松果菊苷抗氧化作用研究

1、松果菊苷抗氧化作用研究【摘要】目的 研究管花肉苁蓉中松果菊苷(echinacoside, ECH)抗氧化、耐缺氧、抗疲劳等抗衰老作用。 方法 以维生素E VE, 100 mg/(kgd)为对照，观察低、中、高剂量 10 mg/(kgd)、20 mg/(kgd)、40 mg/(kgd) ECH对正常健康小鼠和D半乳糖亚急性衰老模型小鼠的影响。测定正常小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间，检测衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性，丙二醛(MDA)含量，放射免疫法测定外周血白介素2(IL2)含量。计算亚急性衰老模型小鼠的脾指数和胸腺指数。 结果 ECH和VE能够延长健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间(P

2、0.01);ECH和VE能提高衰老小鼠血清SOD活性(P0.01)，降低血清MDA含量(P0.01)，升高外周血IL2含量(P0.05)，增加脾指数(P95%，批号20060308)，磷酸缓冲液 (PBS, 50 mmol/L, pH 7.4)溶解，由和田帝辰沙生药物有限公司提供;D半乳糖(Dgal)购自上海试剂二厂;VE购自东海制药厂;超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒均由南京建成生物研究所提供，其余试剂均为国产分析纯。722分光光度计购自上海精密科学仪器有限公司;台式低温高速离心机购自德国Hettich公司;BP11OS电子天秤购自德国Sartorius公司;H

3、HW21600A电热恒温水箱购自黄石市恒丰医疗器械有限公司。1.2 常压耐缺氧实验3 健康ICR小鼠50只，分为5组，健康对照组、低剂量ECH健康组、中剂量ECH健康组、高剂量ECH健康组、VE健康组，低、中、高剂量ECH分别按10 mg/(kgd)、20 mg/(kgd)、40 mg/(kgd)的剂量(每10 g容量为0.2 ml)给药，VE按100 mg/(kgd)给药,正常组喂饲同体积的PBS溶媒，连续灌胃给药10 d，末次给药1 h后,将小鼠放入250 ml磨口瓶,瓶口以凡士林涂抹密封,瓶内放置10 g钠石灰,以小鼠停止呼吸为标准,观察小鼠常压耐缺氧时间。1.3 负重游泳实验3 健康I

4、CR小鼠50只，分组及给药方法同上，末次给药1 h后,给小鼠尾部下2/3处负重其体质量的5%，放入游泳测试箱中，水温25 ，水深30 cm，以小鼠头部沉入水面下时间10 s为标准,观察游泳时间。1.4 亚急性衰老小鼠模型的制备及给药 按文献方法制备衰老小鼠模型4。注射用水配制10% Dgal，小鼠颈背部皮下注射10 ml/kg，每天1次，连续8周。小鼠随机分为6组，即正常对照组、衰老模型组、低剂量ECH衰老组、中剂量ECH衰老组、高剂量ECH衰老组和VE衰老组，每组10只。衰老模型组、低、中、高剂量衰老组从第3周起，分别灌胃给予ECH 0、10、20、40 mg/kg，VE衰老组给予VE 10

5、0 mg/kg容量为20 ml/kg，1次/d，连续6周。正常对照组相应注射同体积的注射用水和灌胃给予等体积的PBS溶媒。1.5 检测指标及方法 8周后摘眼球取血，处死小鼠，分离血清，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力，硫代巴比妥酸法测定MDA含量，放射免疫法测定外周血IL2含量，具体操作按试剂盒说明进行。取脾、胸腺测定脾指数、胸腺指数(以脏器鲜重/体质量表示)。1.6 统计学方法 实验结果分析采用SPSS 16.0软件进行单因素方差分析和组间t检验。2 结果2.1 ECH对小鼠常压耐缺氧及负重游泳时间的影响低、中、高剂量ECH和VE均能提高小鼠常压耐缺氧时间，高剂量ECH健康组与VE健康组相比，时

