ca-50培训教材

1、12 正常止血功能是维持生命所必须的生理功正常止血功能是维持生命所必须的生理功能，包括三个基本因素：能，包括三个基本因素：血管收缩血管收缩血小板凝聚成白色血栓血小板凝聚成白色血栓形成纤维蛋白凝块形成纤维蛋白凝块 整个止血过程大致可分为四期：整个止血过程大致可分为四期：血管期血管期血小板期血小板期血浆期血浆期(血液凝固期血液凝固期)血栓动力学变化期血栓动力学变化期 上述过程同时触发，相互关联而交织，不上述过程同时触发，相互关联而交织，不能截然分开能截然分开3由出血开始到出血停止的整个过程由出血开始到出血停止的整个过程血浆形成纤维蛋白凝块的过程血浆形成纤维蛋白凝块的过程凝血是一系列凝血因子依次相凝

2、血是一系列凝血因子依次相继被激活的过程，分为三个阶段：继被激活的过程，分为三个阶段： 第一阶段：凝血活酶的形成第一阶段：凝血活酶的形成 第二阶段：凝血酶原转变为凝血酶第二阶段：凝血酶原转变为凝血酶 第三阶段：纤维蛋白原转变成纤维蛋白第三阶段：纤维蛋白原转变成纤维蛋白 内源凝血系统内源凝血系统表面接触表面接触aaaCa+ +Ca+ +PF3a +Ca+PF3血小板凝聚并释放血小板凝聚并释放凝血活酶凝血活酶凝血酶原（凝血酶原（II）第一阶段第一阶段磷脂磷脂凝血酶（凝血酶（IIa）+Ca+蛋白质部分蛋白质部分外源凝血系统外源凝血系统组织因子组织因子第二第二阶段阶段XIII纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白

3、单体纤维蛋白单体可溶性纤维蛋白可溶性纤维蛋白XIIIa+不溶性纤维蛋白不溶性纤维蛋白多肽多肽A、B第三第三阶段阶段Ca+凝块凝块a +Ca+5因因子子同同义义名名称称功功能能作作用用途途径径丝丝氨氨酸酸蛋蛋白白酶酶依依赖赖VKI纤纤维维蛋蛋白白原原底底物物共共同同-II凝凝血血酶酶原原酶酶原原共共同同+III组组织织因因子子辅辅因因子子全全部部-IV钙钙离离子子辅辅因因子子全全部部-V易易变变因因子子辅辅因因子子共共同同-VI不不存存在在VII稳稳定定因因子子酶酶原原外外源源+VIII抗抗血血友友病病因因子子辅辅因因子子内内源源-IXChristmas 因因子子酶酶原原内内源源+XStuat-

4、Prower 因因子子酶酶原原共共同同+XI血血浆浆凝凝血血活活酶酶前前加加速速素素酶酶原原内内源源+-XII接接触触因因子子酶酶原原内内源源+-XIII纤纤维维蛋蛋白白稳稳定定因因子子酶酶原原共共同同转转酰酰胺胺酶酶-PK激激肽肽释释放放酶酶原原酶酶原原内内源源+-HMWK高高分分子子量量激激肽肽原原辅辅因因子子内内源源-6 常用筛选检测：简易、快速、费用低廉常用筛选检测：简易、快速、费用低廉 PT: 凝血酶原时间凝血酶原时间 APTT：活化部分凝血活酶时间：活化部分凝血活酶时间 Fbg： 纤维蛋白原含量纤维蛋白原含量 TT： 凝血酶时间凝血酶时间 Plt ：血小板计数：血小板计数 Fdp：

5、纤维蛋白降解产物：纤维蛋白降解产物PT, APTT, Fbg ,TT常作为凝血机制的四个常规项常作为凝血机制的四个常规项(简称凝血四项简称凝血四项)7 确诊检测：特异、较繁琐、费用较高确诊检测：特异、较繁琐、费用较高 内源性、外源性凝血因子内源性、外源性凝血因子 TTO、NT、AT-、PLG、2-AP、PC、FDP、D-二聚体二聚体 其他其他: 血管病变、血小板功能估计、纤溶系血管病变、血小板功能估计、纤溶系 统检查统检查8PT, APTT, Fbg ,TT常作为凝血常作为凝血机制的四个常规项目机制的四个常规项目(简称凝血四项简称凝血四项)9 以以PT秒数秒数(S)报告；可同时报正常人报告；可

