河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》考试试卷(4017)

1、河南农业大学考研专业课现代分子生物学课程试卷（含答案）学_年第 _学期考试类型：（ 闭卷）考试考试时间 ： 90 分钟年级专业学号姓名1、分析题（ 5 分，每题5 分）1. 写出从组织中抽取RNA勺关键步骤，并解释如何判断 RNA质量。答案：1）从组织中提取 RNA 的步骤如下：将组织工作在液氮中磨碎，每 50 100mg组织加入1mlTRIzol 裂解液溶解样品,充分吹打混匀。 每 1ml TRIzol 加入 2.0ml氯仿，剧烈震荡 15s ，室温放置5min 。 4 C, 10000g 离心 15min,此时 RNA 主要包括集中在水相中。 将水相转移至新的离心管中,加入等体积二氯甲烷，

2、室温放置10min 。 4 C, 10000g 离心 10min,此时可在离心管底部观察到白色沉淀,即为 RNA 。 用 75 冷勺乙醇洗涤沉淀,475C0,0g 以下,离心 5min ,弃上清。 超净台中吹干，加入无 RNase的水溶解。（2）检测 RNA 质量的方法如下： 凝胶成像：取适量RNA反应物加入电泳缓冲液后，跑琼脂糖凝 胶电泳，如果 28S 和 18S 条带明亮、清晰，并且 28S 的亮度在 18S 条带的两倍以上，则认为 RNA 的质量是好的。 吸光度检测：使用紫外分光光度计检测 RNA样品在260nm、 280nm 处的吸光度，若两者的比值在 1.82.0时，可认为RNA纯

3、度良好，蛋白质等其他物质的污染可以接受。解析：2、判断题（ 55 分，每题 5 分）1. 细胞内DNA复制后的错配修复不需要消耗能量。（）答案：错误解析：细胞内 DNA 复制后镜像的错配修复需要水解 ATP 提供能量。2. 癌细胞生长旺盛，因而内质网特别发达。（）答案：正确解析：内质网是细胞内除基质核酸区外的一系列重要的生物大分子， 如蛋白质、脂类（如甘油三酯） 和糖类合成的中心。癌细胞生长旺盛， 需要小量的蛋白质、脂质、糖类等，因而内质网特别发达。3. RNA 聚合酶全酶的概念只用于原核转录体系中。（ ）答案：正确解析：4. 许多蛋白质的三维结构是由其分子伴侣决定的。（ ）答案：错误解析：5

4、. 一染色体DNA经内切酶Sal I切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA片段，将这些片段分别在T4 DNA连接酶的作用下自身连接成 环，然后导入受体细胞，都可以进行独立地复制。（）答案：错误解析：在 T4 DNA 连接酶的作用下，若干个具有黏性末端的 DNA 片段自身连接成环，导入受体细胞后，并不是实施都可以进行中立的复 制。6. 在所有原核与真核生物中，AUG都是唯一的翻译起始密码子。 （）答案：错误解析：在所有动物细胞生物与生物大多数原核生物中， AUG 是翻译的 起始密码子。少数细菌（属于原核生物）以 G U G （缬氨酸）或 UUG 为起始密码子。和叶绿体使用的遗传密码稍有差异，如

5、线粒体和叶绿 体以 AUG 、 AUU 、AUA 为起始密码子。7. tRNA 转录后加工中有剪接反应，它是由蛋白质催化的。（ ） 答案：错误解析：原核生物 tRNA 基因的转录产物为 tRNA 前体，通过制品形成 成熟的tRNA，其加工过程包括：由核酸内切酶切断 tRNA两端； 核酸外切酶从5 '端逐个切去附加序列；在3 '端加上CCAOH结构； 碱基的修饰反应。8. RNA的化学稳定性比DNA高。（）答案：错误解析：由于2 '羟基的存在，RNA化学稳定性比DNA差。9. P53 蛋白参与监控细胞核 DNA的损伤，因此是一个肿瘤抑制因子。 （）答案：正确解析： P53

