实验报告-微生物(共4页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上实验报告王唯一 精94 同组人：刘昕 汪梦婕I 环境中微生物的监测和分离纯化一、实验目的1. 学习并掌握无菌操作技术原理和方法2. 学习用稀释涂布法分离微生物3. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理二、实验原理 为微生物提供适宜培养它的营养、酸碱度、温度和氧等条件，使其正常生长。三、实验材料与试剂1、土样10g，无菌生理盐水2、取液器（1000微升 1支），培养箱，培养皿，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000微升无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架四、实验步骤（一）培养基的制备按以下步骤制备牛肉膏蛋白胨平板培养基，每组1820个平板成分：牛肉

2、膏1.5g，蛋白胨3g, 氯化钠1.5g, 自来水300ml制法：1. 于500ml三角瓶内加入以上成分，混合溶解。2. 调pH至7.47.63. 加入56g琼脂4. 0.1Mpa灭菌20分钟，冷却到60度左右，采用叠皿法把培养基倒入灭好菌的90mm培养皿中，制作无菌平板，凝固后倒置待用。（二）周围环境中微生物的检测在牛肉膏蛋白胨培养及平板上做如下实验：1. 取一个培养皿，分区，做好标记，分别于培养基不同区内接种实验手套、书、餐卡、手表上的细菌（进行涂抹）2. 取一个培养基，分区，分别用未细的手指、自来水洗过的手指、洗手液洗过的手指、肥皂洗过的手指涂抹培养基将以上培养基用报纸包好倒置于37度培

3、养箱里培养24小时观察结果 （三）从土壤中分离微生物 1. 采土样 选择较肥沃的土壤，铲去表层土，挖520cm深的土壤数十克，装入已灭菌的牛皮纸袋，封好袋口，做好编号记录，带回实验室共分离用。2. 制备土壤稀释液称取土样1g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，置摇床震荡5分钟使土壤均匀分散成为土壤悬液。用1ml的无菌吸头从中吸取1ml土壤悬液，注入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，吹吸三次，震荡均匀，制成稀释度为10-4的土壤溶液。逐次取1ml土壤溶液分装到灭菌后的Eppendorf管中，发给每个小组备用。3. 涂布用一只新的无菌吸头，由稀释好的土壤稀释液中吸取100微升，较

4、均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂布均匀，一定要多涂几遍，从概率角度来说，涂布时间越长越好（12分钟），使细菌均匀分布，此步是实验成功的关键。4. 培养将牛肉蛋白胨培养基平板倒置于37度温箱中培养24小时，统计所长出的菌落数。5. 菌落计数培养24小时后，取出培养平板，算出同一小组几个平板上的菌落的平均数，换算出土样中的菌数。土壤中的细菌含量（个/g土壤）= 菌落平均数*10*稀释倍数有较大片菌苔生长时，弃用，以无大片菌苔生长的培养皿计数；若成片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数*2五、实验结果（试验品/菌落数）1. 手套 27 书 4 餐卡

5、 3 手表 222. 未洗的手指 34自来水洗过的手指 33洗手液洗过的手指 1肥皂洗过的手指 10243. 土壤30，18，12（*10*稀释倍数=细菌含量）（三个样本）六、实验讨论1. 无菌操作要在酒精灯旁进行，同时不能离火焰太近；培养皿的盖要开小一点，以免空气中杂菌混入；操作要迅速。2. 日常生活中吃剩的食物要尽量密封保存，如加保鲜膜，饭前要洗手3. 在锅中盖着锅盖可以避免空气中杂菌的进入，且锅内环境不适宜细菌生长，因此不易坏，而在碗中食物没有与空气隔绝，且开放的环境与室温适宜细菌生长，因此易变质。4.由于未洗的手与用自来水洗过的手上菌落数基本相当，且都远远小于用肥皂洗过的手上的菌落数，