6、同时报正常人PT秒数秒数(S) 以患者血浆以患者血浆PT(S)/正常对照正常对照PT(S)的比率的比率(PTR)报告报告 在口服华法令类抗凝药物治疗监控时，应报告国际在口服华法令类抗凝药物治疗监控时，应报告国际标准化比率标准化比率(INR)INR=PTRISIINR=Antilog(ISIlogPTR) ICSH规定，不再用稀释曲线或百分比规定，不再用稀释曲线或百分比(活动度活动度)报告报告10 国际敏感度指数国际敏感度指数(ISI)为使不同敏感性的组织凝血活酶在检测为使不同敏感性的组织凝血活酶在检测中能得到同样的结果所制定的共同敏感中能得到同样的结果所制定的共同敏感性指标性指标11 病人病人

7、 秒数秒数 PTR INR ISI 2.5试剂试剂 20.8 1.66 3.55 ISI 1.2试剂试剂 35.6 2.87 3.54 ISI 1.0试剂试剂 42.3 3.50 3.50关于用关于用INR报告报告PT检测结果检测结果12关于用关于用INR报告报告PT检测结果检测结果 INR的优势：的优势：1. INR可以直接反映最合适的抗凝可以直接反映最合适的抗凝剂使用剂量剂使用剂量(1.53.0),增加病人的增加病人的安性。安性。 13疾病名称及治疗手段疾病名称及治疗手段PT-INR 控制范围控制范围深部静脉血栓预防深部静脉血栓预防腰部、大腿骨折手术腰部、大腿骨折手术深部静脉血栓治疗深部静

8、脉血栓治疗肺梗塞治疗肺梗塞治疗一次性脑缺血治疗一次性脑缺血治疗反复性深部血栓治疗反复性深部血栓治疗反复性肺梗塞治疗反复性肺梗塞治疗心肌梗塞心肌梗塞(含动脉疾病含动脉疾病)治疗治疗心脏人工瓣膜换后心脏人工瓣膜换后1.52.52.02.52.02.82.02.82.02.82.53.02.53.02.53.02.53.014关于用关于用INR报告报告PT检测结果检测结果 INR的优势：的优势： 2. 使用使用INR报告报告PT，可纠正由不同类仪，可纠正由不同类仪器、不同试剂所产生的结果差异和变器、不同试剂所产生的结果差异和变化化(INR=PTRISI)实现实验室间结果的标实现实验室间结果的标准化和

9、可比性准化和可比性15仪器特有仪器特有ISI同一种同一种PT试剂在不同的仪器上测定，其试剂在不同的仪器上测定，其ISI是不是不同的，不同仪器的同的，不同仪器的ISI数值就是数值就是“仪器特有的仪器特有的ISI”“仪器特有仪器特有ISI”的标定：的标定：采用已标有采用已标有INR的冻干血浆，对的冻干血浆，对“仪器特有的仪器特有的ISI”进行标定，以使结果具有可比性。进行标定，以使结果具有可比性。16不同仪器的不同仪器的“仪器特有仪器特有ISI”数值：数值：仪器型号仪器型号ISI数值数值SYSMEX CA-50 1.05CA-500 1.05CA-1500 1.02CA-6000 1.01某磁珠法

10、血凝仪某磁珠法血凝仪 1.21资料来源：Dade Behring PT试剂说明书17 规定试剂生产厂商的产品必须标有规定试剂生产厂商的产品必须标有ISI ISI愈接近愈接近1.0，试剂愈敏感。，试剂愈敏感。 敏感的试剂可得到较好的准确度和精确度。建敏感的试剂可得到较好的准确度和精确度。建议选用接近议选用接近1.0的试剂。的试剂。 ISI越大，越大，INR换算的误差也越大换算的误差也越大18 口服抗凝剂的监测口服抗凝剂的监测INR 肝疾患严重程度的分类肝疾患严重程度的分类 延长秒数延长秒数 重症肝炎的诊断标准重症肝炎的诊断标准活性活性% DIC诊断标准诊断标准PT比比 外因系出血筛选外因系出血筛