6、 是人体非常重要的抑癌基因，参与监控细胞核 DNA 的损伤， 它可以通过抑制细胞周期的进展，抑制细胞增殖。但是它的缺失会导 致细胞增殖失控（无限增殖）。顺式作用元件是指调控基因表达的蛋白质。（） 答案：错误解析：顺式作用控制器指影响自身基因表达活性的 DNA 序列，与反式 因子相互作用参与基因表达调节。从紧而反式作用因子指调控基因表 达的蛋白质。10. 复制控制在起始阶段，即一旦复制开始它将连续进行直至整个 基因组复制完毕。（ ）答案：错误解析： DNA 复制的调节爆发发生在起始阶段，一旦开始复制，如果不 能意外受阻，它将连续进行复制完毕。3 、名词解释（ 50 分，每题 5 分）1. 结构域

7、答案：结构域是指蛋白质中可以具有独立的超二级结构的部分，蛋白 质的二级结构和三级结构之间，是生物大分子中具有特异结构和独立 功能的区域。多半由一个基因外显子编码，并具有特定的功能，蛋白 质不同的结构域通常由不同的外显子编码。在较大的蛋白质中会，多 个结构域间可通过较短的多肽柔性区互相联接。解析：空2. 染色质免疫沉淀技术答案：染色质免疫沉淀技术（ CHIP ）是研究体内蛋白质与 DNA 相互 作用的第二种技术。它善用淋巴细胞抗原抗体反应的特异性，可以真 实地反映体内蛋白戏剧化因子与基因组 DNA 结合的状况。解析：空3. 扣除杂交( substrate hybridization ) 答案：扣

8、除杂交，又称扣除 cDNA 克隆，指用一般细胞的 mRNA 与 特殊细胞的 cDNA 杂交，两类细胞共有的 cDNA 形成双链，而特异的 cDNA 保持单链状态，回收单链的 cDNA 进行克隆，用于制备文库或 探针，分离特异的基因的技术，它是通过构建扣除文库得以实现的。 扣除杂交法的本质是截叶那些普遍共同长期存在存在的或是非诱发产 生的 cDNA 序列，从而使趁机分离的目的基因的序列得到有效的富集， 提高了分离的敏感性。解析：空4. DNA 分子克隆技术答案： DNA 分子克隆技术，旧称基因克隆技术，是所指在分子水平上 提供一种纯化和所讲扩增特定 DNA 片段的方法，即在体外将 DNA 分 子

9、片段与载体 DNA 片段连接，转入细胞获得蛋白质大量拷贝的过程。 DNA 分子科帚的原理是用体外重组方法将目的基因插入克隆载体，已 经形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入引入适合的寄主 体内得到镜像与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克 隆载体，可以得到插入 DNA 的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。 该技术的主要目的是获得某一基因或 DNA 片段的大量拷贝，有了这 些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因特性的结构 与功能。解析：空5. 启动子 暨南大学 2019研答案：启动子是指一段位于结构基因 5 '端上游区的DNA序列，它含 有 RNA 聚合酶特异

10、性结合和转录起始所需的保守序列，是 RNA 聚合 酶识别、结合和开始转录的位点。原核生物的启动子所含 10 区和 35 区，真核生物启动子含有 TATA 框和 CAAT 框，这些区域是启动子与 RNA 聚合酶相配合的位点。启动子与 RNA 聚合酶的结合活性的改变 可以影响基因的表达量。解析：空6. 魔斑答案：魔斑又称超级调控子，是指当细菌生长过程中，遇到氨基酸全 面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生 这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸（ ppGpp ）和鸟苷五磷酸 （pppGpp ）。 ppGpp 与 pppGpp 的作用不只是一个或几个操纵子， 而是影响一大批色氨酸，所以

