平阳霉素局部注射对鼻息肉病息肉组织病理学的影响

1、平阳霉素局部注射对鼻息肉病息肉组织病理学的影响                     作者：杨妙丽张向红邹纪东李宝树任晓勇石季 【摘要】  目的 通过观察平阳霉素治疗前后鼻息肉病息肉组织的病理变化情况，探讨平阳霉素治疗鼻息肉病的机制。方法 应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL法)检测凋亡细胞，与相邻连续的HE染色片对位对照观察嗜酸性粒细胞的凋亡情况。结

2、果 平阳霉素治疗前鼻息肉组织嗜酸性粒细胞表达显著高于正常下鼻甲(P<0.01)；治疗后鼻息肉组织中的嗜酸性粒细胞表达明显低于治疗前(P<0.01)；治疗后鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞的凋亡指数高于治疗前(P<0.01)。结论 嗜酸性粒细胞是鼻息肉病息肉组织中主要的浸润炎细胞；平阳霉素可通过促进嗜酸性粒细胞凋亡达到治疗鼻息肉病的目的。 【关键词】  平阳霉素； 鼻息肉病； 病理学影响Pathological effects on nasal polyposis tissueafter bleomycin A5 local injectionABSTRACT: Object

3、ive  To study the pathological effects on nasal polyposis tissue after bleomycin A5 local injection. Methods  Totally 119 cases of nasal polyposis specimen obtained before and after treatment with bleomycin A5 were studied with terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick endlab

4、eling(TUNEL). Results  The number of eosinophils in nasal polyposis specimen before treatment was significantly higher than that after treatment (P<0.01) and normal inferior turbinate concha mucosa (P<0.01). The apoptosis index(AI) of eosinophil after treatment was significantly higher th

5、an that before treatment (P<0.01). Conclusion  Eosinophil is the main infiltration cell in nasal polyposis tissue. Bleomycin A5 could cure nasal polyposis by promoting eosinophil apoptosis.KEY WORDS: bleomycin A5; nasal polyposis; pathological effect鼻息肉病为鼻部常见病，其治疗有一定难度，息肉复发是临床难题之一。目前认为，嗜酸性粒细

6、胞是鼻息肉组织中主要浸润炎细胞，嗜酸性粒细胞及其分泌的多种细胞因子在鼻息肉的生长过程中扮演着重要角色。本研究旨在通过观察平阳霉素局部注射治疗前后的鼻息肉病患者息肉组织标本中炎细胞数量变化特别是嗜酸性粒细胞凋亡情况，探讨平阳霉素治疗鼻息肉病的机制1。1  材料与方法1.1  研究对象  选取本院2001年9月至2006年9月门诊鼻息肉病患者119例，男62名，女57名，年龄最小25岁，最大82岁，平均年龄56岁。根据1997年海口标准分型2：2型64例(其中1期19例，2期21例，3期24例)，3型55例。于治疗开始前1个月完全停用抗生素和激素类药物。常规胸部影像学

7、检查，排除有肺部疾患患者。1.2  治疗方法  术前胸部X线检查及血尿常规化验均正常者，可接受治疗。取平阳霉素(天津太河制药有限公司生产)1支(8mg)用20mL/L利多卡因4mL和生理盐水4mL溶解，行息肉内注射。首次每侧注射2mg，观察24h，如无不良反应，从第2次起每侧注射4mg，每周1次。用细长针头自息肉前端进针，边推药边缓缓向后推进，以注药后息肉变苍白、肿胀为佳。每5-7d重复注射1次，5次为一疗程。根据1997年海口疗效评定标准2，治愈57例，好转62例，无效0例。治愈率36.8%，好转率63.2%。对于好转的62例，继续行息肉摘除术治疗，术中出血(术前及术中均

8、未用止血剂)<30mL。治疗后随访6-18个月，未见复发。1.3  标本处理  分别于平阳霉素局部注射治疗前及一个疗程结束后1周取鼻息肉病患者鼻息肉组织。另取108例中隔矫正术者下鼻甲黏膜组织作正常对照。取材后，标本迅速用10%(体积分数)甲醛固定，常规石蜡包埋，备用。每例标本均连续切片2片，1片进行原位细胞凋亡检测，另1片作HE染色，以计数嗜酸性粒细胞并与原位细胞凋亡检测片对照。1.4  TUNEL法检测细胞凋亡  细胞凋亡检测试剂盒1(POD)购自武汉博士德生物技术有限公司。操作按说明：石蜡切片常规脱蜡入水；新鲜配制3%(体积分数)乙酸室温10

9、min，蒸馏水洗2min×3；1200稀释Proteinase K消化8min；每张切片取TdT、DIGdUTP各1L加入18L标记缓冲液中，37标记2h；封闭液50L室温30min，不洗；用封闭液1100稀释生物素化地高辛抗体50L/片，37 30min；1100稀释辣根过氧化物酶标记链霉卵白素液50L/片，37 30min；DABH2O2液室温、显微镜下控制显色15min左右；苏木素复染细胞核，常规脱水、透明、中性树胶封片。    (注：-每步完后均用0.1mol/L TBS液充分洗3min×2次)。1.5  嗜酸性粒细胞凋亡的判

10、定标准  凋亡阳性细胞核呈棕褐色染色。与相邻的HE染色片作对位对照观察，辨别凋亡阳性嗜酸性粒细胞。采用双盲法高倍镜(×400)下随机计数10个视野，分别计数凋亡阳性和阴性的嗜酸性粒细胞，并计算嗜酸性粒细胞凋亡指数(apoptosis index, AI)。AI凋亡阳性嗜酸性粒细胞数/嗜酸性粒细胞总数×100%。1.6  统计学分析  应用SPSS 11.0统计软件对数据进行统计分析，治疗前后炎细胞数量的变化采用配对t检验，治疗组与对照组间的比较采用独立样本t检验。2  结果2.1  治疗前后鼻息肉病息肉组织中炎细胞的表达&#

11、160; 治疗前、后鼻息肉组织及对照组下鼻甲黏膜中均有数量不等的嗜酸性粒细胞、浆细胞、淋巴细胞存在。治疗前鼻息肉组织与对照组间嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量均存在明显差异(P<0.05)，浆细胞在两组间无差异(P>0.05)。治疗后鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量比治疗前明显减少，具有显著性差异(P<0.01)，浆细胞数量也有减少，但无统计学意义(P>0.05，表1)。表1  鼻息肉病治疗前后和正常对照组炎细胞数量的比较（略）Table 1  Effect of bleomycin treatment on inflammatory cells

12、 in nasal polyp*P<0.05 vs. control; P<0.01 vs. before treatment2.2  治疗前后鼻息肉病息肉组织中嗜酸性粒细胞凋亡的改变  用TUNEL法检测，阳性细胞(凋亡细胞)的细胞核呈棕褐色染色。    嗜酸性粒细胞凋亡指数治疗前为(20.53±7.66)%，治疗后为(44.47±8.97)%。由配对t检验得t=3.602，P<0.01，显示平阳霉素治疗前后嗜酸性粒细胞凋亡指数有极显著性差异(图1、2)。图1  鼻息肉病治疗前嗜酸性粒细胞凋亡情况（略）Fig.1 Inflammatory cells in nasal polyp before treatmentthere were more eosinophile granulocytes and fewer apoptotic cells than the controls (TUNEL ×400)图2  鼻息肉病治疗后嗜酸性粒细胞凋亡情况（略）Fig.2 Inflammatory cells in na