一、项目名称-山东大学齐鲁医院

1、根据山东省科技厅 山东省科学技术奖励申报和推荐工作管理办法 的规定，现将我院张群业作为第二完成人申报山东省科学技术进步奖项目的相关内容予以公示（具体内容如下）。一、项目名称小肠耶尔森氏菌蛋白与促甲状腺素受体交叉抗原及表位的研究二、申报奖种山东省科学技术进步奖三、推荐单位山东省卫生与计划生育委员会四、项目简介本项目属于临床医学内分泌与代谢疾病领域。Gravesdisease （GD）是典型的自身免疫疾病，近年发病率不断增加，患者血清中的抗促甲状腺激素受体抗体 (TRAb)是其主要病因和标志物。 GD 发病机制复杂，人们发现小肠结肠炎耶尔森氏菌 (YE) 与 GD关系密切，但其具体分子机制目前仍未

2、完全阐明， 即使几篇 YE中包膜蛋白和脂蛋白与 GD的研究也未阐明哪一种或几种包膜蛋白与 GD有关，TRAb识别的抗原表位是什么， 产生的相应 TRAb 有无功能等关键问题。 因此，明确 YE中被 TRAb识别的蛋白， 以及其上功能相关的抗原表位和其致 GD作用，对揭示 GD发病机制和开发新的治疗方案等都有重要价值。因此，本项目在国家自然基金面上项目（ 81070625）及山东省自然基金面上项目（ 2009ZRB14207）的资助下，借助先进的免疫蛋白组学技术，并结合蛋白质空间结构模拟和分析，对上述问题进行了研究，为优化 GD治疗方案提供了坚实的实验基础， ，有助于深入理解免疫耐受形成和破坏的

3、机制。 取得了如下创新性成果：1、首次发现并证实 YE中的 O蛋白，即 ompF蛋白能被 GD患者血清识别， 而O蛋白 190-197 位氨基酸残基与 TSHR LDR 198-205氨基酸残基高度相似，且都位于蛋白表面的突出位置， 具有显著的抗原性，能被抗人 TSHR单抗识别，与 TSHR具有交叉免疫原性。2、首次通过细胞功能试验证实ompF蛋白 190-197 氨基酸序列的多克隆抗体能激活原代人甲状腺滤泡细胞TSHR信号通路，具有TSH的效应，即该抗体具有一定 TRAb活性。这为明确YE在 GD发病和 TRAb产生中的作用提供了直接证据。3、首次用 O蛋白 190-197 位氨基酸序列短肽

4、免疫兔子和小鼠，发现两种动物血清 TT4 和 TRAb浓度都有升高；但在与Ad-TSHR-289联合免疫的小鼠中则升高最显著，且高于单独免疫的小鼠。 揭示该抗原表位虽不足以致病，但与其它致病因素有显著协同效果，YE在 GD发病中发挥关键协同作用。本项目发表相关 SCI 论文 5 篇，国内核心期刊论文1 篇，SCI 总影响因子约25.1 分，目前他引总次数达34 次，培养硕士研究生2 人。项目核心成果在在内分泌领域顶级杂志J Clin Endocrinol Metab发表后得到国际同行的广泛认可，被 Lancet （IF=39）和 Endocrine Reviews（IF=15 ）等国际著名杂志

5、多次正面引用，促进了本学科的科学发展和进步。根据本项目的成果， 我们在山东大学齐鲁医院、 山东省立医院和山东大学第二医院等六所省内著名医院开展并优化了 GD患者 YE感染情况的检测，在经典用药基础上结合抗 YE感染治疗，有效缓解了病情，降低了复发；也减少了患者痛苦和宝贵医疗资源的消耗， 取得了良好的社会和经济效益。 总之，本项目的研究成果首次从分子水平， 通过体内外实验为揭示 YE蛋白在 GD发病中的作用提供了坚实的实验基础，为利用免疫蛋白组学和蛋白空间结构模拟技术揭示感染在其它严重自身免疫疾病中的作用提供了很好的借鉴；对并且于优化 GD病治疗方案，减少复发，节约有限的宝贵医疗资源也有重要意义

6、。 该项目对照山东省科学技术奖授奖条件，推荐该项目申报 2015 年度山东省科学技术进步奖二等奖。五、主要完成人情况表1、姓名：王哲排名： 1/5技术职称：副主任医师工作单位：山东省立医院完成单位：山东省立医院对本项目主要学术贡献：本人是该课题的负责人，该完成人在本项目中发挥主导作用，项目发表的论文均体现其对主要科技创新中的每一项都做出了创造性贡献。 该完成人在长期临床实践中发现小肠结肠炎耶尔森氏菌与 GD发病和复发存在联系，结合对相关文献的阅读和总结， 发现目前研究中仍然存在的诸多问题， 因此构思了本项目， 确定利用先进的免疫蛋白组技术进行研究， 并设计了相关实验， 这一方案有效提高了外源性

7、交叉反应抗原的鉴定效率， 保证了项目的顺利进行。 在获得国家和省相关经费支持后， 该完成人还协调指导相关人员进行实验和临床研究， 解决研究中碰到的问题；并负责相关文章的撰写和发表。2、姓名：张群业排名： 2/5技术职称：教授工作单位：山东大学齐鲁医院完成单位：山东大学齐鲁医院对本项目主要学术贡献：本人对项目“主要科技创新”中第2-4 项创新做出了创造性贡献，在项目发表的第 1 篇核心 SCI 论文中均有体现，其在本项目的免疫蛋白组学技术中发挥关键作用。该完成人优化改良的胰蛋白酶PVDF膜上酶解技术， 操作简便、干扰少、灵敏度高，是本项目的核心技术之一， 为本项目的顺利完成提供了重要保证。另外，

8、该完成人利用Discovery Studio软件同源构建了O蛋白的空间结构，为确定 TRAb识别表位提供了重要依据，为本项目的技术创新做出了重要贡献。3、姓名：周洁排名： 3/5技术职称：主治医师工作单位：山东省立医院完成单位：山东省立医院对本项目主要学术贡献：本人在本项目收集不同GD患者以及正常志愿者外周血样品，利用这些样品与小肠耶尔森氏菌总蛋白进行免疫印迹等试验中发挥关键作用，为本项目的顺利完成提供了重要保证。同时该完成人还负责收集和分析纳入研究的GD患者的临床资料，为本项目的临床意义研究做出了重要贡献。4、姓名：葛秀荣排名： 4/5技术职称：副主任医师工作单位：山东省立医院完成单位：山东

9、省立医院对本项目主要学术贡献：本人在本项目中主要负责Graves 病及其它甲状腺疾病患者外周血样的收集工作，利用这些样品与小肠耶尔森氏菌总蛋白进行免疫印迹等试验中发挥关键作用，为本项目的顺利完成提供了重要保证。同时该完成人还负责收集和分析纳入研究的 GD患者的临床资料，为本项目的临床意义研究做出了重要贡献。5、姓名：鲁婷排名： 5/5技术职称：其它工作单位：山东大学附属省立医院完成单位：山东大学附属省立医院对本项目主要学术贡献：本人在本项目中主要负责利用不同甲状腺疾病患者血清与小肠耶尔森氏菌蛋白进行 western blot实验，协助整理数据，撰写部分技术路线和论文。六、主要完成单位情况1、山东省立医院排名： 1山东省立医院作为该项目负责人所在单位，对该项目立项申请、课题实施等提供了人力和物质保障， 在项目进行过程中组织协调各方面力量，保证课题顺利完成；开展年度进展