福建科技计划项目

1、福建省科技计划项目技术总结项目技术总结项目名称（此处写上）一、项目综述1.1、的简介光动力疗法（Photodynamic Therapy , PDT是利用光动力效应进行疾病诊断和治疗的一种新技术。其作用基础是光动力效应（省（1）恶性胛博起者：2）挣脉注射光戟刑，优.先聚篥在恶性肿瘤组织上：（3）光敏側在肿祷组 球申富集.荧龙诊断；2）激芜照射治疗；（印肿瘤细葩坏吧或;用亡*犠创方扎清快罢性肿瘪.光动力治疗图解1.2、光动力治疗的意义及其前景传统的化疗药物通过全身性给药后，会产生巨大的毒副作用， （省略）1.3、光敏剂的发展现状光动力治疗的三要素是光敏剂、适当波长的激光和生物体内的氧气 其中光敏

2、剂是关键目前国外临床上所使用的光敏剂主要是1996年被美国FDA正式批准用于临床的Photofrin ，（省略）Solucion inyectable 75 mg(faifccchiw pfinfrt ssatfPhotofrinPorfimfo.*5 ngaxcan fmariaPhotofri n相对于国外而言，我国光敏剂的发展略显滞后 （省略）产晶Jtt萍I :芳效期至I福大赛因注射液目前国内正在开发的具有独立知识产权的第二代光敏剂主要有金属酞菁、血卟啉单甲醚、竹红菌素类和二苯基卟吩（DPCOH等。其中,1.4、项目的特色与创新点：（即化学新药“光汰净”的先进性）首先，理想的药物应该具有

3、单一的组成与结构，（省略）OODQO“光汰净”（ZnPc-5K）的化学结构其次，（省略）最后， （省略），原因有：a）改变了（省略）b）使药物带正电荷。（省略）c）聚赖（省略）参考文献：1. Dougherty T J, Kautoradiati on therapy for treatme nt of malig nan t-tumors. Cancer Research, 1978,38 (8): 262& 26352. Radu A, Wagn ieres G(省略)3. Savary J F, Monnier P, Photodynamic therapy for early

4、squamous cell carcinomas of the esophagus, bronchi, th m-tetra (hydroxyphenyl) chlorin. Arch Otolaryngol Head NeckSurg, 1997,123 (2): 16A 1684. Gilson D, Ash D, Driver I, et al. Therapeutic ratio of photodynamic therapy in the treatment of superficialkin and subcutane man. Br J Cancer, 1988, 58 (5):

5、 665 6675. Moriwak(省略)6. Ris H B,(省略)7. Sharman(省略)8 Kennedy J C, Pottier R Hlinically useful photosensitizer for photodynamic therapochem Photobiol B, 1992, 14 (4): 2755 2929.Azab M, Boyer D r N M, et al. Verteporfin therapy of subfoveal minimally classiscularization inage-related macular degenerat

6、ion: 2-year results of a randomized clinical trial. Arch Ophthalmol, 2005, 123 (4): 4485 457二、研究开发内容及结果2.1 、“光汰净”的实验室合成及中试化生产、B -单羧基取代酞菁锌(B -ZnPcCOO)的实验室合成及纯化图(略)B -ZnPcCOO化学结构B -ZnPcCOOH是（省略）摸索出一条较为理想的实验室制备路线:图（略）B -ZnPcCOO实验室合成路线图在带有回流装置和搅拌子的取15.00g上述所制备的B-单（省略）酰胺取代酞菁锌于250ml的三颈瓶中，（省略）、“光汰净”（即ZnPc-

7、5K）的实验室合成及纯化图（略）“光汰净”（即ZnPc-5K）的化学结构“光汰净”的合成我们 （省略），其制备方法如下图所示：图（略）“光汰净”实验室合成路线图（省取B -单羧基取代酞菁锌（B -ZnPcCOOH 0.05 mmol ,略）依利特P230高效液相分析半制备系统ZnPc-5K的纯化 （省略）半制备方法及最终得到的样品纯度分析如下所示:表1:半制备梯度洗脱方法时间（min）流速(ml/mi n)流动相A （水，含1%。TFA）百分比流动相B （甲醇：乙 腈=1: 1,含 1%TFA） 百分比检测波长（n m）图（略）经过半制备纯化后的样品HPLC分析谱图、“光汰净”（即ZnPc-5

