拟黑多刺蚁论文拟黑多刺蚁 乙酰胆碱酯酶 RACE 实时定量RT-PCR

1、 拟黑多刺蚁论文：拟黑多刺蚁acetylcholinesterase基因的克隆mRNA水平表达及其与发育相关性研究【中文摘要】乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE, EC 3.1.1.7)在生物体内能特异性催化乙酰胆碱,终止神经递质对突触后膜的刺激作用,保证信号在生物体内的正常传递。随着研究的深入,越来越多的证据表明乙酰胆碱酯酶有着更为广泛的生理作用,如在非神经细胞中参与细胞的增殖、分化、细胞骨架的形成、促进神经细胞突触的生长、促进血小板和血细胞的生成、参与细胞凋亡等。乙酰胆碱能神经元、神经纤维的减少与多种病变性疾病引起的认知障碍也有关系。拟黑多刺蚁隶属于膜翅目(

2、Hymenoptera),蚁科(Formicidae),多刺蚁属(Polyrhachis),是一种典型的社会性昆虫,其群体具有多态现象,品级分化为工蚁、雌蚁和雄蚁,行为复杂、分工明确,因此它具有社会性的特征,具有高度复杂的神经系统,是研究昆虫发育、行为调控和神经功能方面很好的实验材料。本实验以拟黑多刺蚁为实验材料,采用RT-PCR,5与3RACE技术,克隆了ace的全长cDNA序列,利用生物信息学方法对其进行了序列分析、进化关系分析和功能预测；应用实时定量PCR技术对ace在拟黑多刺蚁体内的mRNA水平表达进行了相对定量。所获实验结.【英文摘要】The functions of Acetylc

3、holinesterase include the differentiation, migration and formation of synapses in nerve cells, proliferation and differentiation in hematopoiesis, as well as growth regulation in tumorigenesis. Usually the neurotransmitter acetylcholine (ACh) can be hydrolyzed by Acetylcholinesterase (AChE, EC 3.1.1

4、.7) and terminating neural excitement at postsynaptic membranes. The decrease in acetylcholine neurons and nerve fibers are related to cognitive impairment caused by variety of diseases.【关键词】拟黑多刺蚁 乙酰胆碱酯酶 RACE 实时定量RT-PCR【英文关键词】Polyrhacis vicina Roger acetylcholinesterase RACE Real-time quantitative R

5、T-PCR【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】拟黑多刺蚁acetylcholinesterase基因的克隆mRNA水平表达及其与发育相关性研究摘要3-5Abstract5-6第一章 前言10-181.1 乙酰胆碱酯酶简述101.2 乙酰胆碱酯酶在动物体内的分布10-111.3 乙酰胆碱酯酶的功能11-131.4 乙酰胆碱酯酶的分子结构13-141.5 乙酰胆碱酯酶的编码基因14-151.6 拟黑多刺蚁简述15-161.7 研究目的和意义16-171.8 研究目标和整体路线17-18第二章 拟黑多刺蚁Pv-

6、ace基因cDNA序列的克隆18-392.1 材料18-202.1.1 动物材料182.1.2 仪器设备182.1.3 主要实验试剂18-192.1.4 常用溶液配置192.1.5 琼脂糖凝胶的制备19-202.2 方法20-332.2.1 RNA的提取与鉴定20-212.2.2 第一链cDNA的合成21-222.2.3 引物设计与合成22-232.2.4 拟黑多刺蚁Pv-ace基因全长序列扩增23-272.2.5 拟黑多刺蚁Pv-ace cDNA序列5端的扩增(5RACE)27-312.2.6 拟黑多刺蚁Pv-ace cDNA序列3端的扩增(3RACE)31-322.2.7 序列的拼接32-

7、332.3 结果与分析33-392.3.1 总RNA的提取332.3.2 拟黑多刺蚁Pv-ace基因全长cDNA序列的扩增33-352.3.3 拟黑多刺蚁Pv-acecDNA序列开放阅读框分析35-39第三章 拟黑多刺蚁Pv-AChE蛋白序列的生物信息学分析39-503.1 分析方法与结果39-503.1.1 蛋白序列的同源性分析39-403.1.2 蛋白序列的系统进化分析40-423.1.3 蛋白质的保守结构域分析423.1.4 蛋白质理化性质分析42-453.1.5 疏水性分析453.1.6 信号肽分析45-473.1.7 蛋白质二级结构分析47-483.1.8 蛋白质三维结构分析48-5

8、0第4章 荧光实时定量PCR技术检测拟黑多刺蚁Pv-ace基因mRNA水平表达50-604.1 实验材料和方法504.1.1 生物材料504.1.2 主要试剂与仪器504.2 实验方法50-534.2.1 总RNA的提取及第一链cDNA的制备50-514.2.2 引物设计514.2.3 模板及引物质量检测51-524.2.4 SYBRGreen实时定量PCR实验52-534.2.5 数据分析方法534.3 结果与分析53-604.3.1 引物的专一性检测53-554.3.2 模板质量的检测55-564.3.3 拟黑多刺蚁不同品级、不同发育阶段虫体Pv-ace mRNA的相对表达56-60第五章 讨论60-645.1 关于RNA的提取605