差示扫描量热法_DSC_定量测试阿德福韦酯晶型的研究

1、第 14卷第 2期 2008年 06月 分析测试技术与仪器ANAL YSIS AND TESTIN G TECHNOLO GY AND INSTRUM EN TS Volume 14Number 2 J une 2008研究报告 (105108差示扫描量热法 (DSC 定量测试阿德福韦酯晶型的研究袁钻如 1, 张爱明 2, 方江邻 1(1. 南京大学 现代分析中心 , 江苏 南京 210093; 2. 江苏正大天晴药业股份有限公司 , 江苏 连云港 222006摘 要 :红外光谱 (FTIR 和 X 2射线衍射 (XRD 测试表明阿德福韦酯药物具有 A 、 E 2种晶型 . 法 (DSC 对阿

2、德福韦酯药物的不同晶型进行了定量测试方法的研究 , 熔点和熔融热焓 , , 断提供快速准确及有效的测试方法 .关键词 :阿德福韦酯 ; 晶型 ; 差示扫描量热法 ; ; 中图分类号 :O657. 32:100623757(2008 0220105204 阿德福韦酯 (物 , 92(22膦 基 乙 基 腺 嘌 呤 (adefovir 、 PM EA 的前体药物 , 具有广谱抗病毒活性 , 对逆转 录病毒 、 豆病毒 、 疱疹病毒和嗜肝病毒均有很强的抑 制作用 , 主要用于治疗成人的慢性乙型肝炎 . 阿德 福韦酯通过近乎完全的抑制病毒复制达到治疗目 的 , 特别对拉米夫定和法昔洛韦的病毒变异株仍有

3、 作用 , 因此得到广泛的临床好评 13.阿德福韦酯 由 G ilead Sciences 公司研 制 , 于 2002年 9月获得美国 FDA 批准上市 , 商品名为 Hep sera. 化学名 :9222(双特戊酰氧甲氧 磷酰甲 氧 乙基 腺嘌呤 . 分子式 :C 20H 32N 5O 8P , 化学结构 式如下: 该种药物可以有 3种固体形态出现 , 即 :无定型、 A 晶型和 E 晶型 , 其中 A 晶型为美国 G ilead Sci 2ences 公司专利保护晶型 (专利申请号 CN98803744 ,E 晶型为江苏正大天晴药业股份有限公司的专利保护晶型 (专利申请号为 CN0213

4、7905X . 由于药效可 能与其晶体存在的形态密切相关 , 因此对药物中各 种形态的含量判断犹为重要 , 通常对晶型的测试和 定量可采用 X 2射线衍射法 , 但这种测试方法定量的 准确性不高 , 并且很难获得各种晶型的绝对含量 . 本 研究工作利用差示扫描量热法 (DSC 对阿德福韦酯 药物的晶型进行了研究 , 利用不同晶型在不同温度 区域的熔融热焓的大小 , 通过标准工作曲线的测定 , 以期望寻找准确快速的定量测试方法 .1 实验部分1. 1 样品来源阿德福韦酯原药由江苏正大天晴药业股份有限 公司提供 .A 晶型的获得采用 G ilead Sciences 公司专利 CN98803744

5、方法制备 .E 晶型的获得采用江苏正大天晴药业股份有限公司专利 CN02137905X 方法制备 .1. 2 仪器测试DSC 采用 Perkin 2Elmer Pyris 1差示扫描量热 仪测试 . 氩气气氛 , 升温速率 :10. 0 /min , 温度范 围 :50120 . 样品用量 0. 12. 0mg.收稿日期 :2008203210; 修订日期 :2008204216.作者简介 :袁钻如 (1965- , 女 , 工程师 , 主要从事材料热分析研究 . 分析测试技术与仪器 第 14卷 F TIR 采用 Thermo Nicolet Nexus870红外光谱仪测试 . K Br 压片

6、 , 扫描次数 :32次 , 波数范围 :4000400cm -1, 分辨率 :2cm -1.XRD 采用 A RL X 2TRA 型 X 2射线衍射仪测试 ,Cu 2K 射线 , 2扫描范围 :240°, 扫描速度 :8°/min , 温度 :20 .2 结果和讨论2. 1 纯晶型样品测试图 1为阿德福韦酯 A 、 E 2种晶型的红外光谱 ,从红外光谱图可以看出 , 这 2 种晶型具有明显不同谱图 . 谱图形状和许多特征吸收峰的位置及强度具有明显差异 , 对比谱图数据见表 1、 表 2. 从图中可以推测 , 分子结构中的磷酰基 、 羰基与氨基形成的氢键以及分子之间的范得华

7、力形成分子间的不同排列方式而导致晶体结构的不同 .图 1 A 晶型和 E 晶型的红外光谱图Fig. 1 I nfrared spectra for crystal A and E图 2为阿德福韦酯 A 、 E 2种晶型的 X 2射线衍射图谱 . 同样 , 这 2种晶型具有明显不同的衍射图谱 . A 晶 型 谱 图 中 3个 最 强 衍 射 峰 的 2值 为 :7118°、 17. 52°和 20. 96° E 晶型谱图中 3个最强衍射峰的 2值为 :3.76°、 7. 94°和 17. 38°. X 2射线衍射数据见表 2.分别对 A

