精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用

1、    精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用杨昌国许叶张抗建立一个新的分析方法，或引进新的方法，试剂和仪器都应对它们的技术性能如精密度，方法比较，线性范围，以及干扰等作出评价。美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订了一套评价方案(evaluation protocols)，能客观而正确地对上述技术性能作出评价。近年，国外发表的方法学研究和评价研究中采用上述评价方案者逐渐增多，笔者在访美时得到这套文件，开始在方法学研究中应用，现将精密度评价和方法比较的应用实例介绍于下。1精密度评价11.1目的评价分析方法、试剂和仪器给出结果的可重复程度

2、，反映精密度好坏的指标是变异系数CV。CV越小精密度越好，反之则差，故有人称其不精密度。用本方案评价可以计算出批内、批间、日间和总CV，其中总CV最重要，它代表整个分析体系的可重复程度。1.2评价前的准备1.2.1对于评价对象(如新建立的方法，或新引进的方法，试剂和仪器)均应有一个熟悉过程，对评价方案亦应熟悉。1.2.2实验用的试剂应是同次配制，商品试剂盒和参考物应为同一批号，仪器应处于良好的工作状态。1.2.3精密度实验用的标本一般选择2个(亦可更多)，一个在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值，被测物在疾病时增高者用高值，降低者用低值。实验标本的介质(matrix)应与临床标本一致

3、，并应妥善保存，应保证在整个实验过程中稳定。1.2.4先作一个初步的批内精密度测定，即一个标本重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。1.3评价步骤以甘油三酯定值血清的精密度评价为例。1.3.1数据测定2个标本每天测定2次(2次测定间隔不得少于2小时)，每次测定均作双份，共测定20天。每次测定至少做一个质控。1.3.2数据整理于表1。表1实验数据整理和几项计算(甘油三酯低值质控血清，mmol/L) 天数 次数 次数 次数平均 次数平均 日平均 结果1 结果2 结果1 结果2 1 0.960 0.950 0.990 0.980 0.955 0.985 0.978 2 0.920

4、0.930 1.010 1.010 0.925 1.010 0.968 3 0.986 1.014 1.010 0.960 1.000 0.985 0.992     18 0.948 0.920 0.955 0.937 0.934 0.946 0.940 19 0.908 0.936 0.890 0.917 0.922 0.904 0.913 20 0.889 0.944 0.901 0.920 0.917 0.910 0.914 1.3.3离群点的检查如每次双份测定的差值超过初步精密度测定时±标准差的5.5倍(是99.99%的上限值)，这对数据为“离群点”，应

5、弃去或重做。1.3.4统计分析见表1、2和计算公式。本例的批内CV为2.23%,批间CV为2.46%,日间CV为3.48%,总CV为4.19%。日平均均值0.949s日间(B)0.033CV日间B/日平均均值×100%3.48%n测定天数CV批间A/日平均均值×100%2.46%CV批内s批内/日平均均值×100%2.23%CV总s总/日平均均值×100%4.19%表2实验数据的几项计算 天数 次数(结果12)2 次数(结果12)2 次数平均-次数平均 1 0.0001 0.0001 0.0009 0.0001 0.0000 0.00723 3

6、 0.000784 0.0025 0.000225   18 0.000784 0.000324 0.000144 19 0.000784 0.000729 0.000324 20 0.003025 0.000361 0.000049 C0.0149 D0.0210 E0.0218 2方法比较22.1目的评价一个新建立的方法或新引进的方法和试剂给出的结果是否准确。在实验的浓度范围内两方法间的平均差异，并确定偏差。理论上，两种方法间的差异均作为试验方法的偏差。因此比较方法应是参考方法或推荐方法，如该测定没有参考方法或推荐方法亦可以用公认的常规方法。但须具备：(1)比试验方法有更好的精密

7、度。(2)干扰影响已知。(3)与试验方法使用相同的计量单位。2.2比较前的准备工作2.2.1实验者应有足够的时间熟悉所用的仪器，试验方法和比较方法，同时还要熟悉比较方案。2.2.2实验标本应收集新鲜的正常和异常的临床标本，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例，见表3。如不能及时测定，标本应妥善保存并应在分析物的有效保存期内测定。表3方法比较中实验资料分配的建议 项目 A组 B组 C组 D组 E组 Glu(mg/dl) 50(10%) 51110(40%) 111-150(30%) 151-251(10%) 251-SL(10%) BUN(mg/dl) 15(10%) 1225(

8、40%) 26-50(20%) 51-100(20%) 101-SL(10%) Cr(mg/dl) 1.0(20%) 1.12.5(30%) 2.6-5.0(20%) 5.1-10(20%) 10-SL(10%) Na(mmol/L) 120130(20%) 131140(40%) 141-150(30%) 151-160(10%)  K(mmol/L) 3.0(20%) 34.5(40%) 4.5-6.0(30%) 6(10%) Cl(mol/L) 8095(30%) 96105(40%) 106-120(30%)  CO2(mmol/L) 15(10%) 15

