山楂果中黄酮化合物的光谱分析及抗氧化性能测定

1、山楂果中黄酮化合物的光谱分析及抗氧化性能测定回瑞华，侯冬岩，刘晓媛，唐蕊，李学成（鞍山师范学院化学系，辽宁鞍山）摘要：采用超声波法从山楂果中提取黄酮类化合物，并建立了山楂果中黄酮化合物的光谱分析方法。本法的回收率为，变异系数小于。用流动注射化学发光法测定了山楂果的抗氧化性能，实验结果表明：山楂果具有较强的抗氧化性能，并且抗氧化性能随着浓度的增加而增加。关键词：山楂果；黄酮；光谱分析；流动注射化学发光；抗氧化性，（，）：收稿日期：基金项目：辽宁省教育厅科学技术基金资助课题（）作者简介：回瑞华（），女，教授，主要从事有机分析及天然产物化学教学与研究。和精胺的回收率大于，但小于，仍在允许的误差范围内

2、。黄酒中生物胺的种类及含量黄酒中生物胺的色谱图及种生物胺含量见图和表。图可见，应用本实验建立的方法可检测出黄酒中的种生物胺，除酪胺稍有拖尾现象外，其他种生物胺都得到很好的分离。表可见，生物胺的种类及含量因酒的品种而异，种生物胺平均总量为，变异范围为。讨论有关酒中生物胺测定方法国内未见报道，我们参考国外相关文献，建立并优化了高效液相色谱测定酒中生物胺的方法。此法快速、稳定、灵敏度高，可用于乳制品、饮料等食品中生物胺的检测。等报道啤酒中生物胺含量与原料质量、酿造工艺以及酿造和贮藏过程中受微生物污染的程度密组胺能够改善啤酒的风味，使其口味更清爽，但高含量的色胺、尸胺、组胺说明酿造过程中受到微生物的污

3、染。黄酒中生物胺含量是否与原料的加工处理、发酵工艺以及陈酿时间和提取方式等因素有关还有待进一步研究。参考文献：，：，：，：，：，：李超产生物胺乳酸菌检测方法的建立及其应用南京：南京农业大学，；，（）：切相关。在啤酒酿造过程中，产生适量的色胺、尸胺、，：；中图分类号：文献标识码：文章编号：（）山楂（）为蔷薇科落叶小乔木，又名红果。主要分布在北温带，产于辽宁的山楂叫北山楂，果实大，直径约，皮色红，果肉厚，味酸甜。山楂的营养十分丰富，所含钙列居各水果的第一位；所含维生素与香焦相当，并列为水果的首位；所含维生素仅次于大枣、猕猴桃和沙棘，居各种水果的第四位；含胡萝卜素仅次与杏子，居水果第二位，山楂含糖量

4、为左右，是苹果和梨的两倍，山楂果含有人体必须的氨基酸、多种脂肪酸、黄酮和糖类等营养成分，山楂果中的黄酮类成分可促使心血管扩张，冠状动脉血流量增加，产生降血压作用。研究表明。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，具有清除人体中超氧离子自由基抗衰老，增加机体免疫力的生理活性作用。本文采用超声波法从山楂果中提取黄酮类化合物，并建立了山楂果中黄酮的光谱分析方法，。利用流动注射化学发光法研究了山楂果的抗氧化性能。实验结果表明，山楂果能有效的抑制超氧阴离子自由基诱导的鲁米诺化学发光，并且随着发光体系中山楂果浓度的升高，发光强度呈现下降趋势。该实验结果显示山楂果具有较强的抗氧化性能，并且抗氧化性能随着浓度的增加

5、而增加，这将为进一步开发利用山楂果提供了科学依据。材料与仪器区，洗净凉干后榨成鲜汁备用。邻苯三酚（级，贵州遵义市第二化工厂）用，配成储备液，使用前用水稀释浓度为×；缓冲溶液（级），用前新鲜配制，值用酸度计准确调至；（级，陕西师范大学）用配成，在避光处保存（所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水）。山楂果中黄酮含量的测定超声波法提取山楂果中黄酮，称取山楂果鲜汁置于锥形瓶中，加入乙醇，在冰水浴中用超声波振荡器振荡，将提取液过滤至容量瓶中，残渣再重复振荡提取两次，三次滤液合并，用乙醇定容至。吸收曲线的绘制及测定波长的确定从山楂果超声波法提取黄酮贮备液中，准确吸取试液，置于容量瓶中，用三氯化铝溶

6、液定容至刻度，以三氯化铝溶液为参比液在范围内扫描，得到其吸收光谱，最大吸收波长为。从槲皮素黄酮标准储备液中准确吸取于容量瓶中，用三氯化铝溶液定容至刻度，以三氯化铝溶液为参比液在范围内扫描，得到其吸收光谱，最大吸收波长为。由和可知，超声波法提取山楂果中黄酮可用槲皮素做黄酮标准品，测定波长为。标准曲线的绘制分别取、的槲皮素标准储备液，注入容量瓶中，按步骤在其波长为分别测定其吸光度值并且给出值，结果见表。求得与浓度关系的回归方程为：×根据与浓度的关系可绘制出线性很好的标准曲线求得相关系数，经查表得临界相关系数（，），（，），说明黄酮的浓度在紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司；旋

