黄芪中总黄酮的含量测定方法_图文

1、黄芩中总黄酮的含量测定 To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae班级 08级 2班专业 药学姓名 崔立靖同组人 陆晓娅 关雪 李娟 张栋材摘要 目的:黄芩中总黄酮含量的测定。方法:采用紫外分光光度法测定黄芩 中总黄酮的含量。结果:黄芩中总黄酮含量是 0.034mg/ml。Abstract Objective :To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae.Methods :Ultraviolet spectropho

2、tometry was used to To determine the content of total flavonoids content.Results :Total flavonoids content of Radix Scutellariae reached 0.034mg/ml。关键词 黄芩;总黄酮;紫外分光光度法Key WorldRadix Scutellariae; Total flavonoids ; uv-spectrophotometry目录摘要 . 1 Abstract . 1关键词 . 1 Key World . 1目录 . 21 绪论 . . 32 黄芩中总黄酮

3、含量测 . . 6 2.1仪器与试剂 . . 6 2.1.1实验仪器 . . 6 2.1.2实验药品 . . 6 2.2试验方法 . . 6 2.2.1总黄酮成分提取 . . 6 2.2.2定量实验总黄酮的含量测定 . . 6 2.2.2.1线性关系考察 . . 6 2.2.2.2提取物含量的测定 . . 7 2.3方法学检验 . . 7 2.3.1精密度实验 . . 7 2.3.2稳定性考察 . . 7 2.4黄芩根及粉末的显微图像 . . 7 2.4.1黄芩根的显微图像 . . 72.4.2黄芩粉末的纤维图像 . . 73 参考文献 . . 81 绪论【英文名】 Radix Scutell

4、ariae【别名】 山茶根、黄芩茶、土金茶根【来源】 本品为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。春、秋二季采挖,除去须根及泥沙,晒后撞去粗皮,晒干。产 于河北、辽宁、陕西、山东、内蒙古、黑龙江等地。【植物特征】 多年生草本,高 3070厘米。主根粗壮,略呈圆锥形, 棕褐色。茎四棱形,基部多分枝。单叶对生;具短柄;叶片披针形,全线。 总状花序项生,花偏生于花序一边;花唇形,蓝紫色。小坚果近球形,黑 褐色,包围于宿萼中。花期 710月,果期 810月。【制法】黄芩片 除去杂质,置沸水中煮 10分钟,取出,闷透,切薄片,干燥; 或蒸半小时,取出,切

5、薄片,干燥(注意避免曝晒。本品为类圆形或不 规则形薄片,外表皮黄棕色至棕褐色,切面黄棕色或黄绿色,具放射状纹 理。酒黄芩 取黄芩片,照酒炙法炒干。本品为类圆形或不规则形薄片,外 表皮棕褐色,切面黄棕色,呈放射状纹理,略带焦斑,中心部分有的呈棕 色。【性状】 本品呈圆锥形,扭曲,长 825cm ,直径 13cm 。表面棕黄 色或深黄色,有稀疏的疣状细根痕,上部较粗糙,有扭曲的纵皱或不规则 的网纹,下部有顺纹和细皱。质硬而脆,易折断,断面黄色,中间红棕色; 老根中心枯朽状或中空,呈暗棕色或棕黑色。气微,味苦。【显微特征】 横切面 木栓层为数层至 20余层扁平细胞组成,其中散 在嗜细胞。木栓组织外缘

6、多破裂。皮层狭窄,散在纤维及石细胞。韧皮部 较宽广,有多数纤维与石细胞,石细胞多分布于外侧,纤维单个散在或数 个成群,多分布于内侧;形成层环状明显;木质部导管单个散在或数个成 群,周围有木纤维束;木射线较宽。老根中央有一至多个同心状的木栓组 织环。薄壁细胞中还淀粉粒。【粉末特征】 粉末深黄色。韧皮纤维微黄色,梭形,两端尖或斜尖, 长 51200(271 um, 直径 933um,壁木化,孔沟明显。石细胞淡黄色, 类方形、类圆形、椭圆形或纺锤形,直径 2448um,长约 85(160 um , 壁厚至 24um 。网纹及具缘纹孔导管多见。木纤维细长,壁稍厚,具斜 纹孔或具缘纹孔。另可见淀粉粒、木

7、栓细胞。【 黄芩根横切】 【化学成分】 含多种黄酮类化合物 , 主要为黄芩甙(baicalin , 黄 芩素(baicalein , 汉黄芩甙(wogonoside , 汉黄芩素(wogonin , 7-甲氧基黄芩素 , 7-甲氧基去甲基汉黄芩素 , 黄芩黄酮, 黄芩黄酮。 【鉴别】 取粉末 1g ,加甲醇 20ml ,超声处理 20分钟,滤过,滤液 蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶解,作为供试品溶液。另取黄芩对照药材 1g , 同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的 溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录 B试验,吸取上述三种 溶液各 5l ,分别点于同