11、称它们是超级调控子或称为魔斑。解析：空7. 基因芯片 浙江海洋大学 2019研答案：基因芯片又称 DNA 芯片、生物芯片，指利用杂交合成方法， 通过与一组已知序列的核酸杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基 片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的 核酸序列 TATGCAATCTAG ，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生之前互补匹配时，通过确定磷光强度指明最强的探针位置，获得一组 序列完全互补的红外序列。据此可重组出靶核酸的序列。解析：空8. 整合感染答案：整合感染是指对某些 DNA 在感染复制过程中可以将自身拷贝 全部或部分 DNA 片段整合到疟蚊细胞 DNA 中，并随宿主

12、细胞的复制 遗传给下一代的感染方式。逆转录病毒的 RNA 反向转录产物 cDNA 即前病毒也可以整合到寄生虫的 DNA 中的感染，这种感染参与病毒 致肿瘤机制。解析：空9. 细菌人工染色体文库，BAC文库(bacterial artificial chromosome library )答案：BAC染色体指一种一般而言的是人工染色体，是以细菌F因子(细菌的性质粒)为基础组建的细菌染色体克隆载体，常用来克隆 150kb 左右大小的 DNA 片段，最多可保存 300kb 个碱基对。细菌 工厂化人工染色体在文库构建中具有构建文库简单、转化效率高、嵌 合体少、插入片段极易回收、插入片段较大、在寄主细胞

13、中插入片段 稳定性好等优点。 BAC 文库用于构建人、动物、植物核基因组 DNA 大片段插入文库。解析：空10. 冈崎片段答案：冈崎片段是指在 DNA 半不连续复制中，沿着后随链的模板链 合成的新 DNA 片段，随后能被连接构成一条完整的 DNA 链。冈崎片 段的长度在真核与原核生物中存在中同差别，真核生物的冈崎片段长 度约为100200核苷酸残基，而原核生物的为10002000核苷酸 残基。解析：空4、填空题（ 40 分，每题 5 分）1. 在通用遗传密码表中遗传密码有 64 个，其中个是编码氨基酸的 密码，有个终止密码子，个起始密码子。普通密码子变成终止密码子 的突变叫作突变。答案：61|

14、3|1| 无义解析：遗传密码是一组规则，将 DNA 或 RNA 序列以六个核苷酸为一 组的密码子转译氨基酸为蛋白质的氨基酸序列。在通用遗传密码表中 遗传密码有 64 个，其中 61 个编码氨基酸的密码。有 3 个终止密码子， 分别为UAA、UAG、UGA。 1个起始密码子AUG ;碱基政突变是指 由于某个无的改变使代表某种氨基酸的密码子突变为终止密码子，从 而使肽链合成提前终止。2. Northern 杂交是用鉴定。答案：DNA探针|RNA分子解析： Northern 印迹杂交是一种将 RNA 从琼脂糖凝胶中转印到硝酸 纤维素膜上的粘贴方法。如果整合到染色体上的外源基因能正常表达，则细胞内有其

15、转录产物特异 mRNA 的生成，可以用 DNA 探针来 鉴定 RNA 分子。3. 真核基因表达调控在DNA水平的调控方式包括、和等方式。其中免疫球蛋白结构基因是方式的典型例子，非洲爪蟾的细胞中rRNA基因的变化是方式的典型例子。答案：基因丢失 |基因扩增 |基因重排 |基因重排 |卵母|基因扩增解析：真核基因表达调控在 DNA水平的调控措施方式包括：基因丢 失，如人类5号染色体短臂缺失；基因扩增，如非洲爪蟾的卵母细 胞中所rRNA基因的变化；基因重排，如免疫球蛋白结构蛋白质。4. DNA连接酶催化一条DNA链末端的和相邻的另一条链末端的之间形成3 5，真核生物DNA连接酶连接DNA的能量由提供

16、。答案：5 '磷酸根 |3|磷酸基酯键|ATP解析： DNA 连接酶主要功能是将 DNA 分子中的 5磷酸基团同3羟基 端链接起来，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的 DNA 链连成完整的 链，在 DNA 复制、修复中起着重要作用。真核生物中利用 ATP 提供 能量，原核生物中由烟酰胺腺嘌呤腺嘌呤二氨基酸（ NAD ）提供能 量。5. 核糖体上可区分出五个功能活性位点，其中 A位点主要在上，而P 位点主要在上。答案：50S亚基|30S亚基解析：原核细胞由两个亚基构成，一个为大亚基 50S，一个为小亚基 30S。核糖体至少包括 5个活性中心：50S亚基上有两个tRNA位点: 氨酰基位点（