8、 、 E 2种晶型的阿德福韦酯样品进行DSC 分析 , 见图 3. 2种晶型具有明显不同的熔点(Onset 值 ,A 晶型为 100 , E 晶型为 93 . 2种晶型的熔融峰可以明显地区分开 , 这样就为能够利用熔融热焓的数据对不同晶型的含量进行定量 .表 1 A 晶型和 E 晶型的红外光谱图主要数据 T able 1 I nfrared spectra d ata for crystal A and E A 晶 /cm -1A 晶 T/%E 晶 /cm -1E 晶 T/% 327533332334 312226316532 297529297736 175913175311 1684181

9、65120 160519159321 157428157235 148019148224 142125141634 12631324 11371215 96515 22 71546 5364851表 2 A 晶型和 E 晶型的 X 2射线衍射主要数据 T able 2 XR D d ata for crystal A and E2(A 晶 相对强度(A 晶 (c/s 2(E 晶 相对强度 (E 晶 (c/s 7. 18583. 7683 7. 74187. 4624 12. 20177. 94100 12. 781712. 4625 12. 942115. 2449 13. 721216. 4

10、244 15. 883817. 3886 17. 529918. 1060 20. 968120. 2444 21. 423121. 3842 21. 762422. 3641 22. 741822. 4631 23. 342226. 1219 28. 121227. 10182. 2 标准工作曲线测试由于 A 晶型阿德福韦酯为 G ilead Sciences 公 司专利保护晶型 , 国内生产厂家生产 E 晶型品种 , 应控制在产品中可能存在的 A 晶型组分量以避免 专利侵权 , 因此有必要对 A 晶型的含量进行跟踪测 试 . 这里我们采用 DSC 方法利用 A 晶型组分在其 熔融区域的熔融

11、热焓来进行定量研究 .首先采用纯 A 晶型样品在不同的样品量的情 况下进行测试 , 以测定熔融热和样品重量的关系 . 以 601第 2期 袁钻如 , 等 :差示扫描量热法 (DSC 定量测试阿德福韦酯晶型的研究熔融热与样品用量作图 , 如图 4所示 , 测试结果表明 为一直线 , 熔融热与样品用量 (样品用量范围 0. 12. 0mg 成正比 , 直线斜率即为 A 晶型阿德福韦酯 熔融热焓 :81.74J /g (标准偏差 sd =0. 45J /g . 图 2 A 晶型和 E 晶型的 2Fig. 2E 图 3 A 晶型和 E 晶型的 DSC 曲线Fig. 3 DSC Curves for c

12、rystal A and E2. 3 测量方法的验证阿德福韦酯实际样品中可能为 A 晶型和 E 晶型混合物 , 为验证方法的准确性 , 我们分别配置了含 不同量 A 晶型的 A 、 E 晶型混合物进行 DSC 含量测 定 , 混合物样品测试用量 1. 0mg 左右 . 混合物 DSC测试曲线如图 5所示 .图 6为配制混合物中 A 晶型理论含量和采用 DSC 方法实际测量的含量结果的对照图 , 从图 6中 可以看出 , 实际测试数据与理论配制的含量数值很 接近 , 表明该方法可以真实的反映混合物的情况 .图 4 A 晶型样品熔融热和重量关系曲线Fig. 4 The relationship c

13、urve betw een molten heat and w eight for crystal Asample图 5 A 晶型不同含量的混合物 DSC 曲线Fig. 5 DSC Curves forthe mixtures with different contents of crystal A701 分析测试技术与仪器 第 14 卷图 6 A 、 E 晶型混合物中 A 晶型含量测量结果Fig. 6 The crystal A contentanalyzing results in the mixtures of A and E2. 4图 705 2025放置 30d 后样品的测试结果 .

14、 通过计算 , 可以看出 ,样品中 A 晶型的含量由 11. 2%提高到了 25. 6%,部分非晶组分转化成了 A 晶 .由于差示扫描量仪灵敏度高 , 对熔融热焓的积分准确 , 定量研究方便 , 所以使用差示扫描量热法可 以方便准确的对熔点相差较大的混合物中的不同晶图 7Fig. 7stay period .:1 Cundy KC , Barditch 2Crovo P , Walkex RE , et al . Clinical pharmacokinetics of adefovir in human immunodeficiency virus type 12infected patie

15、nts J. Antimicrob Agents Chemother , 1995, 39(11 :24012 2405.2 Nobel S , G oa K L. Adefovir dipivoxil J.Drugs , 1999, 58:4792487.3 茅益民 , 曾民德 . 抗乙型病毒性肝炎新药 阿德福 韦酯 J.中华肝脏病杂志 , 2004, 12(1 :61263.Study on Q u antitative Analysis of Crystal forms of Adefovir Dipivoxil by Differential Scanning C alorimetry

16、YUAN Zuan 2ru 1, ZHAN G Ai 2ming 2, FAN G Jiang 2lin 1(1. Center for Morden Analysis of Nanjing University , Nanjing 210093, China ;2. Jiangsu Chia Tal 2tianqing Pharmaceutical Co Lt d , Lianyungang 222006, China Abstract :Adefovir dipivo xil contains two crystal forms of A and E by analysis of Four

17、ier t ransform inf rared spect ro scopy (F TIR and X 2ray diff ractometer (XRD . It is certified t hat t he Quantitative Analysis of Crystal forms of Adefovir dipivoxil can be used by t he met hod of Differential Scanning Calorimet ry (DSC . The met hod is based on t he principle t hat different crystal forms show t he different melting point and molten ent halpy. The molten ent halpy is correspo