shock and multiple system organ failureJ.Eur J Surg, 1991,157:3.3 邝枣园，吴伟，黄衍寿.葛根素、丹参、川芎嗪注射液对羟自由基水平的影响J.中药新药与临床药理,1998,9(2):92.4 王磊一,赵爱平,王福文，等.葛根素对大鼠急性脑缺血的保护作用J.中国中药杂志,1997,22(12):4752.5 李清亚,董宏彬,赵进沛，等.硒锌与葛根山楂联用对心肌缺血损伤保护作用的实验研究J.微量元素与健康研究,1998,15(3):1.6 张光成,方思鸣.葛根异黄酮的抗氧化作用J.中药材,1997,20(7):358.7 孙春雷,朱锦祥,张锡