正交设计法优选_牛儿苗总黄酮的提取工艺

1、 Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月1 139表2方差来源A B C方差分析结果方差平方和自由度1581497303219247195613108222233参F 值考文献均方7912515161463198显著性1211182311893016081Zhang M , Cui S W , Cheung PCK, et al 1Antitu mor poly 233saccharides fr om mushr oom s:a revie w on their is olati on p r ocess, structur

2、al characteristics and antitu mor activity J 1Food Science&Technology,2007, 18(1 :421912L i SP, Zhang GH, Zeng Q, et al 1Hypolyce m ic activity ofpolysaccharide, with anti oxidati on, is olated fr om cultured Cordyceps m ycelia J 1Phyto m edicine, 2006, 13(6 :误差注:F 0105(2, 2 =19100, F 0101(2, 2 =991

3、00,P AC, B 因素(提取温度 对多糖提取率的影响具有极显著意义, 在考察范围内蚕蛹多糖提取工艺的最优组合为A 3B 3C 1, 即浸提时间10h, 温度100, 料液比110, 提取率为93178%。3小结428243313陈卫东, 肖更生, 廖森泰1发进展J 中药材, 1999, 22(:14, A, of insectfr om silk wor m (B o m 2J 1International Journal of B iolog 2acro m olecules, 2000, 27(1 :9921051为:提取时间10100, 料液比110, 蚕蛹多糖提取率为93178%。

4、该法虽然能将蚕蛹原料中的蚕蛹多糖基本提尽, 但需要在较高温度下长时间提取, 因此以后的工作可考虑开发一些新型的提取技术, 使提取蚕蛹多糖的时间缩短并降低能耗。5王国基, 殷伟芬, 王俊, 等1蚕蛹多糖对小鼠免疫功能的影响J 1江苏大学学报(医学版 , 2007, 17(5 :373237516张惟杰1糖复合生化研究技术M1杭州:浙江大学出版社, 1999:122131正交设计法优选牻牛儿苗总黄酮的提取工艺尹海波, 韩荣春, 姜力嘉, 王冰(辽宁中医药大学药学院, 辽宁大连116600摘要目的:对老鹳草总黄酮的提取工艺进行优化。方法:采用正交设计, 以老鹳草药材总黄酮的提取率为考察指标, 考察乙

5、醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取率的影响。结果:优化提取工艺条件为4倍量90%乙醇、提取3次、每次1h, 验证性实验符合标准。结论:该工艺方法经实验验证稳定、可靠、操作可控, 重现性好, 对进一步的工艺开发有较好的参考价值。关键词牻牛儿苗; 总黄酮; 正交设计; 提取工艺中图分类号:R28412文献标识码:A 文章编号:100124454(2009 0721139203牻牛儿苗为牻牛儿苗科牻牛儿苗属的一或二年生草本植物, 为药材老鹳草的主流商品, 占市场流通量的90%以上; 因其果实宿存花柱似鹳鸟之长喙而1得名, 商品习称“长嘴老鹳草”。老鹳草始载于明代的滇南本草, 其富含鞣

6、质、黄酮、有机酸、挥发2油等多种化学成分, 具祛风湿、通经络、止泻痢的功效。近年研究表明从该药材中提取的黄酮类成分具有抗菌、抗病毒等功效, 临床上用于风湿痹痛、麻木拘挛、筋骨酸痛、泄泻痢疾等证; 此外对多种病毒的活性也具有一定的抑制性和选择性, 并呈量效关系。为了进一步开发利用该药材资源, 最大限度地326利用其活性物质, 本实验在前期工作的基础上, 对其总黄酮的回流提取工艺进行优化选择, 以期为老鹳草有效成分提取工艺的确定提供可靠的依据, 以充分利用我国丰富的老鹳草资源。1材料与仪器收稿日期:2008208213作者简介:尹海波(19732 , 男, 副教授, 博士, 主要研究方向为药用植物

7、资源开发、生药鉴定及中药的品质评价; Tel 0411287586004, E 2mail:yhb0528sina 1com 。 1 140Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月紫外可见分光光度计(UV 24802型 ; 槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供, 批号:1107532200601 ; 缓冲液:醋酸2醋酸钠(pH 值415 ; 显色剂:011mol/L三氯化铝醇溶液; 其他试剂均为分析纯。药材老鹳草研成粉末, 过40目筛, 即得。2方法与结果211提取方法的选择21111超声提取法:精

8、密称取样品2g, 置圆底烧醋酸钠缓冲液1mL 及3%的三氯化铝醇溶液1mL, 摇匀, 用甲醇稀释至刻度, 放置40m in, 用第1管作空白, 在波长437nm 处测定吸收度; 以吸光度为纵坐标, 槲皮素含量为横坐标, 得回归方程式为y =619495x -010125, r =019996。对照品槲皮素在00112mg 范围内线性关系良好。21212精密度考察:精密量取槲皮素对照品溶液,按“21211”项下方法处理, 重复测定6次, 吸光度平均值为014797, RS D 为0106%, 表明精密度良好。21213稳定性考察:精密称取老鹳草样品, 按“21211”, 在010h 时进行测定0

9、0181%(n =。114:取老鹳草样品, 分别按瓶中, 加入4倍量的石油醚回流提取015h, 过滤, 弃去滤液并挥干残渣, 加入甲醇超声提取至黄酮反应(三氯化铝反应 阴性为止, 过滤, 滤液浓缩至小体积, 用水分散后上聚酰胺柱净化, 先用蒸馏水洗至无色, 再用甲醇洗出总黄酮, 洗脱液浓缩至小体积, 定量转移至50mL 容量瓶中, , 供试品溶液, 备用。21112213”项下方法制备5份样品液, 按“21211”项下方法处理, 分别测定吸光度, RS D 为0197%(n =5 , 表明重现性良好。21215加样回收率测定:取本品已知准确含量的瓶中, 加入4015h, 过滤, 弃去滤液并挥干