17、A 位点）与肽酰基位点（ P 位点）， mRNA 结合部位， 肽基转移部位以及肽键的形成部位。6. PCR 的特异性取决于：和。答案：引物与模板的特异结合 | 酶对引物的有效延伸解析：PCR即肽键链式反应，是一种用于放大扩增特定的 DNA片段 的分子生物学技术，它可看作线粒体是生物体同时的特殊 DNA 复制， 其最小特点是能将微量的 DNA 大幅增加。 PCR 的特异性取决于引物 与模板的特异结合和酶融合对引物的有效延伸。7. 原核生物细胞中DNA甲基化位点主要是在序列上，而真核生物细 胞核DNA的甲基化位点则主要是在序列上。答案： GATC|CG解析： DNA 甲基化为 DNA 化学修饰的一

18、种形式，能够在不改变 DNA 序列的前提下，改变遗传表现。通常指在 DNA 甲基化转移酶的作用下 所，在基因组 CpG 二核苷酸的胞嘧啶 5 碳位共价键建构结合一个羰基 基团。原核生物细胞中 DNA 甲基化位点主要是在 GATC 序列上，而 真核生物细胞核DNA的甲基化位点则主要是在 CG序列上。8. 乳糖操纵子阻遏蛋白由基因编码，与序列结合，对乳糖操纵子起 阻遏作用。答案：调节 |操纵区解析：5、简答题（ 35 分，每题 5 分）1. 在蛋白质生物合成过程维持遗传信息准确翻译为蛋白质的保真性 因素有哪些？答案： 准确度保证翻译准确性的因素有以下几点：（1 ）氨基酸与 tRNA 的特异结合，依

19、靠氨酰 tRNA 合成酶的特 异识别作用实现；（2）密码子与反密码子的特异结合，依靠互补配对结合同时实现， 也有赖于核蛋白体的构象正常而实现正常的装配正因如此功能；（3 ）校正 tRNA 校对错义突变和无义突变；（4）碱基的简并性和专一性大大减少了变异对生物突变的影响。 解析：空2. 何为安慰诱导物（ gratuitous inducer ），你知道有些什么安慰 诱导物？与应用真正的诱导物相比，应用安慰诱导物进行试验的好处 有哪些？答案：（ 1）安慰诱导物定义安慰诱导物是指一种与天然诱导物结构相似的化合物与转录中实 际诱导物相似，但不是该诱导酶的底物。（2）我知道的安慰淬灭物 含硫的乳糖类似物

20、异丙基糖苷巯基半乳糖苷（IPTG ）。 巯甲基半乳糖苷（TMG ）。 在酶的活性分析中曾，常用显色底物 0硝基半乳糖苷（ ONPG ）。（3）应用安慰诱导物进行试验比应用真正的诱导物的好处 真正的诱导物乳糖会被诱导合成的 B半乳糖苷酶所催化降解，从而并使其浓度发生变化。 而安慰诱导物由于本身不被降解所以浓度不会发生变化，可以 持续的诱导基因表达。解析：空3. 试述复制和转录的相同和不同之处。答案： （ 1）克隆和转录的相同点 都是以 DNA 为模板进行。 复制和转录过程都遵循碱基互补配对原则。 都是从5 '向3 '方向进行。 都依赖 DNA 的双链。 聚合过程每次也都只缩减一个

