桑叶总黄酮对高脂血症动物的降血脂效应

1、桑叶总黄酮对高脂血症动物的降血脂效应李向荣1 陈菁菁2（1，浙江大学城市学院医学院，杭州，310015；2，浙江大学药学院，杭州，310058）摘要目的：观察桑叶总黄酮的降血脂作用。方法：用Triton WR-1339诱导建立急性高脂血症小鼠模型和高脂饲料建立高脂血症大鼠模型，分别测定小鼠和大鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，并计算HDL-C/TC和HDL-C/LDL-C的比值。结果：桑叶总黄酮（MTF）能显著抵抗Triton WR-1339诱导的小鼠血清TG，TC和LDL-C等指标的升高，同时升高血清HDL

2、-C/TC和HDL-C/LDL-C的比值。给药后12 h作用效果更明显。喂高脂饲料的大鼠模型也同样表明MTF具有降低血脂的作用，而且具有剂量依赖性。结论：MTF能剂量依赖性地降低高脂血症小鼠和大鼠的血脂水平，预防高脂血症的发生发展。关键词：桑叶总黄酮 Triton WR-1339 高脂血症 小鼠 大鼠 高脂血症引起动脉粥样硬化是造成冠心病、高血压和血管疾病的主要原因。我国人群血脂异常形势严峻，严重威胁我国人民的健康。我国18岁及以上成人血脂异常总患病率达18.6%，即血脂异常患者已达1.6亿；而且血脂异常的发病率正趋向年轻化，中年人与老年人患病率相近1。因此，做好血脂异常的早期防治，研究调节血

3、脂效果好、毒副作用小的新药十分重要。现代研究表明，富含黄酮类化合物的植物提取物具有降低血脂、清除体内自由基、抑制脂质过氧化的活性2，我们研究发现桑叶含有丰富的黄酮类化合物。本实验旨在观察桑叶总黄酮对Triton WR-1339诱导的高脂血症小鼠模型和高脂饲料引起高脂血症大鼠模型的血脂的影响，为进一步研究桑叶总黄酮的药理作用提供基础。1材料与方法1.1药品与试剂Triton WR-1339（Sigma，美国）；银杏黄酮片（深圳海王药业有限公司，广州，批号：20041108）；TG、TC测试盒（南京建成生物工程研究所，南京）；HDL-C、LDL-C测定试剂盒（荣盛生物，上海）；其他试剂均为分析纯。

4、1.2 实验动物ICR小鼠，20±2 g；SD大鼠，200±2 g，雌雄各半，均购于浙江省医学科学院实验动物中心。实验动物饲养一周以适应本实验室条件，分笼饲养，动物可以自由饮水，摄取普通饲料，控制实验室光照12 h明-12 h暗，室内温度为24 ± 1 ，湿度为55 ± 10 %。13 方法1 3.1药物试液的制备取桑叶总黄酮样品（我们实验室制备），分别配成浓度为0.5，1和2 mg·ml-1。银杏黄酮溶液浓度为1 mg·ml-1，于4 保存备用。132动物实验1321急性高脂血症小鼠模型将ICR小鼠随机分为6组：正常对照组，模型对照

5、组，MTF实验组（7.5、15和30 mg·kg-13个剂量组）和阳性对照组。除正常对照组外，其他各组分别尾静脉注射Triton WR-1339（400 mg·kg-1）诱导血脂升高，正常对照组注射等体积NS 。注射Triton WR-1339后12 h，实验组分别用MTF药液灌胃（剂量分别为7.5、15和30 mg·kg-1），阳性对照组以银杏黄酮灌胃（15 mg·kg-1）。Triton WR-1339注射后的12 h、18 h和24 h，每组随机选取10只，去眼球采血，分离血清，-38 保存，供血脂指标测定用。1322高脂血症大鼠模型3将48只SD

6、大鼠随机分为6组：正常对照组，喂普通饲料；模型对照组，喂高脂饲料（高脂饲料组成质量分数为：猪油10%，蛋黄粉10%，胆固醇1%及基础饲料79%）；3个剂量的MTF实验组和阳性对照组也喂食高脂饲料，并分别灌胃给予MTF（分别为5、10和20 mg·kg-1）和银杏黄酮（10 mg·kg-1），每天一次，连续4周。同时，正常对照组和模型对照组分别灌胃给予等体积NS。于每周测定体重。实验前后，分别尾静脉采血，分离血清，-38 保存，供血脂指标测定用。实验结束后，断头处死，取肝脏并称重，并计算肝重指数（Hepatosomatic indices, HSI）。肝重指数（HSI） （肝