11、选秒数和秒数和PT比比 手术前常规检查手术前常规检查秒数和秒数和PT比比19 肝素治疗的监测肝素治疗的监测 APTT比比(1.5 2.5) 内源性出血筛选内源性出血筛选 手术前常规手术前常规(代替凝血时间代替凝血时间) 血栓倾向的诊断血栓倾向的诊断 抗凝物质的检测抗凝物质的检测（狼疮抗凝因子等）（狼疮抗凝因子等） DIC的诊断的诊断 20 机体感染、炎症的诊断机体感染、炎症的诊断 心脑血管疾病的诊断心脑血管疾病的诊断 血栓倾向的诊断血栓倾向的诊断 抗凝物质的检测抗凝物质的检测 DIC的诊断的诊断 抗凝物质的检测及抗凝治疗的监控抗凝物质的检测及抗凝治疗的监控21仪器仪器检测仪器仪器检测检测原理检

12、测原理 生物学检测原理生物学检测原理(凝固法凝固法) 生物化学检测原理生物化学检测原理(发色底物法发色底物法) 免疫学检测原理免疫学检测原理生物学原理生物学原理(凝固法凝固法)检测检测 电流法电流法 磁珠法即粘度法磁珠法即粘度法 光学法光学法22第一阶段：对手工方法的简单模仿第一阶段：对手工方法的简单模仿电流测定法电流测定法 将两个正负电极插入检测样品中，其中一个电极上下运将两个正负电极插入检测样品中，其中一个电极上下运动，两个电极都在反应液中时电流接通，离开时电流切动，两个电极都在反应液中时电流接通，离开时电流切断。样本凝固后，电极上升时钩起纤维蛋白丝使两个电断。样本凝固后，电极上升时钩起纤

13、维蛋白丝使两个电极保持连接使电流仍然接通。此即为检测终点。极保持连接使电流仍然接通。此即为检测终点。带钩的电极带钩的电极上上下下往往复复运运动动23第二阶段：通过物理特性的变化进行检测第二阶段：通过物理特性的变化进行检测磁珠法磁珠法 检测杯中放一磁珠，与杯外金属杆紧贴成一直线，标本检测杯中放一磁珠，与杯外金属杆紧贴成一直线，标本凝固后，由于纤维蛋白形成使磁珠移位而偏离金属杆，凝固后，由于纤维蛋白形成使磁珠移位而偏离金属杆，被仪器检出为凝固终点。如图所示：被仪器检出为凝固终点。如图所示：金属杆金属杆恒温器恒温器转动轴转动轴磁珠磁珠24第三阶段：采用最具敏感性的检测手段第三阶段：采用最具敏感性的检

14、测手段(一一) 光学透射比浊法：光学透射比浊法：当样品杯中的血浆在凝固过程中纤当样品杯中的血浆在凝固过程中纤维蛋白原变成纤维蛋白时，透射光的强度减小，仪器维蛋白原变成纤维蛋白时，透射光的强度减小，仪器定时记下光强值，然后自动报告凝固的最初终点。定时记下光强值，然后自动报告凝固的最初终点。光源光源平行光栅平行光栅样本样本试剂试剂光电探测器光电探测器放大器放大器显示器显示器25第三阶段：采用最具敏感性的检测手段第三阶段：采用最具敏感性的检测手段(二二) 光学散射比浊法：光学散射比浊法：当样品杯中的血浆在凝固过程中由纤维当样品杯中的血浆在凝固过程中由纤维蛋白原变成纤维蛋白时，散射光的强度增大，仪器定

15、时记蛋白原变成纤维蛋白时，散射光的强度增大，仪器定时记下光强值，然后自动报告凝固的最初终点。下光强值，然后自动报告凝固的最初终点。散射光强度散射光强度时间时间STEP1STEP2 STEP3STEP4标本标本发射光二极管发射光二极管光电二极管光电二极管26刚加入试剂，凝固反应还没开始时的散射光水平为刚加入试剂，凝固反应还没开始时的散射光水平为0%，凝，凝固反应结束后的散射光水平为固反应结束后的散射光水平为100%，把，把50%作为凝固时间。作为凝固时间。正常标本正常标本异常标本异常标本散射光强度散射光强度时间时间时间时间100%0%0%0%100%100%乳糜血浆乳糜血浆低纤维蛋白原血浆低纤维