7、转蒸发仪（型）上海亚荣生化仪器厂；电热恒温水浴锅（型）上海医疗器械五厂；旋片式真空泵中华牌加热器（型）巩义市英峪仪器一厂；电子节能控温仪（型）巩义英峪仪器一厂；型流动注射化学发光仪西安瑞迈电子科技有限公司；型精密计上海精密科学仪器有限公司。槲皮素黄酮标准品：中国药品生物制品鉴定所。槲皮素黄酮标准储备液：称取槲皮素标准品，置于的容量瓶中，加乙醇（）使其溶解稀释至刻度，摇匀备用。山楂果样品的处理：年月采自辽宁本溪山表值与槲皮素黄酮浓度的关系Table1 Relationship between A and flavonoids concentrations（）（）范围内，与浓度之间呈良好的线性关系

8、，可按标准曲线法进行定量分析。稳定性实验用与绘制吸收曲线配制相同的方法配制的样品进行稳定性实验，结果表明：样品放置以上，测得其吸光度值不变。回收率及方法精密度根据前面确定的测试条件，按上述实验方法制备个不同浓度的样品，按标准加入标准物，在测定波长下测定，求得其平均回收率，标准偏差及变异系数，结果分别列于表和表。由表和表可以看出本法的回收率为，变异系数小于，方法的准确度与精密度均较高。样品分析称取山楂果样品，按、实验方法制备样品溶液，按操作条件，在测定波长处测其吸光度，分析结果山楂果黄酮含量为。表方法精密度Table 2 Precision of the method序号标样浓度（）测定值（）测

9、定平均值（）（）标准偏差（）变异系数（）蠕动泵；进样阀；流通池；光电倍增管；放大器；负高压：；记录仪；废液。样品；邻苯三酚；缓冲溶液（加入）。图流动注射化学发光分析流路图Fig.1 Schematic of flow-injection chemiluminescence酸盐缓冲溶液发光体系的发光，测三次，取峰值平均值进行定量。发光强度以计数表示。氧化性测定及抑制率计算按所采用的发光体系，测定一系列浓度山楂果的抑制后的发光，分别测定三次，同样取峰值平均值进行定量。发光强度以计数表示。以邻苯三酚碳酸盐缓冲溶液发光体系的发光强度为空白发光峰值，可计算出加入山楂果后抑制发光的程度。抑制率（空白发光峰

10、值加山楂果后的发光峰值）空白发光峰值×浓度对抑制率的影响取浓度为×的邻苯三酚溶液，值为的缓冲溶液，抑制实验中的山楂果浓度为，改变的用量，分别取、的用缓冲溶液将其稀释至进行实验。实验结果表明的加入量对抑制率有一定的影响。当的浓度为时山楂果的抑制率达到最大值。因此本实验选的浓度为时为适宜的测定条件。缓冲溶液的值对抑制率的影响取浓度为×的邻苯三酚溶液，浓度为的溶液，抑制实验中山楂果的浓度为，仅改变缓冲溶液的值进行实验。实验结果表明，值对抑制率有一定的影响，当值为时抑制率达到最大值，但是其发光强度很低，灵敏度不好；当值为时，抑制率低；当值为时，抑制率和值为时的抑制率仅差，

11、而且发光强度适宜，灵敏度也比较好，便于准确读数。故本实验选值为适宜的测定条件。邻苯三酚浓度对抑制率的影响取值为的缓冲溶液，浓度表方法回收率Table 3 Recovery ratio of the method序号标样浓度（）加入量（）理论值（）实测值（）回收率（）测定山楂果抗氧化性能的测定邻苯三酚碳酸盐缓冲溶液发光体系及其在比色管中分别加入×的邻苯三酚溶液、为的碳酸盐缓冲溶液（含浓度为的），启动型流动注射化学发光仪，按下图连接流路，流速均为，测出邻苯三酚碳为的溶液，抑制实验中山楂果的浓度为，仅改变邻苯三酚的浓度，分别取浓度为邻苯三酚、稀释至，即得浓度为×、×、&

12、#215;、×的邻苯三酚溶液进行实验。实验结果可知，邻苯三酚的浓度对抑制率也有一定的影响。可以看出当邻苯三酚的浓度为×时山楂果的抑制率达到最大值。因此本实验选邻苯三酚浓度为×为适宜条件进行实验。由以上实验可得出测定山楂果的抗氧化性能的最佳条件为：的浓度，缓冲溶表山楂果抗氧化性能的测定Table 4 Determination of antioxidation for C.pinnatifida Bunge（）（）液的值，邻苯三酚的浓度×。山楂果抗氧化性能的测定在选定的最佳条件下，将山楂果溶液配制成、一系列浓度的溶液进行实验。实验结果如表和图：由图可以看出，随着山楂果浓度的逐渐增加，化学发光强度呈现逐渐降低的趋势，而抑制率则呈现逐渐增强的趋势，说明山楂果具有较强的抗氧化性能，其（抑制率为时的溶液的浓度）为。结果与讨论实验结果表明山楂果中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，由山楂果抗氧化性能的测定可以看出山楂果具有较强的抗氧化性能，山楂果的（抑制率为时的溶液的浓度）为，当山楂果提取液的浓度为时，抗氧化性为。黄酮类化合物含量和抗氧化性都随着山楂果浓度的逐渐增加而增加即的黄酮含量与抗氧化性能呈现明显的构效关系。参考文献：（）（）图山楂果