10、残渣, 加入乙醇浸泡24h, 浸泡液过滤, 浓缩至小体积, 用水分散后上聚酰胺柱净化, 先用蒸馏水洗至无色, 再用甲醇洗出总黄酮, 洗脱液浓缩至小体积, 定量转移至50mL 容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 作为供试品溶液, 备用。21113乙醇回流法:精密称取2g 样品, 置圆底烧瓶中, 加入4倍量的石油醚回流提取015h, 过滤, 弃去滤液并挥干残渣, 加入乙醇回流提取至黄酮反应(三氯化铝反应 阴性为止, 合并滤液, 浓缩至小体积, 用水分散后上聚酰胺柱净化, 先用蒸馏水洗至无色, 再用甲醇洗出总黄酮, 洗脱液浓缩至小体积, 定量转移至50mL 容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 作为供试品溶液

11、, 备用。21114样品液总黄酮的含量测定:精密量取样品样品2g, 精密称定, 精密加入槲皮素对照品0102mg, 按“21113”项下方法操作, 分别测定吸光度, 平均回收率为9915%, RS D 为114%(n =3 。213正交试验选择提取工艺中对提取率有影响的4个因素, 即乙醇浓度(A 、乙醇倍数(B 、提取表1水平123A 乙醇浓度/%306090因素水平表B 乙醇倍数/倍468C 提取时间/h123D 提取次数/次123表2试验号123456789k 1k 2k 3RA 11122233301204017080179201588正交试验结果B 123123123015320154

12、90162301091C 12323131201656015990144901207D 12331223101496015630164401148液2mL, 置10mL 容量瓶中, 按“21211”项下方法进行操作, 显色, 测定吸光度, 由回归方程计算样品中总黄酮含量, 结果超声提取法、乙醇冷浸法与乙醇回流法所得样品中总黄酮的平均含量依次为010964%、010906%、014687%, RS D 依次为114%、212%、112%(n =3 , 因为乙醇回流法提取率较高,总黄酮含量/%01183401211901215401779601498501846401631901937901806

13、3故选用该方法作为正交试验的提取方法。212含量测定21211标准曲线的制备:精密称取槲皮素对照品110mg, 置25mL 容量瓶中, 加甲醇适量在水浴(60 上溶解, 放冷后用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 制成每1mL 含0104mg 的对照品溶液, 备用。精密量取对照品0、015、110、115、210、215、310mL 置10mL 容量瓶中, 用少量甲醇稀释, 加入pH415的醋酸2 Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月1141时间(C 、提取次数(D , 每个因素选择3个水平,4采用L 9(3 正交表进行试验。因素与水

14、平见表1。以总黄酮的提取率为考察指标优化提取工艺, 试验结果见表2, 方差分析结果见表3。可以看出, 各因素对提取效果的影响程度依次为A C D B , 且只有A 因素有统计学意义。结合生产中的实际情况, 得优化提取条件为A 3B 1C 1D 3, 即用4倍量90%的乙醇提取3次, 每次1h 。表3方差来源A B 误差C D通过正交试验, 确定了老鹳草总黄酮的最佳提取条件为:乙醇浓度90%, 溶剂倍量4倍, 回流时间1h, 提取次数3次。工艺验证试验表明, 最佳工艺的提取得率高, 稳定性好, 且工艺操作控制容易。参考文献1国家药典委员会1中华人民共和国药典S1一部1北京:化学工业出版社, 20

15、05:26312周海燕1老鹳草的研究概况J 1国外医药植物药分方差分析结果离差平方和01608010140106901033册, 1996, 11(4 :16421661自由度2222均方0130400100700103450F P3尹海波, 张玲玲, 徐保利, 等14314291100041010J 1, (8 , , J 200629(6 :541254215, 等1老鹳草属两种老鹳草没食子酸的含量比较研究J 1中华现代中医学杂志, 2006, 2(3 :19621971注:F 0105( =00, 0(=991214A 31C 1D 3的条件进行提取,6尹海波

16、, 何静, 王冰, 等1东北八种老鹳草没食子酸含量019343%, 方案可行。3小结比较J 1中药材, 2007, 30(6 :63726381穿心莲中有效成分不同提取方法的比较研究唐睿, 李添朋, 古学轼, 李永健, 董宇静, 温金莲(广东药学院药科学院, 广东广州510006摘要目的:考察不同方法和溶剂组成对提取穿心莲中主要有效成分的影响。方法:药材分别采用不同的溶剂以冷浸、温浸、热回流、超声辅助、微波辅助等方法提取, 高效液相色谱法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯, 紫外2可见分光光度法测定总黄酮。结果:以内酯总量为指标, 提取率以85%乙醇冷浸最高, 酸水冷浸最低。总黄酮的提取率以85%乙醇冷浸和微波辅助提取较高, 碱水提取最低。有效成分提取率随溶剂中乙醇含量上升而增加。结论:85%乙醇冷浸提取穿心莲中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和总黄酮效果最好, 微波辅助提取则充分表现出时间短、效率高、能耗少的特点。关键词穿心莲; 穿心莲内酯; 脱水穿心莲内酯; 总黄酮中图分类号:R28412文献标识码:A 文章编号:100124454(2009 0721141203穿心莲为爵床科植物穿心莲A ndrograph is pan 2iculata (Bur m 1f 1 Nees 的干燥地上部分, 常用于感冒发热、咽喉肿痛、泄泻痢疾、痈肿疮疡、毒蛇咬伤的治疗用1 。近