7、脏重量 / 体重） × 1001323血脂指标测定按试剂盒说明书方法操作，分别测定小鼠和大鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，并计算HDL-C/TC和HDL-C/LDL-C的比值。1324统计方法数据以平均值±标准差表示，采用统计软件（SPSS 13.0 for Windows）进行方差分析，两组间比较采用t检验。2 结果21 MTF对Triton WR-1339诱导的高脂血症小鼠血脂指标的影响与正常对照组相比，注射Triton WR-1339的小鼠的血清TG、TC和LDL-C水平分别升高了

8、约7倍、5倍和4倍，HDL-C/TC和HDL-C/LDL-C比值分别降低了40和10，建立了急性高脂血症小鼠模型。而给予MTF处理（剂量分别为7.5、15或30 mg kg-1）的小鼠明显抑制Triton WR-1339诱导的高脂血症小鼠血脂水平的升高（见表2-1 & 表2-2）。Table 2-1 Effect of MTF on serum lipid levels in mice 18 h post triton WR- 1339 injection ( n =10; Mean ± S.D.)NormalTriton WR-1339MTF treatment (mg&#

9、183;kg-1)Ginkgetin (15 mg·kg-1)7.51530TG (mg·100 ml-1)85.7± 5.9607.5± 49.9 #595.9± 59.3553.1± 54.5*437.9± 38.0*542.2± 47.1*TC (mg·100 ml-1)79.1± 5.4440.6± 29.6 #412.8± 40.9361.2± 34.6*285.5± 27.0*370.2± 32.3*LDL-C (mg·10

10、0 ml-1)72.1± 5.1287.2± 23.7 #273.3± 25.1245.7± 26.1*210.4± 16.3*248.0± 20.5*HDL-C/TC0.52± 0.040.34± 0.03 #0.34± 0.030.36± 0.030.39± 0.04*0.36± 0.03HDL-C/LDL-C0.57± 0.050.52± 0.06 #0.52± 0.040.53± 0.050.53± 0.060.54+

11、 0.06# P<0.01 vs control group. * P<0.05, * P<0.01 vs model group.Table 2-2 Effect of MTF on serum lipid levels in mice 24 h post triton WR- 1339 injection ( n =10; Mean ± S.D.)NormalTriton WR-1339MTF treatment (mg·kg-1)Ginkgetin (15 mg·kg-1)7.51530TG (mg·100 ml-1)84.5&#

12、177; 5.4540.1± 39.9 #526.5± 46.3494.0± 45.8*388.0± 26.3*451.8± 37.7*TC (mg·100 ml-1)81.1± 4.9463.7± 36.8 #420.6± 44.0 *339.5± 32.7*256.6± 24.8*344.8± 40.3*LDL-C (mg·100 ml-1)72.7± 5.5298.8± 25.9 #275.9± 22.2 *228.9±

13、 17.4*189.2± 16.3*237.6± 18.9*HDL-C/TC0.52± 0.030.33± 0.03 #0.34± 0.030.38± 0.04*0.42± 0.04*0.37± 0.04*HDL-C/LDL-C0.58± 0.050.52± 0.04 #0.52± 0.070.56± 0.040.57± 0.06*0.53± 0.06# P<0.01 vs control group. * P<0.05, * P<0.0

14、1 vs model group.如表2-2所示，尾静脉注射Triton WR-1339（400 mg·kg-1）24 h后，模型组的小鼠血清中的TG、TC和LDL-C含量分别为540.1、463.7和298.8 mg·100 ml-1，而以15和30 mg·kg-1剂量MTF给药的小鼠血清中的TG、TC和LDL-C含量分别降低到494.0、339.5、228.9 mg·100 ml-1和388.0、256.6、189.2 mg·100 ml-1；HDL-C/TC比值在模型组小鼠中降到了0.33，而在MTF给药（15和30 mg·kg

15、-1）的小鼠中回升到了0.38和0.42；MTF给药的小鼠血清中HDL-C/LDL-C比值与模型组相比也有所升高，但没有显著性差异。表2-1和表2-2均表明MTF能抑制Triton WR-1339诱导的小鼠血脂水平的升高，且具有剂量依赖性。图2-1更清楚地显示了MTF能剂量依赖性地抑制由Triton WR- 1339静脉注射引起的小鼠血清TG、TC和LDL-C水平的升高以及HDL-C/TC和HDL-C/LDL-C比值的下降。Fig. 2-1 The inhabitation of MTF in serum lipid levels. The serum lipid levels were re

16、sisted by MTF, at the doses of 7.5, 15 and 30 mg kg-1, 24h post triton WR-1339 injection. Date is expressed as mean± S.D. obtained from ten mice in each group.22 MTF对高脂血症大鼠的影响从表2-3可以观察到，喂高脂饲料的同时给予MTF保护的大鼠各血脂指标明显好转。剂量为10和20 mg·kg-1·d-1的MTF实验组大鼠的TG、TC和LDL-C水平分别维持在73.2、86.4、51.7 mg·