21、核苷酸。 核苷酸之间相接的连接都是磷酸二酯键。 都在细胞核内进行。（2）复制和转录的不同点 复制所需的底物为脱氧核苷三磷酸；而转录的底物为核苷三磷 酸。 在复制过程中 AT 配对；而在转录投资过程中是 AU 配对，而 且转录体系中有次黄嘌呤碱基的引入。 复制过程中，两条DNA单链都可作为模板链，都被复制；而 转录过程中以 DNA 单链为模板链，并且只是一条 DNA 链的某一区段 复制得到的是与模板链互补的 DNA 链；而转录得到的是与模 板互补的 RNA 链 RNA 聚合酶与 DNA 聚合酶不同，能合成出新链，因此转录不 需要引物，而复制需要有一段特异的 RNA 为引物。 复制做出的产物与产物

22、亲代具有高保真性，半数以上情况下百 分之八十是完全相同的；而转录产物与基因相比较，除 U 与 T 互换外， 成熟的 RNA 序列与模板序列相差很大。解析：空4. 为什么真核生物中转录与翻译无法耦联？答案： 转录与翻译耦联指边转录边翻译，真核生物中转录与翻译 无法耦联的原因如下：（1 ）真核生物中的 mRNA 开始合成时，是不成熟的 hnRNA ， 需要通过一系列加工过程才能成熟而后才能成为成熟的 mRNA 。这些 过程包括：内含子的剪接、5 '端加帽子结构、3 '端加尾等。（2）真核生物 mRNA 是在细胞核内合成的，而中翻译是在细胞 质中需要进行的，因此， mRNA 只有被运

23、送到细胞质部分，才能翻译 生成蛋白质。因此，真核生物中转录与翻译无法耦联。解析：空5. 区别可诱导和可阻遏的基因调控。答案： 基因调控是指由基因表达的调控。分为可诱导的基因反向 调控和可阻遏的基因调控。1）可诱导的基因调控在可诱导的系统中，操纵子只有在诱导物存在时才开放，没有诱 导物时阻遏蛋白结合在操纵子上阻止结构基因的转录。 存在诱导物时，它与阻遏蛋白结合，使之变构结合不再与操纵 子结合，打开操纵子。 酶的诱导是分解途径特有的，诱导物就是酶的底物或者底物的 类似物。（2）可阻遏的基因调控 在可阻遏系统中操纵子被终产物所关闭。 不存在终产物时，阻碍拆装蛋白不能结合到操作子上，因此操 纵子开放。

24、 存在终产物时，它相结合到阻碍蛋白上，改变后者的构象，使 其能结合到操作子上，关闭操纵子。 酶奈镇是合成代谢的特点。解析：空6. RNA 干扰现象的重要特征有哪些？答案： RNA 干扰现象的重要特征有：（1）基因沉默： RNAi 是转录后水平的基因沉默机制；（2）高特异性：只降解与之序列相应碱基的单个内源基因的 mRNA ；（3）高效性： RNAi 抑制基因表达很低具有很高的效率，表型可 以达到缺失突变体表型的程度，而且相对很少量的 dsRNA 分子（数 量远远少于内源 mRNA 的数量）就能完全抑制下述基因的完全表达，是以催化放大的方式进行的；（4 ）长距离传递： RNAi 抑制基因表达的效

25、应可以穿过细胞界限， 在不同细胞间有长距离传递和维持信号甚至传播至整个有机体以及可 遗传等特点；（5 ）dsRNA 不得短于 21 个碱基：长链 dsRNA 也在细胞内被 Dicer 酶切割为 21bp 左右的 siRNA ，并由 siRNA 来介导 mRNA 切 割。而且大于 30bp 的 dsRNA 不能在哺乳动物中诱导特异的 RNA 干 扰，而是细胞非特异性适时和全面的基因表达受抑和凋亡；（6 ）ATP 依赖性：在去除 ATP 的样品中 RNA 干扰现象降低或 消失显示 RNA 干扰是一个 ATP 依赖的过程。解析：空7. 简述原核生物与真核生物 mRNA勺主要差别。答案：（1）原核生物