16、蛋白原血浆27 只要散射光有微弱的变化，就能检测出凝固时间。只要散射光有微弱的变化，就能检测出凝固时间。 当标本含有干扰物当标本含有干扰物(黄疸、溶血、高脂血症等黄疸、溶血、高脂血症等)时，时，作为起始点作为起始点0%的基线会随之上移。的基线会随之上移。 当测定低纤维蛋白原血症的特殊标本时，作为起当测定低纤维蛋白原血症的特殊标本时，作为起始点始点0%的基线会随之下移。的基线会随之下移。 具有很强的抗干扰能力，解决了早期光学法抗干具有很强的抗干扰能力，解决了早期光学法抗干扰能力差，无法测定异常标本的问题。扰能力差，无法测定异常标本的问题。2829 1984 CA-100 1985 CA-3000

17、 1986 CA-4000 1990 CA-5000 1992 CA-1000 1996 CA-60001997 CA-500 Series1998 CA-1500 Series1999 CA-50 Series2000 CA-7000 Series30 Sysmex 公司公司1999年最新推出。年最新推出。 集半自动血凝仪各家之长，达到全自集半自动血凝仪各家之长，达到全自动的精密度。动的精密度。 灵敏度高，重复性好，集成度高，操灵敏度高，重复性好，集成度高，操作简便。作简便。31 早期半自动血凝仪的问题早期半自动血凝仪的问题 每个人做的结果不一样每个人做的结果不一样 重复性及准确性较差的影响

18、因素：重复性及准确性较差的影响因素：无搅拌功能无搅拌功能标本加温时间不定标本加温时间不定 添加试剂时间不定添加试剂时间不定添加试剂产生气泡影响结果添加试剂产生气泡影响结果无处理黄疸、溶血、高脂血标本的功能无处理黄疸、溶血、高脂血标本的功能注：准确性差的半自动做发色底物方法无意义注：准确性差的半自动做发色底物方法无意义 32散射光加百分比散射光加百分比(去本底去本底)测定原理：测定原理： 黄疸、溶血、高脂血症标本也可准确测定。黄疸、溶血、高脂血症标本也可准确测定。半自动的仪器，全自动的精确性：半自动的仪器，全自动的精确性： 添加试剂时，通过感应器自动振动，使试剂同血浆充分混添加试剂时，通过感应器

19、自动振动，使试剂同血浆充分混匀。匀。 预温、混匀、测试均在检测部进行，从而避免人为误差。预温、混匀、测试均在检测部进行，从而避免人为误差。 预温时间、试剂添加最佳时间，仪器自动告知。预温时间、试剂添加最佳时间，仪器自动告知。 通过移液器导板最佳角度添加试剂，防止气泡影响结果。通过移液器导板最佳角度添加试剂，防止气泡影响结果。两种纤维蛋白原测定方法两种纤维蛋白原测定方法: PT演算法演算法(derive法法)节约试剂。节约试剂。 国际标准定量法国际标准定量法(clauss法法)可对高值、低值标本准确可对高值、低值标本准确定量。定量。四通道、半量法、二重测定四通道、半量法、二重测定(报告平均值报告

20、平均值)： 可可4个项目同时测定，半量法节约试剂。个项目同时测定，半量法节约试剂。中文提示、打印机内置中文提示、打印机内置33测试功能：测试功能： PT、APTT、Fbg、TT、TTO、NT 外源因子外源因子(II、V、VII、X)量量 内源因子内源因子(VIII、IX、XI、XII)量量运算功能：运算功能： 凝血试验活性百分比凝血试验活性百分比 肝激酶活性百分比肝激酶活性百分比 纤维蛋白原浓度纤维蛋白原浓度(mg/dL、g/L) PT比、比、INR打印功能：打印功能： 内置打印机，可打印测试结果、质控图校及标准曲线等。内置打印机，可打印测试结果、质控图校及标准曲线等。质控功能：质控功能： 三

21、种质控文件三种质控文件(QC1-QC3),每个文件可存每个文件可存50个数据，个数据，14个测试项目。个测试项目。34CA-50较好地解决了早期半自动血凝仪存在的准确较好地解决了早期半自动血凝仪存在的准确性和精确性的问题性和精确性的问题 采用敏感、抗干扰的光学散射光测定和百分比凝固点检采用敏感、抗干扰的光学散射光测定和百分比凝固点检测方法，具有处理黄疸、溶血、高脂血标本的功能测方法，具有处理黄疸、溶血、高脂血标本的功能 添加试剂后，能进行及时、充分的混合。添加试剂后，能进行及时、充分的混合。 对加热、恒温的位置和时间予以标准化处理，并且预温对加热、恒温的位置和时间予以标准化处理，并且预温和反应