17、100 ml-1和67.2、84.0、47.5 mg·100 ml-1，相比模型组明显下降。虽然MTF实验组（10和20 mg·kg-1·d-1）大鼠的HDL-C水平分别升高到48.6和50.5 mg·100 ml-1，相比模型组HDL-C水平仅为43.8 mg·100 ml-1，但此差异不具显著性。Table 2-3 Effect of MTF on serum lipid levels in hyperlipidemic rats ( n = 8; Mean ± S.D.)NormalModelMTF treatment (mg&

18、#183;kg-1)Ginkgetin (10 mg·kg-1)51020TG (mg·100 ml-1)65.7± 10.693.5± 12.3 #82.2± 15.773.2± 9.9*67.2± 18.0*71.8± 16.2*TC (mg·100 ml-1)73.2± 12.8108.2± 18.6 #102.3± 24.086.4± 16.7*84.0± 11.8*84.8± 8.8*LDL-C (mg·100 ml-1)45

19、.0± 8.062.0± 6.1 #56.9± 11.351.7± 10.847.5± 7.7*50.4± 13.5*HDL-C (mg·100 ml-1)47.5± 10.443.8± 5.6 #43.3± 8.248.6± 14.250.5± 12.346.1± 9.2Body Weight(g)275.7± 44.6286.0± 52.0280.2± 56.5276.6± 48.3269.1± 38.1288.

20、1± 47.0HSI3.2 ± 0.24.1 ± 0.3 #4.0 ± 0.53.6 ± 0.2*3.2 ± 0.3*3.2 ± 0.3*# P<0.01 vs control group. * P<0.05, * P<0.01 vs model group.表2-3还从一定程度上反应了MTF对大鼠肝脏的保护作用。从肝重指数上看，模型对照组的平均值为4.1，MTF各处理组（剂量分别为5、10和20 mg·kg-1·d-1）分别为4.0、3.6和3.2。以10和20 mg·kg-

21、1·d-1剂量的MTF给药组的大鼠肝重指数明显低于模型组，且20 mg·kg-1·d-1剂量组的大鼠肝重指数与正常对照组接近。另外，观察各组大鼠肝脏的外观，模型组大鼠肝脏体积明显增大，重量增加，表面无光泽，呈乳白色，包膜紧张，边缘钝圆，质地变软，有滑腻感；而MTF实验组的大鼠肝脏的体积、重量、色泽、质地均有明显改善，尤其是20 mg·kg-1·d-1剂量组大鼠肝脏表面光滑、呈暗红色、接近正常组。上述结果提示，MTF能剂量依赖性地降低大鼠的血脂水平，抵抗大鼠高脂血症的形成，并一定程度上预防脂肪肝的形成。3讨论实验结果表明，桑叶总黄酮能显著抵抗Tr

22、iton WR-1339诱导的小鼠血清TG，TC和LDL-C等指标的升高，同时升高血清HDL-C/TC和HDL-C/LDL-C的比值。数据提示MTF具有降低高脂血症小鼠血脂水平的活性，而且给药后12 h作用效果更明显。喂高脂饲料的大鼠模型也同样表明MTF具有降低血脂的作用，而且具有剂量依赖性。桑叶总黄酮降低血脂的机制，目前尚不清楚，根据实验结果并结合文献报道的一些黄酮类化合物调节血脂的途径，推测以下一些途径可能是MTF降血脂作用的机制。血清中的胆固醇首先要与脂肪酸结合成酯，才能被转运和代谢。卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）由肝脏合成并分泌至血清，能催化卵磷脂-位的脂酰基转移至游离胆固醇的3-

23、羟基生成胆固醇脂，使血清中游离胆固醇减少，胆固醇酯增加。血清中HDL-C的含量能一定程度上反映出LCAT的活性4，因而可以从黄酮类化合物能升高HDL-C/LDL-C比值上，推测该类化合物能促进胆固醇向肝脏转运和代谢5。一些植物黄酮已被证明能激活LCAT，从而促进胆固醇酯的生成，加速血清胆固醇的清除。我们的研究也发现，给予MTF的小鼠及大鼠血清中的HDL-C/TC比值显著升高，HDL-C/LDL-C比值尽管小鼠缺乏统计学意义，也有明显升高的趋势，提示MTF也可能加速胆固醇转运和代谢。一些抗氧化能力强的黄酮类化合物，如大豆异黄酮类和染料木黄酮衍生物等，能提高LDL的抗氧化能力，并抑制动脉粥样硬化。我们之前的研究以及其他一些研究都表明，桑叶中所含的丰富的黄酮类化合物是活性很强