26、 mRNA 常以多顺反子的形式存在。真核生物 mRNA 一般以单顺反子勺形式存在。（2）原核生物 mRNA 勺转录与翻译一般是偶联勺，真核生物转 录勺 mRNA 前体则需经核糖体后加工，加工为成熟勺 mRNA 与蛋白 质结合生成信息体后才开始翻译。（3）原核生物 mRNA 半衰期很短，一般为几分钟，最长只有数 小时（ RNA 噬菌体中勺 RNA 除外）。真核生物 mRNA 勺半衰期较 长，如胚胎中勺 mRNA 可达数目。（4）原核与真核生物 mRNA 勺结构特点也多种不同。原核生物3 '端有一段不翻译区,mRNA 一般5 '端有一段不翻译区，称前导序列, 中间是蛋白质的编码区，

27、一般编码几种蛋白质。真核生物 mRNA （细胞质中的）一般由51端帽子结构、5 '端非翻译区、翻译区（编码区）、3 '端非翻译区和3 '端聚腺苷酸尾巴形成，分子中除m7G构成帽子外， 常含有其他修饰核苷酸，如 m6A 等。真核生物 mRNA 通常都有若干 的前体。从 DNA 转录产生的原始转录产物可称作原始前体（或 mRNA 前体）。一般认为原始前体要经过 hbRNA 的阶段，最终才被 加工为成熟的 mRNA 。解析：空6、论述题（ 20 分，每题 5 分）1. 试比较原核生物与真核生物基因表达调控特点的不同。答案： 真核生物与原核生物基因表达特点的不同表现在以下几方

28、面：（ 1 ）原核基因表达调控典型的特点主要为： 。因子决定RNA聚合酶识别特异性。原核生物的 RNA重要一环聚合酶有全酶和核心酶之分，两者仅差一个。因子（或亚基）。核心酶参与转录延长，全酶参与转录起始。 因子识别特异启动序列， 不同的c因子决定特异基因的转录激活，决定 mRNA、rRNA、 tRNA 基因的转录。 原核生物中操纵子图表的普遍性。原核绝大多数基因按功能相 关性成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位即操纵子。 原核基因的协调表达就是通过调控每个操纵子中会启动的序列的活性 来完成的。 阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性。原核基因调控普遍涉及特异阻 遏蛋白参与的转录开关调节机制。（

29、2）单细胞基因表达调控的特点： RNA聚合酶：真核RNA聚合酶有三种，即 RNA pol I、H、 皿，分别负责三种RNA转录。TATA盒结合蛋白为三种聚合酶所共有。 蛋白质染色质结构变化：当基因激活时，可观察到染色体相应 区域某些结构和性质变化：a. 对核酸酶敏感：活化基因的一个明显构造是剖面对 DNase特 别敏感。b. DNA 拓扑结构变化：几乎所有天然状态的双链 DNA 均以负 超螺旋存在，当基因活化时， RNA 聚合酶前方的转录区 DNA 拓扑结 构为正性超螺旋，而在其后的 DNA 拓扑结构为负超螺旋。c. DNA 碱基修饰变化：真核 DNA 有 5 的胞嘧啶被特异性为 5 甲基胞嘧

30、啶，甲基化常发生在蛋白质 5 '端的CpG序列（又称CpG 岛）。甲基化范围与基因表达范围程度呈安培力。d .组蛋白变化。 正性调节占主导：真核 RNA聚合酶对启动子的亲和力结构域极 小或根本没有实质性亲和力，必须依赖一种或多种类型激活蛋白的作 用。 转录与翻译分隔进行：叶绿体有细胞核及胞浆等区间分布，转 录中均与翻译在不同亚细胞结构中进行。 转录后修饰、加工：转录后剪接及修饰等过程比原核生物基因 复杂解析：空2. 请你设计有关实验方案，来鉴定转基因动物或转基因植物中外源 基因是否转录并成功表达，并说明设计原理。答案： 动植物转基因操作中，除利用抗生素抗性和除草剂抗性等 选择药物基因排