22、能在同一个位置进行。和反应能在同一个位置进行。 对试剂添加时间予以标准化处理，并对操作者进行提示对试剂添加时间予以标准化处理，并对操作者进行提示 固定试剂的添加角度和位置，避免产生气泡影响结果固定试剂的添加角度和位置，避免产生气泡影响结果 确保仪器具有更低的运行成本和更高的性能价格比确保仪器具有更低的运行成本和更高的性能价格比 35浓度浓度(mg/L)PT(S)APTT(S) Fbg(mg/L)012.828.9252646012.829.2252692012.829.42580138012.929.02474184012.829.32508230012.829.22458276012.929

23、.12474322013.029.42408368013.029.42458414013.128.92579460013.129.32492血红蛋白对血红蛋白对CA-50测定结果的影响测定结果的影响资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317 36浓度浓度PT(S)APTT(S) Fbg(mg/L)012.827.8312224012.828.2302248012.727.9320172012.728.0312196012.628.03070120012.727.93096144012.728.43174168012.827.42997192012.827.33070

24、216012.928.03973240012.828.03070 乳脂蛋白对乳脂蛋白对CA-50测定结果的影响测定结果的影响浓度单位：Formazine浊度单位资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P31531737浓度浓度(mg/L)PT(S)APTT(S) Fbg(mg/L)0.013.229.2288218.213.228.7302636.413.229.0295254.613.229.2293072.813.129.2282991.013.030.32930109.213.031.32841127.413.030.02950145.613.131.02816163.8

25、13.331.12973182.013.331.62904 游离胆红素对游离胆红素对CA-50测定结果的影响测定结果的影响资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P31531738浓度浓度(mg/L)PT(S)APTT(S) Fbg(mg/L)0.012.428.4314819.612.228.6302139.212.428.6317428.812.228.4306478.412.228.7285698.012.628.42940117.612.628.33148137.212.528.82994156.812.228.93070176.412.429.83096196.012

26、.630.13148 结合胆红素对结合胆红素对CA-50测定结果的影响测定结果的影响资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P31531739x(均值均值)sCVx(均值均值)sCVPT(s)12.080.131.112.950.221.7APTT(s)32.010.441.431.171.053.4Fbg(mg/L)233759.32.5250678.003.1F (s)48.320.290.648.260.481.0批间批间日间日间质控物质控物资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317质控物为正常水平的质控物 40 x(均值均值)sCVx(均值均

27、值)sCVPT(s)36.190.491.440.250.751.9APTT(s)54.650.661.252.822.614.9Fbg(mg/L)101414.21.495339.604.2F (s)61.590.340.661.180.570.9批间批间日间日间质控物质控物资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317质控物为异常水平的质控物 41资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317 42资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317 43资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317

28、 44 45 CA-50具有良好的检测精密度具有良好的检测精密度 与与CA-6000、CA-500等全自动血凝仪的测等全自动血凝仪的测定结果具有良好的相关性定结果具有良好的相关性 干扰试验结果表明，干扰试验结果表明，CA-50具有较强的抗干具有较强的抗干扰能力扰能力资料来源：中华检验医学杂志2000年9月第23卷第5期，P315317 46 由于仪器、试剂不同，很难统一规定参考值由于仪器、试剂不同，很难统一规定参考值 实验室参考值实验室参考值 每年或实验条件变化时应建立实验室参考值每年或实验条件变化时应建立实验室参考值 参考值测定的参考值测定的一切一切条件均应与患者测定条件相同条件均应与患者测

29、定条件相同 健康供血者：健康供血者： 至少至少20个个1855岁男性和非妊娠、月经期妇女，不服岁男性和非妊娠、月经期妇女，不服药并在平静状态下采血。药并在平静状态下采血。 应分开几天采血、测定，以减少天间误差应分开几天采血、测定，以减少天间误差 用统计学处理测定结果：用统计学处理测定结果：2SD或或95%可信限为参可信限为参考范围。对考范围。对3SD应结合实际情况进行评估。应结合实际情况进行评估。 47 采血试管、注射器及血浆容器应用硅化玻璃或塑采血试管、注射器及血浆容器应用硅化玻璃或塑料制成。料制成。 针头不应小于针头不应小于21Gauge(0.81mm)。 采血前不应拍打前臂。采血前不应拍打前臂。 采血要顺利，不可损伤血管及周围组织，致使组采血要顺利，不可损伤血管及周围组织，致使组织液混入血液。