高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量

1、    高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量        摘要目的：测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量。方法：采用聚酰胺柱层析分离提取，高效液相色谱法测定消痒涂膜剂中黄芩苷的含量，以C18为固定相，甲醇-水-磷酸(53470.2)为流动相，检测波长276nm。结果：线性范围0.090.45g，平均回收率为94.77%，RSD=0.58%。结论：方法准确、可靠、重现性好。关键词消痒涂膜剂；黄芩苷；聚酰胺柱层析；高效液相色谱法Determination of baicalin

2、in sheet Xiaoyangtumo by high performance liquid chromatographyHua Liqun(Hua LQ)(Hubei University Hospital,Wuhan 430062)ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a method for determination of baicalin in sheet Xiaoyangtumo.METHOD:Baicalin in sheet Xiaoyangtumo was extracted by polyacrylamide column chromatogra

3、phy and determined by high performance liquid chromatography with ODS column.The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid(53470.2,v/v).Detection wavelength was at 276nm.RESULTS:The linear range of baicalin was 0.090.45g and the average recovery was 94.77% with RSD=0.58%.CONCLUSION:The method

4、is accurate and reliable with good reproducibity.KEY WORDSXiaoyangtmo,baicalin,polyacrylamide column chromatography,HPLC消痒涂膜剂是由黄芩、马齿苋、蛇床子、苦参等4味中药经提取，再加聚乙烯醇(PVA)组成的复方液体制剂。具有清热、燥湿、止痒之功效。经临床观察，对湿疹、皮炎疗效甚好。为了控制其质量，保证临床用药安全有效，对处方中主药之一黄芩进行了质量控制，以高效液相色谱法测定黄芩苷含量。方法准确、可靠、重现性好。现报道如下。1仪器与试剂LC-9A HPLC色谱仪(日本岛津)；S

5、PD-6AV紫外可变检测器；C-R4数据处理机。黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯。水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。2处方及制备方法2.1处方：黄芩80g,马齿苋80g,苦参80g,蛇床子60g,PVA2.4g,共制成120ml。2.2制备方法：按处方称取黄芩、马齿苋、苦参、蛇床子，水煎2次，每次1.5h,煎煮液浓缩至21(生药煎液)放冷，加95%乙醇至含醇量为50%，边加边搅拌，沉降48h。取上清液回收乙醇至无醇味，加水至21,沉降24h。水浴蒸发浓缩至40ml。将2.4g PVA溶于80ml水中，水浴加热(不超过100)成透明溶液，加入上述浓缩液至120ml,搅拌均匀

6、，即得。3方法与结果3.1对照品溶液：精密称取黄芩苷对照品适量，以甲醇溶解并定量稀释制成0.045mg/ml的溶液。3.2样品溶液：精密量取样品及缺黄芩的空白样品各2ml,分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，分别精密吸取1ml加在聚酰胺柱上(0.5g柱层析用聚酰胺以60%乙醇湿法上柱，水冲洗备用，柱内径1.0cm),先用水20ml以8滴/min的速度洗脱，弃之水洗液，再用60%乙醇以8滴/min速度洗脱，收集洗脱液25ml,即得样品溶液或空白样品溶液。3.3标准曲线的制作：精密吸取对照品溶液1,2,3,4和5ml分别置10ml量瓶中，以甲醇定容。分别吸取20l进样，测峰面积。色谱条件:

7、CLC-ODS C18柱(?6.0×150mm)、流动相为甲醇-水-磷酸(53470.2),流速1ml/min。柱温室温，检测波长276nm。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，用最小二乘法进行计算，回归方程为:Y=301366.67X-4471.52,r=0.9992。表明黄芩苷在0.090.45g范围内线性关系良好。3.4对照品、样品及空白样品溶液HPLC谱：取对照品溶液3ml,用甲醇稀释至10ml,分别吸取该溶液和上述样品溶液，及空白样品溶液各20l进样测定，测得HPLC色谱，见1。1HPLC谱A-对照品；B-样品；C-空白样品3.5稳定性试验：分别精密吸取样品溶液20l,每小时

8、进样1次，测定黄芩苷峰面积，连续6h,以后12h,24h分别测定1次，结果峰面积基本不变，平均RSD为2.15%。3.6精密度试验：精密吸取对照品溶液3ml,于10ml量瓶中，加甲醇定容，取20l进样测定峰面积。同日内进样5次，测定日内差异，连续5d，每天进样1次，测定日间差异。结果日内RSD为1.21%，日间RSD为1.78%。3.7重现性试验：取同一批号样品6份，分别照样品溶液项下的方法进行操作，即得6份同一样品的供试溶液，分别吸取20l进样测定峰面积，平均峰面积为78473.8,RSD=2.12%。3.8回收率试验：将不同浓度的对照品溶液加入到一定量的空白样品溶液中，以下同样品溶液“加水

9、稀”项下操作，即得空白加样液。吸取20l进样测峰面积，以标准曲线法计算回收率，结果见表1。表1回收率试验(n=3)编号加样量(mg)测得量(mg)回收率(%)(%)RSD(%)13.823.6194.5024.744.5295.3635.275.0295.2694.770.5844.344.1194.7054.524.2594.033.9样品含量测定：准确吸取样品溶液20l,按上述条件进样测峰面积，积分值代入标准曲线中进行计算，结果见表2。 表2样品含量测定编号含量(mg/ml)平均含量(mg/ml)RSD(%)13.753.793.713.751.0723.813.843.893.851.0534.124.174.134.140.644讨论4.1黄芩苷是一种黄酮苷，采用聚酰胺颗粒柱层析，可以去掉部分杂质。从色谱及回收率可见样品中其它成分对黄芩苷的测定无干扰。4.2黄芩苷测定方法有紫外分光光度法1、薄层扫描法2、HPLC法3等。本文采用HPLC法进行测定。实验发现，分离结果与磷酸的量关系甚大，采用本文流动相分离效果较好。4.3本实验准确可靠、重现性好，根据实验结果，暂定本品每1ml黄芩苷含量不得低于3.0mg。 作者单位：武汉 430062 湖北大学校医院参考文献1石淑琴，郭君，阚志