生防菌的纯化与鉴定ppt课件

1、2. 试剂：高氏一号培养基、无菌水、石炭酸复红染液、路哥氏碘液，70% 酒精等。3. 实验用具与仪器：无菌培养皿、盖玻片、载玻片、接种环、三角玻璃棒，酒精灯、微波炉、显微镜。纯化培养基纯化培养基纯化培养基纯化培养基斜面试管斜面试管F形态学观察形态学观察F培养特征培养特征F生理生化特征生理生化特征F明胶液化 F牛奶凝固与胨化F淀粉酶的活性 F纤维素生长试验 F硫化氢试验 F碳源的利用 F普通显微镜观察 F透射电镜F菌落特征的观察放线菌的菌丝体，孢子丝及孢子的形态及排列方式宜放线菌的菌丝体，孢子丝及孢子的形态及排列方式宜用略暗光线观察）。用略暗光线观察）。形态特征：单细胞，细胞圆形、椭圆形或圆柱形

2、状，较细菌细胞大，具明显的细胞核和肝糖粒、脂肪粒等內含物。 链霉菌链霉菌 myctinomycetes属于链霉菌属Streptomyces），粉红孢类群Roseoporus弗氏亚群亚群Fradiae）链霉菌属Streptomyces蓝色亚群Gyaneus）.链霉菌属Streptomyces黄色亚群Flavus） 菌落形态菌落边缘菌丝、产孢子形态 玉米青霉穗腐病玉米青霉穗腐病青霉菌的帚状分生孢子梗青霉菌的帚状分生孢子梗和分生孢子和分生孢子苹果青霉病菌苹果青霉病菌青霉菌的分枝状分生孢子梗青霉菌的分枝状分生孢子梗和分生孢子和分生孢子柑橘青霉菌柑橘青霉菌 哈茨木霉(T.harzianum) 绿木霉(T

3、.virid)Trichoderma viride fungus growing on surface of southern yellow pine wood PhyllactiniaMicrosphaeraUncinulaErysiphePodosphaeraSphaerotheca荔枝煤烟病荔枝煤烟病活活菌菌染染色色简单染色法抗酸染色革兰氏染色复杂染色法普通染色芽孢染色法荚膜染色法细胞壁染色法特殊染色正染色负染色死菌染色细菌染色染色还有助于检测细菌细胞的一些结构和生理特点，可以用于鉴别细菌种类。正染色染料与细胞结合而进行染色的过程；负染色细胞不染色而使背景染色的过程。多用于荚膜的观察。染

4、色：细菌细胞小而透明，为便于观察必须增加反差，因此要对细菌进行染色；步骤：结果: 阳性菌紫色 阴性菌红色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色番红复染涂片固定由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 革兰氏染色有着十分重要的理论与实践意义。通过这一染色，几乎可把所有的细菌分成革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌两个大类，因此它是分类鉴定菌种时的重要指标。又由于这两大类细菌在细胞结构、成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差异，因此任何细菌只要通过简单的革兰氏染色，就可提供不少其他重要的生物学 特殊结构指某些细菌在生长的特定阶段所形成的结构，例如，芽孢、鞭毛

5、和荚膜等概念：肽聚糖是由 N 乙酰胞壁酸NAM和N乙酰葡糖胺NAG以及短肽链主要是四肽组成的亚单位聚合而成的大分子聚合物。革兰氏阳性细菌细胞壁具有较厚30-40nm而致密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁的成分60-90%，它同细胞膜的外层紧密相连。有的革兰氏阳性细菌细胞壁中含有磷壁酸teichoi-acid）,也即胞壁质( murein）。G-细菌细胞壁比G+细 菌细胞壁薄(15-20nm)而结构较复杂，可以区分为两层，即外膜和薄的肽聚糖层。在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间，称为壁膜间隙。外膜上含有许多独特的结构，如把外膜与肽聚糖层连接起来的布朗(Brauns)脂蛋白，使营养物被动运输通

6、过膜的膜孔蛋白和起保护细胞作用的脂多糖(LPS)。脂多糖也称为内毒素，对哺乳动物有高度毒性。基本成分是脂多糖，此外还有磷脂、多糖、和蛋白质。外膜被分为脂多糖层外）、磷脂层中）、脂蛋白层内）。 涂片固定涂片固定 结晶紫初染结晶紫初染1min 碘液媒染碘液媒染1min95%乙醇脱色乙醇脱色0.5min 番红复染番红复染minv革兰氏染色原理：革兰氏染色原理：v第一步：结晶紫使菌体着上紫色第一步：结晶紫使菌体着上紫色v第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。子大，能被细胞壁阻留在细胞内。v第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。出现不同的反应。vG+ G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫结晶紫- -碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。酒精脱色，仍呈紫色。vGG菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高能使其结构收缩