6、因此反复洗手对灭菌并无作用。对于实验结果：手指的检测结果数据相差较大，可能由于涂抹时用力不同导致接触面积不同从而使菌落数不同，今后实验时要注意尽量注意控制变量，在其他条件相同的情况下比较结果才更可靠。II 固定化酵母细胞发酵啤酒实验与酸奶制作一、 实验目的1. 了解固定化细胞技术的方法和意义2. 了解酵母发酵产生啤酒的过程3. 学习酸奶制作方法4. 了解纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的差别二、 实验原理1. 固定化技术固定化技术就是将生物酶或细胞固定在一定的基质上。由于在制定固定化细胞时，细胞和载体不起任何反应，细胞处于最佳生理状态；同时固定化细胞有载体作为屏障，可避免外界不利因素的影响，因

7、此能迅速增值；增殖酵母凝集在凝胶表面形成浓厚的菌体层，因此酵母能迅速与基质接触，从而缩短周期，提高啤酒产量。2. 啤酒生产的过程麦芽制造麦芽汁的制造发酵过滤灭菌 3 常见的乳酸产品 凝固型酸奶 搅拌型酸奶 酸性乳饮料 酸奶功效：利于人体消化吸收，促进胃肠蠕动，乳酸机酸奶中的其他有机酸还能有效的改善肠道菌群，抑制病原菌繁殖； 降血压、降胆固醇、增强心脏功能； 预防老年性骨质疏松和乳腺炎，阻碍铅吸收，减轻化疗副作用，提高人体的免疫功能； 护肤，护发。三、 实验材料与试剂1. 无菌滴管、无菌封口膜封好的100ml三角瓶2. 发酵培养基：100ml 8%10%的麦芽汁装于250ml三角瓶中3. 2.5

8、%的海藻酸钠溶液5ml，灭菌4. 1.5%的氯化钙50ml，灭菌5. 0.9%的无菌生理盐水，5ml6. 袋装巴氏消毒的牛奶7. 啤酒菌种：啤酒酵母8. 酸奶菌种：市售酸奶四、 实验步骤（一） 固定化酵母细胞发酵啤酒1. 菌体培养：将培养24小时的新鲜斜面菌种接种于三角瓶中培养2. 细胞固定化：在预热至35度的海藻酸钠溶液中加入2ml预热至35度的酵母培养液，混合均匀，以无菌滴管缓慢而稳定的滴入氯化钙溶液中，即可得到直径约3mm左右的凝胶珠。注意无菌操作。钙化30分钟左右。3. 固定化细胞发酵啤酒：在无菌玻璃棒帮助下倒掉氯化钙溶液，将生理盐水倒入制得的固定化好的酵母细胞的瓶子中，洗一次凝胶珠，

9、倒掉生理盐水。将100ml发酵培养基倒入制得的固定化小球的瓶子里，用无菌封口膜封号瓶口。2028度静置培养48小时，注意无菌操作。4. 放置在4度冰箱中24小时后，品尝啤酒（二） 制作酸奶1. 取1000ml鲜奶搅拌煮沸消毒，加白糖60克搅拌溶解，乘热分装到干净无菌的100ml三角瓶中，用无菌封口膜封号瓶口。让其自然冷却。用洁净的封口膜将三角瓶口盖住。冷却至40度时，取市面上未经灭菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，摇匀。2. 或把市售经巴氏消毒的奶分装到干净无菌的100ml三角瓶中，加入6%白糖，摇晃溶解，取市面上销售的未经过灭菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，摇匀。（三角瓶可用一次性纸杯代替，封口膜可用白纸代替）3. 42度下，三角瓶（纸杯）静置发酵培养68小时（如用纸杯盛牛奶，白纸封口，由于传热慢，需发酵1012小时）。牛奶变为不流动的酸奶时，停止发酵。4. 置于4度冰箱中24小时以上，待冷却老熟后便得到酸奶。这样制备的酸奶在4度冰箱中保存，保质期可达57天五、 实验讨论1. 我们酿制的啤酒气味纯正，酸奶味道鲜美，对结果很满意。2. 固定