9、20(30%) 21-30(40%) 31-40(10%) 41-SL(10%) Ca(mg/dl) 8(10%) 8.19(20%) 9.1-11(40%) 11.1-13(10%) 13.1-SL(10%) Fe(g/dl) 50(20%) 51150(50%) 151-300(20%) 301-SL(10%)  iP(mg/dl) 2.5(10%) 2.64.5(60%) 4.6-6.5(20%) 6.5(10%) UA(mg/dl) 3.0(20%) 3.15(20%) 5.1-8(20%) 8.1-10(20%) 10.1-SL(20%) TP(g/L) 50(1

10、0%) 5170(40%) 71-90(40%) 90(10%)  Alb(g/L) 30(10%) 3140(40%) 41-50(40%) 50(10%) T-Bil(mg/dl) 01.0(30%) 1.12(30%) 2.1-5(20%) 5(10%) Cho(mg/dl) 150(10%) 151250(40%) 251-350(30%) 350(20%) TG(mg/dl) 75(10%) 76125(30%) 126-200(30%) 201-300(10%) 301-SL(10%) ALP(U/L) NL/2(30%) NL/2-NL(2

11、0%) NL-2NL(20%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%) r-GT(U/L) 0-NL(40%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(10%) 4NL-SL(10%) ALT(U/L) NL/2(20%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%) AST(U/L) NL/2(20%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%) LD(U/L) NL/2(15%) NL/2-NL(20%) NL-2NL(30%) 2NL-5NL(20%) 5NL-SL(1

12、0%) CK(U/L) NL/2(10%) NL/2-NL(25%) NL-2NL(30%) 2NL-5NL(20%) 5NL-SL(10%) Amy(U/L) 0-NL(40%) NL-2NL(30%) 2NL-4NL(20%) 4NL-SL(10%) Hb(g/dl) 9.0(15%) 9.1-12(25%) 12.1-17(50%) 17.1-SL(10%)  RBC(×106) 3.0(10%) 3.1-4(30%) 4.1-6(50%) 6.1-SL(10%) WBC(×103) 2.0(10%) 2.1-5(20%) 5.1-11(40%)

13、11.1-25(20%) 25.1-SL(10%) Platlets(×103) 50(10%) 51-150(20%) 151-300(30%) 301-450(30%) 451-SL(10%) 注SL可测范围上限NL正常范围上限2.3.1样品大小至少为40个标本，每个标本用2种方法分别作双份测定，因此样本应有足够的量，如临床标本的量太少可将2份含量相近的标本混合。2.3.2每天测定8个标本，双份测定时第一次按顺序1，27，8，第二次8，72，1，共测5天，将数据整理成表4。表4淀粉酶测定试验方法(Y)与BM试剂(X)比较(U/L) 样品 试验方法 比较方法 试验方法 比

14、较方法 结果1 结果2 结果1 结果2 结果1-2 结果1-2 1 1792 1795 1672 1676 3 4 2 1755 1751 1561 1562 4 1 3 1598 1595 1480 1483 3 3     38 35 36 39 40 1 1 39 72 75 79 78 3 1 40 54 52 58 55 2 3 2.3.3方法内双份测定的离群点检查按表5中的公式计算，分别得出每一标本的DX和DY以及DX'和DY'。如分别超过DX和DY以及DX'和DY'值的4倍为离群点，应剔除，如出现一个以上离群点，应查找原因，必要

15、时重做。表5方法内复测结果检查 Xi 11672Xi 21676 Yi 11792Yi 21795 DXi|xi 1xi 2|16721676|4，  DYi|Yi 1Yi 2|17921795|3，     同样： I Xi 1 Xi 2 Yi 1 Yi 2 DXi DYi DXi' DYi' 1 1672 1676 1792 1795 4 3 0.00239 0.00167 2 1561 1562 1755 1751 1 4 0.00511 0.00228 3 1480 1483 1598 1595 3 3 0.00202

16、0.00202 38 39 40 35 36 1 1 0.0253 0.0282 39 79 78 72 75 1 3 0.0127 0.0382 40 56 55 54 52 1 2 0.0180 0.0377  进位制11  进位制12    本例方法内未发现离群点 表6离群点检查 Xi 11672 Xi 21676 Yi 11792 Yi 21795 Ei 1|Yi 1Xi 1|17921672|120 Ei 2|Yi 2Xi 2|17951676|119 Ei 1'|Yi 1Xi 1|/Xi 1120/16720.0718 Ei

17、 2'|Yi 1Xi 2|/Xi 2119/16760.0710 同样： I Ei 1 Ei 2 Ei 1' Ei 2' 1 120 119 0.0718 0.0710 2 185* 189* 0.1180 0.1210 3 118 112 0.0797 0.0755  38 4 4 0.1030 0.1000 39 7 3 0.0886 0.0385 40 2 3 0.0357 0.0545  E的控制限值4×E4×42167.96进位168  E'的控制限值4×E'0.2416 本例二方法间出现2个离群点 表7适用范围的检查(相关性计算)和回归计算  (r0.975，r20.950为合适范围)  2.3.4试验方法与比较方法间的离群点检查，可按表6中的公式计算，控制限为4 E。本例的标本出现2个离群点。2.3.5试验方法(Y)与比较方法(X)相关性按表7中的公式计算，r0.975或r20.95说明二法的相关良好。作者单位：杨昌国许叶(宁波市临