31、除非转化细胞而留存转化细胞，以及利用 GUS 和 GFP 等报告基因显示转基因成功外，更重要的是从分子水平鉴别出阳 性转化体，明确目的基因在转基因个体中的拷贝数和转录与表达情况。（1 ）外源基因整合与否及其整合拷贝数的鉴定： PCR 或 Southern 杂交进行。 PCR 可以检测目的基因是否整合在受体细胞的 上以，但 PCR 检测灵敏，易受 DNA 污染，同时对多位点插入难以检 测。检测外源基因整合在木糖植物染色体上最可靠的方法就是 Southern 杂交和原位杂交。 Southern 杂交可检测外源基因插入的拷 贝数或插入位点数目，是一种较为精确的分析，也是目前检验鉴定外 源基因存在于转

32、基因动植物中的权威方法。（2）外源基因在染色体上的整合位置：原位杂交可以检测外源基 因存在的位置、整合外源基因的染色体及外源基因在该上能的位置。（3）外源基因在转化植株提炼中是否转录的检测与鉴定：采用 RTPCR 或 Northern 杂交。在外源基因的转录水平上，可用 Northern 杂交和 RTPCR 检测。 Northern 杂交是研究转基因植物中 外花粉源基因表达的重要方法，然而较繁琐，而 RTPCR 较之操作简单， 且更灵敏，特别是单拷贝时更常用。（4）转基因个体外源基因表达情况的检测与鉴定：外源基因若编 码蛋白，在转基因植物中表达蛋白的检测可采用酶联免疫吸附法ELISA ）和 W

33、estern 杂交。用 Western 杂交验证外源基因是否表 达，用 ELISA 则可做定量检测，两者常结合使用。解析：空3. 比较说明SDSPAGESDS聚丙烯酰胺电泳）和琼脂糖凝胶电泳的 物质分离原理和特点。答案： （1） SDS 聚丙烯酰胺电泳 聚丙烯酰胺凝胶是指由丙烯酰胺和交联剂甲基双丙烯酰胺在催化 剂过硫酸铵， TEMED 作用下，聚合交联向成的具有网状结构的凝胶， 并以此为支持物或进行电泳。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理a .根据的蛋白质分子所带电荷不同差异及分子微小的不同所产生 的不同迁移率把蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只 含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应

34、只分离出一条区带。bSDS 是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键， 并按一定成小的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷 的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间的电荷差异。 因此，各种蛋白质 SDS 复合物在电泳时的迁移率，可不受受原有电荷 和分子形状的影响，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶。c.由于聚丙烯酰胺凝胶的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易 的通过凝胶，阻力小，迁移速度快；较少大分子蛋白质则受到较大的 阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大 小而被分离。 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点a .在一定浓度时，凝胶透明，有弹

35、性，机械性能好；b .样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达 10 6卩g ;c.化学性能稳定，和被分离物不起化学变化，在很多有机溶剂中 不溶；d .对 pH 和温度变化较稳定；e .几乎无吸附和电渗作用，只要 Acr纯度高，操作条件一致，则 样品分离复杂程度好；f .凝胶孔径可调节，根据被分离物是的分子量选择最合适合适的 浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；g .分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、胶体和电荷效 应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。（2）琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是指用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。 琼脂糖凝胶电泳原理a .和其

36、他支持物电泳最主要区别是它兼有分子筛电泳的双重作用。b .琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时需受到固体阻力， 大分子自然界在涌动时受到的阻力大。c.在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不但取决于净电荷的性质正负 极和数量，而且还取决于分子大小，这就进一步提高了分辨能力。 弯果凝胶电泳的特点a .琼脂糖呈透明状，无紫外吸收，电泳后的样品可直接用紫外检 测；电泳后才区带易染色，样品易洗脱，便于定量测定b 操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可进行电泳。c.琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占 9899 )，近似自由 电泳，样品扩散度较自由电泳小，对样品稀释吸附极微，因此电泳图 谱清晰，分辨率高，重复

