气相色谱和高效液相色谱定量技术知识点

1、气相色谱和高效液相色谱定量技术色谱法因具有强大的分离功能，并且在分离的同时能够进行定量测定，在药物含量测定中应用越来越广泛。用于定量参数为峰高或峰面积。1定量方法在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分i的量mi（质量或浓度）与检测器的响应信号（峰面积A或峰高h）成正比： mi = fiAi mi= fhihi 工作站能自动测量色谱峰面积，对不同形状的色谱峰可以采用相应的计算程序自动计算得出准确的结果，并由打印机打出保留时间和A或h等数据。式中，fi、fhi为定量校正因子。要准确进行定量分析，必须准确测量响应信号，求出定量校正因子。 式中，fi 称为绝对校正因子。因绝对校正因子与检测器性能

2、、待测组分、流动相性质以及操作条件等有关，不易准确测量，在定量分析中常用相对校正因子fi（使用时常将“相对”二字省去）。相对校正因子为待测组分与某标准物质的绝对校正因子之比。 式中， Ai、As 待测组分和标准物质的峰面积；mi、ms 待测组分和标准物质的量。常用的标准物质为苯。相对校正因子只与物质i和标准物质s以及检测器有关，而与柱温、流速、样品及固定液含量、甚至载气等条件无关。一般的参考文献中都列有许多化合物的校正因子，可在使用时查阅。校正因子的测定方法：准确称取适量被测组分的纯品（纯度大于99%）和标准物，使用色谱纯试剂配制成溶液，在同样的实验条件下进样分析，测量各峰面积，计算校正因子。

3、色谱法中用于定量分析的方法较多，各具特点。（1）外标法 外标法中所用标准物质是待测组分的纯品。药典中许多药物的含量测定均采用了高效液相色谱外标法。在相同操作条件下，配制供试溶液和一个与被测组分含量相近的标准溶液，分别取等量的标样和试样进行色谱分析，比较两色谱图中待测组分的峰值，由式求出待测组分的含量。 外标法不需要测定校正因子，操作简单、计算方便、应用广泛，但所需标准物质的纯度高，而且要严格控制操作条件及进样量，否则结果不准确。（2）内标法 内标法需要选择合适的内标物。内标物必须满足以下几个条件：试样中不存在的纯物质；其色谱峰应位于待测组分色谱峰附近或几个待测组分色谱峰之间，并与待测组分完全分

4、离；不与样品发生反应。具体做法：准确称取m（g）试样，加入ms（g）内标物，配成混合试液进样，记录色谱图。根据待测组分i和内标物s的质量和相应的峰面积，由下式计算待测组分的含量： 内标法不受进样量、操作条件以及不同操作者进样技术的影响，定量准确，但选择合适的内标物有一定困难，且需要测定待测组分和内标物的校正因子，比较费时。如果测定校正因子时，不用苯而用内标物作标准品，则内标物的校正因子等于1。（3）归一化法 如果试样中所有组分均能流出色谱柱，并在检测器上都有响应信号，都能出现色谱峰，可用此法计算试样中各待测组分的含量。其计算式如下： 归一化法简便、准确，进样量多少不影响定量的准确性，仪器及操作

5、条件的变动对结果的影响也较小，尤其适用多组分的同时测定。但要求试样中所有组分必须均能流出色谱柱并出峰，即使不必定量的组分也必须能测出峰面积，且所有组分的校正因子均需测定。2气相色谱仪图1 气相色谱仪流程示意图1-高压钢瓶 2-减压阀 3-载气净化干燥管 4-针形阀 5-流量剂 6-压力表 7-进样器 8-色谱柱 9-检测器 10-记录仪气路系统 进样系统 分离系统 检测系统 信号记录系统气相色谱仪的基本结构包括气路系统、进样系统、柱分离系统、检测系统、温度控制系统和信号记录系统等，其流程示意如图1。载气由高压钢瓶1供给，经减压装置2、净化装置3、再经调节和控制流量后进入色谱柱，待基线稳定后，即可经进样器7进样；样品经气化室气化后被载气带入色谱柱8，在柱内被分离；分离后的组分依次从色谱柱中流出，进入检测器9，检测器将各组分的浓度或质量的变化转变成电信号（电压或电流），经放大器放大后