β-内酰胺酶在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

1、-内酰胺酶在肝细胞肝癌中的表达及临床意义背景肝细胞肝癌(HepatocellularCarcinoma,HCC)简称为肝癌,是消化系统最为常见的原发性恶性肿瘤。相关调查显示,每年约有100万新发的肝细胞肝癌的病例被检测出来,其中,超过三分之二的新病例分布在西太平洋地区1。肝细胞肝癌的死亡率居全球第二位,最新研究数据显示,在全世界由恶性肿瘤造成的死亡事件中，肝细胞肝癌所占的比例最高2。HCCM有起病隐匿、高度恶性和快速进展的特征，且HCC患者的早期诊断仍是一个尚未被攻克的巨大挑战。大多数患者在月中瘤已发展为晚期时才得到明确诊断,而HCC勺常用治疗方案如外科切除、肝移植、射频消融等手术治疗的禁忌症

2、较多,因此,通过上述手术疗法来达到根治肝癌的目标的几率很低3,4o有研究显示HCC台疗后的1年总体生存率较为良好,为66.1%,而3年、5年总体生存率则分别降至39.7%和32.5%;在早期HCO者中分别为93.5%、70.1%59.1%5。但由于缺乏灵敏的早期诊断方法，HCC的病死率依然很高。鉴于目前HCC台疗方法尚未被攻克的局限性，确定HCCg生的分子机制并开发新的早期诊断和预后预测策略至关重要。越来越多的证据表明，代谢失调尤其是异常脂质代谢在包括HCCS内的月中瘤进展中发挥着巨大作用6-9。B-内酰胺酶(beta-lactamase,LACTB)主要位于哺乳动物有核细胞的线粒体内,在人体

3、的不同组织中普遍存在,特别是在骨骼、心脏、肌肉和肝脏。作为哺乳动物活性位点丝氨酸蛋白，LACTB与细菌青霉素结合蛋白在进化上相关。LACTBM作为线粒体内膜组织和能量稳态白调节因子参与脂质代谢的调节，继而抑制肿瘤进展,同时作为细胞代谢过程的新型蛋白酶同源物起作用10。此外，研究表明LACTBft一些恶性月中瘤如乳腺癌11、胶质瘤12、胃癌13和结直肠癌14,15中的表达低于癌旁组织，过表达LACTBM以抑制月中瘤细胞的增殖。以上研究表明LACTB作为一种新型的表观遗传沉默月中瘤抑制因子，在月中瘤的进展中发挥着重要作用。然而,LACTB在HCCfr的表达情况和功能作用在很大程度上仍未被探索。目的

4、1.探究LACTBft肝细胞肝癌中表达水平的具体情况：分析TCG徽据库中LACTBmRNtt肝癌及癌旁组织中的转录水平是否有差异，以及LACTBmRN录水平与肝癌患者TN/期、病理学分级和整体生存率(Overallsurvivalrate,OSR)的相关性；探究LACTB&郑州大学队列的肝癌及癌旁组织中的表达水平是否有差异，以及LACTBfe达水平与肝癌患者TN/期、病理学分级和整体生存率的相关性；2.探究过表达LACTB寸肝癌细胞的表型的影响：体外过表达LACTB寸肝癌细胞的增殖、迁移和彳！袭等生物学行为的影响；体内实验验证过表达LACTB寸裸鼠成瘤能力的影响。方法:1.下载TCGA

5、(thecancergenomeatlas)数据库中肝癌患者的临床信息以及LACTBmRNK录水平相关数据进行筛选和整合，分别分析LACTBmRNA肝癌及配对的癌旁组织中的转录水平,及LACTBmRNK录水平与肝癌患者TNM分期、病理学分级和总生存率的相关性。2.选取341例肝细胞肝癌患者的组织标本,这些患者于2011年至2015年就诊于郑州大学第一附属医院,且经过病理诊断确诊为肝癌。利用这些标本构建组织微阵列(Tissuemicroarray,TMA)备用。3.采取免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色法检测临床组织样本中LACTE©白质表达水平，并分析

6、肝癌组织中LACTBfe达水平与患者的临床病理特征的相关性及其对肝癌预后的影响。4.利用慢病毒转染技术过表达LACTB并经蛋白印迹方法确认后，采取CCK-8实验、EdU染色实验和克隆形成实验检测肝癌细胞的增殖能力，采取细胞划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力。5.采用表达LACTB勺肝癌细胞注射到裸鼠皮下,利用活体成像仪记录皮下肿瘤的生长速度,6周后处死小鼠取出月中瘤，并利用IHC方法检测LACT吸Ki-67的表达情况。6.采用GraphPadPrism软件（7.0版）和SPS漱件（版本23.0）分析统计数据。采用卡方检验来检测LACTBfe达水平与肝癌患者临床病理学特

7、征的相关性，采用t检验用于比较组间差异；采用Kaplan-Meier生存分析探究不同的LACT眼达水平对肝癌预后的影响。结果:1.TCGA分析结果显示，LACTBmRN的肝癌组织中的表达水平比正常组织明显降低；LACTB的表达水平在具有高病理学分级的患者中显著低表达，而在不同TNMffiW;患者中LACTB勺表达水平则未表现出明显的差异。2.Kaplan-Meier分析显示LACT日氐表达的肝癌患者总体存活率（Overallsurvival,OS）和无复发生存率（Relapse-freesurvival,RFS）显著低于LACTBW表达的患者。GSE期析结果显示，与肝癌患者生存负相关的基因显著富集于LACT日氐表达组，相反，与肝癌存活正相关的基因显著富集于LACTBW表达组。3.免疫组化染色结果显示肝癌组织中LACTBg白表达水平显著低于配对的癌旁组织；LACTB表达在TN/期I-II和III-IV之间存在显著差异，并且在高TNg级的组织中表达更低。4 .LACTB低表达的肝癌患者总体存活率（OS）显著低于LACTBW表达的患者。由单、多因素分析可知，低表达LACTBffi高级别TN*期是肝癌患者独立预后危险因素。5 .体外细胞实验的结果显示，过表达LACTM以显著抑制肝癌细胞在体外的增殖、迁移及侵袭能力。6.体内实验结果显示，过表达LACTB寸于肝癌细胞在体内的成