37、性好。d .凝胶的熔点低，便于操作。e .可直接抽提分离的DNA分子。f .可直接需要进行酶催化反应。g .进行第二次电泳。解析：空4. 为什么细菌的RNA聚合酶能在恰当的区域停止转录？浙江海洋 大学 2019研答案： 因为细菌的各个转录单位中存在促进转录终止的终止子序 列，转录出的终止子字符串序列形成发夹结构延宕了 RNA 聚合酶的前 进，进而在富含 A 的序列线性或终止因子的作用下从 DNA 模板链上 释放下来，终止转录，原核生物的转录终止有两种类型：(1 )赖于p因子的终止，p因子能催化NTP水解促使新生的 RNA 链从三元转录复合物中曾解离出来，从而终止转录。(2 )不依赖于p因子的终

38、止，模板DNA上存在终止转录信号终 止子，终止位点上游一般都存在一个富含 GC 的二重对称区，该段 DNA 转录产生的 RNA 容易形成发卡式结构中。新生 RNA 中其的发 卡式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏 RNADNA 杂合链5 '端的 正常结构。终止位点松省一段由 48 个 A 组成的序列，因此，转录物的3 '端为寡聚U,寡聚U的存在或使杂合链的3 '后端部分出现不稳定的 rUdA 区域。这两者共同作用使得 RNA 从三元转录复合物中曾 解离出来。解析：空7、选择题（ 12 分，每题 1 分）1. RNA 作为遗传物质只存在于（ ）中。A 细菌和病毒及噬菌体B

39、 病毒和细菌C 噬菌体和细菌D 病毒和噬菌体答案：D解析：遗传物质即亲代与两者之间子代之间传递遗传信息的物质。除 一部分病毒和噬菌体的遗传物质是 RN 之外，其余均为 N。2. 与tRNA中的反密码子为 GCU配对的mRN/中的密码子是（）AUGABCGACAGIDAGU答案： D解析：核糖体内 tRN 的反密码子是通过碱基的反向配对与 mRN 上的 密码子相互作用的。当反密码子第一位是 G 时，可以识别和 U 两种密 码子。因此，反密码子为5 ' GU3，mRN上所的密码子应当为3 ' G5' 或3 ' UG5'。所以，密码子应该ISU或G。3. 乳糖

40、操纵子阻抑物是由 lacI 基因产生的，但 lacI 基因的合成是 一种由弱启动子控制下的组成型合成，如果存在这样的大肠杆菌突变 体，它的 lacI 基因由弱启动子突变成强启动子，那么，乳糖操纵子将 最有可能出现的表型是（ ）。A 乳糖操纵子的表达被抑制，但加入乳糖后，仍可正常启动表达B 表达特征保持不变，与野生型一样C 仍有微弱的组成型表达，加入乳糖后，可正常诱导表达D 乳糖操纵子的表达被抑制，加入乳糖后，也不能正常启动表达答案：D解析：4. 以下关于大肠杆菌基因调控的说法错误的是（）。A 大肠杆菌乳糖代谢的调控主要是对转录水平的调控B 在大肠杆菌中，如果控制乳糖代谢的启动子发生了突变，转录

41、便 不能进行C 在大肠杆菌中，如果调节基因突变造成阻抑物缺乏，那么与乳糖 分解代谢有关的三种酶就不能合成D 几个结构基因往往连在一起，共同受调控序列的调控答案：C解析：5. FRET 可以用来测量（ ）范围内大分子之间的距离。A. 0.1 1B. 10 100C. 1 10D. 100 1000答案： B解析： FRET 即磷光共振能量转移，当一个荧光分子（又称为供体分子） 的荧光光谱与另一个荧光分子（又称为受体分子）的激发光谱相重叠 时，供体荧光分子的激发能诱发受体闪光分子发出荧光，同时供体荧 光分子自身的荧光强度衰减。 FRET 程度与供、受体分子的空间距离紧 密蛋白相关，一般用来测量 10100 范围内多肽之间的距离。随着距 离延长， FRET 呈显著减弱。6. 关于G蛋白的叙述错误的是（）。A. G蛋白能结合GDP或 GTPB. 激素受体复合体能激活G蛋白C. G 蛋白的 3 个亚基结合在一起时才有活性D. G蛋白由久、8、丫3个亚基构成答案：C 解析：G蛋白是指三聚体GTP结合调