6、间延长差异具有统计学意义(P0.01;与VE健康组比较，P0.012.2 ECH对衰老小鼠血清SOD活力和MDA含量的影响 与正常对照组比较，衰老模型组小鼠血清SOD显著下降(P0.01);与衰老模型组相比，低、中、高ECH剂量和VE衰老组小鼠血清SOD活力均得到提高(P0.01)，且与ECH剂量呈相关性。与正常对照组相比，衰老模型组小鼠血清MDA明显较高(P0.01);与衰老模型组相比，低、中、高剂量ECH组小鼠血清MDA含量均降低(P0.05)，表明ECH能剂量相关性降低衰老小鼠血清MDA含量。见表2。2.3 ECH对衰老小鼠外周血IL2含量的影响 与正常对照组相比，衰老模型组小鼠外周血I

7、L2含量显著下降(P0.01);与衰老模型组相比，高剂量ECH衰老组小鼠外周血IL2含量显著升高。见表2。2.4 ECH对衰老小鼠脾指数和胸腺指数的影响 与正常对照组相比，衰老模型组小鼠脾指数和胸腺指数均降低(P0.05，*P0.01;与衰老模型组比较，P0.05，P0.01;与VE衰老组比较，P0.05，P0.01;与高剂量ECH衰老组比较，#P0.013 讨论现代医学认为，衰老与自由基损伤有密切联系。自由基是机体代谢过程中产生的活泼基团，生理状态下自由基呈动态平衡，维持正常生命状态。自由基过多可氧化不饱和脂肪酸,生成脂质过氧化物,损害生物膜,自由基还使DNA、RNA、蛋白质变性,导致细胞正

8、常生理活动受损引起衰老57。Dgal衰老模型是由我国学者首次提出的8，此模型是一种从自由基角度反映老年痴呆的模型。动物长期注射Dgal使之大量集聚在细胞内，引起细胞代谢紊乱，产生过量自由基，由于氧化应激引起组织细胞功能损坏及氧化酶活力下降，过氧化物增多，最终导致细胞和组织衰老变化。许多实验证据表明，Dgal所致亚急性衰老模型动物，就学习记忆、自由基和免疫等指标的变化而言，会出现一系列与自然衰老相似的改变9。机体内SOD是清除自由基最有效酶之一10，它可以清除自由基，减少脂质过氧化物的产生,其活性增高，间接证明组织清除自由基能力增强;MDA是自由基损伤不饱和脂肪酸生成的脂类过氧化分解产物，MDA

9、降低可间接证明组织中自由基水平降低11。有研究表明，MDA可引起精神行为改变，并通过交联、结合形成脂褐质(LF),引起神经系统功能障碍12。人体和动物的衰老与免疫防御功能的健全状况有密切关系13。随着年龄的增加，各免疫器官日渐萎缩，其中最明显的是胸腺14。VE为自由基清除剂，公认的抗氧化抗衰老药物，还有研究表明，VE可以抑制癌细胞端粒酶的活性，从而发挥抗癌作用，防治肿瘤和抗衰老很有可能是通过影响端粒酶活性而达到防治目的。本实验以VE为对照，有助于客观评价ECH抗衰老作用。ECH是管花肉苁蓉的活性部位苁蓉总苷中含量最高的苯乙醇苷类化合物。分子式为C35H46O20，化学结构由苯丙烯基、糖基和苯乙

10、醇基3部分构成，其中苯丙烯基和苯乙醇基上都带有邻位的酚羟基，这一结构特点有利于清除活性氧自由基15。本实验研究结果显示ECH能够提高健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间，可显著提高亚急性衰老小鼠SOD的活性，并明显降低亚急性衰老小鼠的血液中的脂质过氧化物的含量，提高外周血IL2含量，增加衰老小鼠的脾指数和胸腺指数。这说明ECH具有调节衰老小鼠机体氧化/抗氧化平衡的功能，消除Dgal引起自由基产生的增多，提示ECH具有抗氧化，增强免疫力及延缓衰老的作用。【参考文献】 1 Liu J. The reacher development of Cistanche on antiagingJ.Inf Tra

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