8、一以含 4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂 的硅胶 G 薄层板上,以醋酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水(5:3:1:1为展开剂,预 平衡 30分钟,展开,取出,晾干,喷以 1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱 中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;在与对照品色 谱相应的位置上,显一相同的暗绿色斑点。【含量测定】照高效液相色谱法(附录 D测定。色谱条件与系统适用性试验 用 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸(47:53:0。 2 为流动 相;检测波长为 280nm 。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 2500。对照品溶液的制备 精密称取在 60减压干燥 4 小时的黄芩苷对 照品

9、适量,加甲醇制成每 1ml 含 60g 的溶液,即得。供试品溶液的制备 取本品中粉约 0。 3g同时另取本品粉末测定水 分(附录 H第一法 ,精密称定,加 70%乙醇 40ml ,加热回流 3 小时, 放冷,滤过,滤液置 100ml 量瓶中,用少量 70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中，加 70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取 1ml，置 10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 l，注入液 相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含黄芩苷（C21H18O11） 不得少于 9。0% 。 【理化鉴别】 1. 取粉末 1 g, 加乙

10、醇 10 ml, 温浸 15 分钟, 滤过, 取滤液 1 ml, 加醋酸铅试液 23 滴, 生成桔黄色沉淀；另取滤液 1 ml, 加镁粉少量与盐 酸 34 滴, 显红色 2. 薄层层析 样 品 液:取粉末 1 g, 加乙醚 40 ml 于索氏提取器中回流至无色, 浓缩至 25 ml, 供试对照品液:取黄芩素和汉黄芩素配成溶液作为对照 溶液 展 开:0.5 N 草酸硅胶 G 板（硅胶 G+0.5 N 草酸溶液铺板）, 以氯 仿-甲醇（101）展开 17 cm 显 色:于 365 nm 紫外灯下观察, 供试品在与标准品的相同位置有 相同的暗灰棕色荧光斑点成分分析研究进展:略 【药理作用】 1. 抗

11、菌、抗病毒、抗真菌:煎剂对多种球菌、杆菌、耐药的金黄 色葡萄球菌、流感病毒、皮肤真菌有抑制作用 2. 解热:煎剂及黄芩甙对实验性发热的家兔有解热作用 3. 降压、利尿作用:黄芩甙给麻醉狗注射, 有明显的降压和利尿 作用 4. 抗炎、抗过敏:黄芩甙与黄芩素动物试验能抑制过敏性炎症渗出, 降低毛细血管通透性, 有抗组织胺与抗乙酰胆碱作用。 【类药比较】 1） 枯芩子芩 黄芩分枯芩与子芩。 枯芩为生长年久的宿根，中空而枯，体轻主浮，善清上焦肺火， 主治肺热咳嗽痰黄。 子芩为生长年少的子根，体实而坚，质重主降，善泻大肠湿热， 主治湿热泻痢腹痛。 2） 黄芩续断 黄芩与续断均有安胎之功，用治胎动不安。

12、5 黄芩药性寒凉，清热泻火，安胎，用治胎热所致的胎动不安。 续断药性微温，补肝肾，安胎，用治肝肾不足所致的胎动不安。 2 2.1 仪器与试剂 2.1.1 实验仪器 黄芩中总黄酮含量测 超声波清洗器、 紫外可见分光光度计、 分析天平、 100ml 容量瓶、 25ml 容量瓶、5ml 移液管、1ml 移液管、6 支试管、1 个试管架、洗耳球 2.1.2 实验药品 70%乙醇、5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠、芦丁标准品、黄芩 2.2 试验方法 2.2.1 总黄酮成分提取 取黄芩，粉碎。精密称取黄芩粉末约 1 g，放置 100 ml 容量瓶中，加 90ml 70%乙醇，超声波提取约 50mi

13、n，用 70%乙醇稀释至刻度，得样品液。 2.2.2 定量实验总黄酮的含量测定 2.2.2.1 线性关系考察 分别精密吸取芦丁对照液（0.1 mg/ml）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、 5.00 ml 于试管中， 70%乙醇稀释至 5ml， 用 再分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.3 ml，摇匀，静置 6 min；再加 10%硝酸铝溶液 0.3 ml，摇匀，静置 6 min； 再加 4%氢氧化钠溶液 4.00 ml，最后加 70%乙醇 0.4ml，摇匀，静置 12 min， 以试剂作空白，于 510 nm 处测吸光度。以吸光度值 A 为纵坐标，芦丁浓度 C（mg/ml）为横坐

14、标，进行线性回归，得回归方程 A=0.0832C+0.0004,r=0.9999。标准曲线见下图 对照品标准曲线 0.06 C(mg/ml 0.04 0.02 0 0 0.2 0.4 0.6 y = 0.0832x + 0.0004 A 0.8 6 2.2.2.2 提取物含量的测定 精密吸取样品液 2.00 ml 于试管中，按标准曲线的制备操作测定吸光 度，根据回归方程计算样品中总黄酮的含量。 2.3 方法学检验 2.3.1 精密度实验 取黄芩样品液，重复测定吸光度 6 次，计算其相对标准偏差，结果 RSD 为 0.19%，本实验精密度良好。 2.3.2 稳定性考察 精密吸取黄芩对照品溶液，与 0，10，20，30，40，50，60min 测定吸 光度值，RSD 为 0.92%（n=6），表明对照品溶液在 60min 内基本稳定