8、K）的中试生产路线“光汰净”的产业化生（省略）Wang树脂的制备。福建省功能材料工程研究中心中试生产线（坐落于福建省龙华药业）B -ZnPcCOOH中间产品的制备工艺已获得专利授权（相关证明请查阅附件），（省略）（1）五聚赖氨酸Wang树脂的制备，根据下一步的合成要求，我们通过自 主设计并委托上海吉尔生化有限公司进行生产，第一批产量50g。为了保证“光汰净”的质量，我们在完成了 （省略）2） 最后的偶联合成及分离纯化，中试生产工艺流程图图（略）生产过程实景图2.2 、“光汰净”的结构表征及杂质鉴定2.2.1 、结构表征 -紫外可见光谱：“光汰净”在 DMF 溶剂中的紫外最大吸收峰在 678 n

9、m“光汰净”在 DMF 中的紫外 -可见吸收光谱图2.2.2 、结构表征 -红外光谱：分析“光汰净”的红外光谱图显示： .（省略）图（略）“光汰净”的红外光谱图2.2.3 、结构表征 -质谱“光汰净”理论上分子量 M 为 1262.8，该化合物的质谱图显示该化合物 m/z 1263.6 的峰为M+H +, m/z 632.1 的峰为M+2H2+。图（略）“光汰净”的质谱图2.2.4 、结构表征 -1H 核磁共振“光汰净”的质子核磁共振谱图的分类归属所示 .（省略）“光汰净”的 1H 核磁共振谱图及其指认2.2.5 、制备过程中的杂质鉴定为了确定制备过程中，到底产生了那些主要杂质及副产物。我们

10、对。进行了液质联用分析，从图中发现。 。经过分析 及检验，我们判断。知道了主要杂质成分，使得我们 制备分离的目标变得更加明确简单。图（略）“光汰净”粗产品的 HPLC 分析图图（略）主峰的质谱分析图图（略）次峰的质谱分析图2.3 、“光汰净”的体外光动力药效学研究2.3.1 、细胞摄取光敏剂含量的测定：（省略）（1）以.（省略）（2） 收集对数期细胞， .（省略）（3）37 C、5% CO2条件下孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），（省略）（4） 置37C, 5% CO2恒温箱中孵育2小时后，（省略）（5） 细胞所摄取光敏剂的含量测定 .（省略）（6） 细胞消化液总蛋白含量的测定：根据l

11、owry 蛋白测定法，在 96孔（省略）（7） 同上法测定细胞提取 .（省略）图（略）ZnPc-5K 与 ZnPc-S4 对不同细胞的摄取比较（ ZnPc-CO-（Lys）5 代表 ZnPc-5K）232、亚细胞定位测定： .（省略）的步骤如下：（1） 收集（省略）（2）弃去培养液，.（省略）（3） 孵育（省略）（4） 利用激光扫描共聚焦显微镜 .（省略）（5） 亚细胞定位测定结果表 （省略）图(略)ZnPc-5K 与 ZnPc-S4 的亚细胞定位(ZnPc-C0-(Lys)5 代表 ZnPc-5K)2.3.3 、体外抗肿瘤光动力学：（省略）展“光汰净”的体外光动力学实验研究。实验步骤如下：2

12、）其中六组细胞.（省略）（3） 共同（省略）（4） 在37C、5% CO2的条件下培养 （省略）（5） 加入100 h含10% SDS的0.01 N HCI溶液终止反应后， .（省 略）（6） 确定光敏药物在特定条件下对特定细胞的半数抑制量。 （省略）（7） ZnPc-5K与ZnPc-S4对不同细胞 （省略）图（略）ZnPc-5K 与 ZnPc-S4 的体外光动力学研究（ ZnPc-（Lys）5 代表 ZnPc-5K）2.4、“光汰净”的体内光动力学研究、小鼠S180肉瘤模型的建立及光动力抗肿瘤活性：（省略）具体操作步骤如下：（a） 将.（省略）（b） 用无菌生理盐水 （省略）（3）给药12小时后，.（省略）（4） 10天后，（省略）（5） 实验结果显示： （省略）ZnPc-5K 对 S180 肉瘤的生长抑制作用242、小鼠肝癌H22肿瘤模型的建立及光动力抗肿瘤活性：（省略）具体操作步骤如下：（a） 选择.（省略）。（b） 接种后四天，.（省略）“光汰净”（ZnPc-5K）小鼠体内抗H22肝癌肿瘤光动力学实验步骤:（1）